浅谈免疫球蛋白在免疫中的作用

正养殖业的健康发展离不开免疫,健康的畜禽在疫苗刺激下能产生相应的免疫应答。免疫细胞被抗原刺激后,由B细胞分化成熟为浆细胞后所合成,分泌一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白,从而阻断病原体对机体的危害,使病原体失去致病作用。抗体是生物学功能上的概念,而免疫球蛋白是化学结构上的概念,所有抗体的化学基础都是免疫球蛋白。但所有的免疫球蛋白不都是抗体(如丙种球蛋白)。     

豌豆叶片脱落酸免疫荧光组织化学检测定位技术(简报)

植物激素在体内的存在部位和作用位点一直是人们关心的问题。由于它们的分子量小、含量低、代谢活性强,直接在植物组织和细胞内定位甚为困难。但若根据抗原抗体间特异结合的原理,就有可能对植物激素进行细胞或组织的定位分析。一般可采用标记物(荧光、酶或胶体金)标记抗体,使其和固定在组织或细胞中的抗原进行反应形成抗原-抗体复合物,从而显示出     

应用酶联免疫吸附法(ELISA)诊断家蚕微粒子病的研究

感染微粒子病的家蚕中肠壁匀浆作抗原,注射于家兔制备抗血清。用戊二醛简易法将辣根过氧化物酶与抗体蛋白交联,制成酶联免疫抗体。用ELISA直接法或双抗体(夹心)法均可将未发现孢子的患病中肠检出阳性反应。用分光光度计对聚苯乙烯塑料多孔板吸附免疫反应的读数(OD值)表示更则为准确。 酶联抗体—抗原点滴法试验(AST),将抗原滴于硝酸纤维薄膜,再加入酶标抗体,可获得肉眼判别阳性的斑点。     

罗非鱼消化道5-HT内分泌细胞的免疫组织化学研究

用链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物(Strept Avidin Biotion -peroxidase Complex SABC )免疫细胞化学方法,对罗非鱼消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位.结果表明:5-羟色胺细胞在消化道各段都有分布,其中胃体部密度最大,其次是幽门和喷门处,后肠的密度最小.本文主要讨论了5-HT内分泌细胞在罗非鱼消化道免疫细胞化学定位,可为鱼类的内分泌学提供主要依据.     

琼脂扩散试验的影响因素及注意事项

<正>琼脂扩散试验包括琼脂双向单扩散试验和琼脂双向双扩散试验,后者是最常用的琼脂扩散试验,一般用于抗体或抗原的定性检测,其原理是可溶性抗原与相应的抗体(抗血清)在琼脂凝胶中向四周自由扩散,如果抗原和抗体相对应,则在二者比例适当处形成肉眼可见的白色沉淀线,反之则不会出现沉淀线。常用已知抗原检测未知的血清样本,也可用已知抗血清检测未知抗原样本。1琼脂扩散试验的影响因素1.1琼脂板的制备     

放射免疫法诊断弓形体病的研究——Ⅰ.RIPEGA法检测急性弓形体病猪血清中循环免疫复合物和抗体

弓形体病是人畜共患的原生动物寄生虫病.目前国内对本病的诊断虽有一系列的血清学和组织学检测方法,但是对急性弓形体病抗原血症期的抗体水平和循环免疫复合物的研究尚未见报道.本试验根据~(131)Ⅰ标记抗原与未标记抗体或免疫复合物呈现特异性反应或竞争性结合的免疫学原理,用适当浓度的聚乙二醇(PEG)分离免疫复合物,按照带有放射性抗原是否沉淀,确定其有无放射性,     

鱼病诊断技术

鱼病防治技术是水产养殖业的重要组成部分,鱼病诊断技术又是鱼病防治的基础,近年来国内随着鱼病防治工作的加强,人类医学上和动物医学上的一些技术用于鱼病的诊断。鱼病诊断技术正在向健康、快速、准确的方向发展。目前主要有以下几种诊断技术。1.荧光抗体技术(FAT、免疫荧光技术)在免疫学、生:是物化学和显微镜的基础上建立起来的一项技术。以荧光色素标记病鱼的抗原或抗体,与其相应的抗原或抗体相结合,在荧光显微镜下呈现一种特异性的荧光反应。该技术的优点是:特异性强,敏感性高,检出速度快。缺点是:非特异性染色尚未完全解决,结果判断…     

免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织切片进行检测。试验结果证明,该免疫组织化学方法具有良好的特异性、直观性,简单易行,可以对猪肺巨噬细胞中的存在的PCV2病毒抗原进行准确的定性和定位诊断。     

己烯雌酚人工抗原的合成和酶免疫检测方法的建立

通过化学方法合成己烯雌酚单羧甲基醚,并通过核磁共振和质谱进行鉴定;分别用混合酸酐法和碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成己烯雌酚人工抗原,经紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,并制备了抗己烯雌酚的特异性多克隆抗体,同时建立了己烯雌酚的酶免疫检测方法,这对动物性食品中己烯雌酚的残留检测有重要意义。     

牛白血病免疫酶技术的研究

本文介绍用酶联免疫吸附检测法(ELISA)检测牛白血病病毒(BLV)的抗体。以FLK-BLV细胞培养液制备的免疫扩散(ID)用的粗提抗原,经ConA-Sepharose 4B亲和层析,或先经乙醚处理,再经Sephadex G-150层析等方法,分别提取了gp和p抗原。用gp抗原作ELISA,对91份牛血清样品进行检测,阳性共67份,比微量免疫扩散(MID)高14％,两者的符合率为85％。用p抗原作ELISA对240份牛血清样品进行检测,阳性占162份,比MID法高12％,两者的符合率为87％。用gP抗原对33份样品和用p抗原对160份样品进行三次重复试验,它们的变异系数在10％以内的分别为100％和92.5％。ELISA抑制试验表明,p抗原和gP抗原对BLV抗体的特异性良好。     

SV40-LT基因的原核表达及免疫原性检测

为了获得纯化的SV40-大T抗原(SV40-LT)及其特异性抗体,本研究利用原核表达系统高效表达了SV40大T抗原的高抗原指数区域,然后将纯化的大T抗原免疫试验兔,制备了相应的特异性抗体。经蛋白免疫电泳和ELISA方法检测,结果表明本研究获得的原核表达产物,不仅具有较好的免疫原性,而且能够诱导试验兔产生较高的抗体水平(抗体效价为1∶6 400)。     

培氟沙星抗体的制备

为了制备培氟沙星(PFLX)抗体,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法将培氟沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原PFLX-BSA和检测抗原PFLX-OVA,用PFLX-BSA免疫小鼠以获得高效价的抗体。结果显示,免疫抗原PFLX-BSA紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特性,其最大吸收峰在277.5nm处,说明载体蛋白BSA与PFLX成功偶联,可用于动物免疫。检测抗原PFLX-OVA最大吸收峰在275nm处,说明载体蛋白OVA与PFLX成功偶联,可用作检测抗原进行包被。间接ELISA检测结果表明,所得小鼠抗血清效价较高,均达1∶32 000以上,说明有特异性抗体产生。该研究成功制备了抗培氟沙星抗体,也进一步证明药物偶联成功。     

家蚕Bm595的表达、组织分布及亚细胞定位

 【目的】从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条新基因Bm595,分析Bm595在家蚕体内的表达和定位情况。【方法】利用生物信息学分析Bm595序列,并构建重组表达质粒在大肠杆菌中诱导表达,以纯化的融合蛋白抗原,制备多克隆抗体。用荧光定量PCR和Western blot方法分析Bm595基因在家蚕各组织中的分布。用免疫细胞化学的方法研究Bm595蛋白的定位情况。【结果】Bm595在五龄幼虫的转录水平最高,卵中最低。Bm595在家蚕五龄幼虫各组织中的转录水平由高到低依次为：睾丸、丝腺、肠、头、卵巢、脂肪体、表皮、气管。在表达水平方面,睾丸的表达量最高,其次是丝腺和头,脂肪体有较明显的表达。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞化学试验,Bm595主要分布于细胞核内。【结论】在mRNA、蛋白质表达和细胞水平对Bm595进行初步表达分析和定位分析,为进一步研究该蛋白在家蚕中的功能提供重要依据。     

小鼠抗重组山羊胎盘催乳素多克隆抗体的制备及其在山羊胎盘组织中定位的研究

用rcPL对6-8周龄的昆明小鼠进行免疫注射制备多抗,第3次加强免疫后第6天采集少许血清,用琼脂凝胶免疫扩散（AGID）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体的产生情况;分娩后立即通过剖腹产的方法获得山羊胎盘组织,用获得的抗血清通过免疫组织化学（IHC）和间接荧光抗体试验（IFA）的方法定位胎盘催乳素。结果表明,琼脂扩散检测抗原浓度为100μg／mL,用ELISA中酶标仪检测450nm处OD值,免疫血清与阴性对照的比值P／N为7．77;IHC和IFA显示胎盘催乳素在肉阜和子叶的双核细胞及单核细胞中表达。使用背部皮下多点注射的方法对昆明小白鼠进行免疫来制备重组山羊胎盘催乳素多克隆抗体是可行的,制备的抗体能满足免疫组织化学和荧光免疫组织化学检测胎盘催乳素的要求。     

牛血液型研究(Ⅳ)——关于牛红细胞血型抗体的制备

用43种国际标准抗血清检查了45头延边黄牛的血型,以此43头牛血液作为标准红细胞抗原,分析、分离了同种免疫(lssoimunization)的多价血清(Polyvolentserum)。采用免疫吸附法(lmmunoadsorptionTest)从7头牛的免疫血清中分离、制备 Z′、I_1、T_1、C_2、G_2、A′X、J、U′等8种牛红细胞血型抗体。用相互吸附法(Interact adsorptionTest)验证了上述抗体的特异性,并同相应的国际标准抗血清的溶血反应模式进行了比较。其结果,对45种样本的反应模式,与国际标准抗血清完全一致。     

胶乳凝集试验诊断水牛巴贝斯虫病的研究

应用体外培养所得的可溶性牛巴贝斯虫(Brabesia bovis)抗原进行胶乳凝集试验的结果表明,本抗原与其它血液原虫,如伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)、边缘无浆体(Anaplasma marginale)、双芽巴贝斯虫(B.bigemina)、环形泰勒虫(Theileria annulata)及瑟氏泰勒虫(T.sergenti)之间无交叉反应。非特异性凝集因子试验、胶乳凝集抑制试验也表明本抗原有较强的特异性。去脾水牛犊人工感染牛巴贝斯虫后第3天,应用胶乳凝集试验即可在血清中查到相应抗体,感染后12～15天抗体滴度达到高峰(1:2560);对成年水牛,感染后第8天应用本法即可查到抗体,并维持较高的抗体滴度达5个月。致敏抗原在4℃和20～30℃可分别保存6个月和3个月。此类抗原作为本病的诊断抗原是可行的。     

反向被动血凝检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

本文首次报道一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的反向被动血凝法(RPHA),并对其特异性、敏感性和实用性进行了探讨。还用该RPHA法比较了不同纯度抗原制备的抗体的免疫学特性和应用价值。最后,对单克降抗体(McAb)用于RPHA的可能性也进行了一些试验。 结果表明:1.用RPHA法检测IBV有快速、敏感、简便而准确的优点;2.病毒抗原经一次超速离心处理,即可达到RPHA的要求,3.抗体谱较窄或效价较低的McAb,可能不适用于IBV的RPHA方法。     

诺氟沙星多克隆抗体的制备

为了制备诺氟沙星(NFLX)抗体,将修饰成功的NFLX-NH2分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备完全抗原,用免疫抗原免疫小鼠,获得了高效价的诺氟沙星多克隆抗体.     

鹅病的血清学检验

正鹅病的血清学检验也是兽医临床工作中常采用的实验室诊断技术。包括凝集试验、琼脂扩散试验、血凝试验和血凝抑制试验等。1凝集试验凝集反应具有重要的实践意义,利用已知抗原(称为凝集原)检查未知抗体(称为凝集素);也可用已知抗体诊断未知抗原(如被检病料中分离的未知病菌),从而达到鉴定抗体(或抗原)和诊断疾病的目的。     

几种不同免疫程序制备抗弓形虫高免血清的比较

用弓形虫血清抗体阴性的健康家兔,以4种不同的免疫程序皮下接种弓形虫速殖子裂解抗原制备高免血清.研究结果表明,先以完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂分别进行一免和二免,然后再以抗原进行三免或四免制备高免血清,其抗体效价高达1:4096(IHA),与每次都使用抗原的传统免疫程序制备的抗体效价相当,但所用抗原剂量减半,该法优于另外2种免疫程序.