水稻AFLP指纹图谱的引物选择研究

 通过对适合制作水稻品种AFLP指纹图谱的引物进行研究 ,初步建立了一套快速有效地制作AFLP指纹的引物选择法 :第 1步 ,选择亲缘关系相近的 3组以上材料 ,保证组内材料遗传差异较小 ,组间有一定差异 ;第 2步 ,利用两端相同的 16对 2 +2引物组合选择扩增 ,初步选出具有一定多态性的引物 ;第 3步 ,对具有一定多态性的引物重新组合 ,构成两端不同的 2 +2引物组合 ,选出多态性较高的引物组合 ;第 4步 ,将多态性较高的 2 +2引物的一端增加 1个选择碱基 ,构成 2 +3或 3+2引物组合 ,筛选多态性更强、谱带较多、质量较好的引物组合 ;第 5步 ,随机选择部分品种验证所选引物的有效性。选出了M2 1P87和M73 P17等多态性高、谱带多、带纹清晰的引物组合 ,为水稻品种AFLP指纹图谱制作奠定了基础     

小麦条锈菌AFLP体系的优化

[目的]优化小麦条锈菌AFLP体系。[方法]以小麦条锈菌大田混合菌系为材料,采用改良CTAB法提取DNA,探索酶切、PCR过程,优化小麦条锈菌AFLP体系,并从64对引物中筛选出稳定、高效的引物组合。[结果]改良CTAB法有较好的破壁效果,所提DNA纯度高,条带清楚,无污染,适合AFLP操作。酶切3.0、3.5 h的效果相同,扩出的片断在100~2 000 bp,可进行预扩。TaqDNA聚合酶为0.5 U时,电泳图中出现了较亮的条带,片断大小在100~2 000 bp。16对引物组合可以扩增出较稳定的条带。[结论]优化的小麦条锈菌AFLP体系为:25.0μl酶切体系,37℃酶切3.0 h,10.0μl连接体系在22℃条件下连接过夜,连接产物、预扩产物分别按1∶10、1∶30的比例用ddH2O稀释后用于预扩和选择性扩增。     

东帝汶适种水稻品种的筛选研究

[目的]筛选出适合东帝汶种植的高产优质水稻品种.[方法]引进国内14个常规稻品种和14个杂交稻品种在东帝汶Manatuto地区进行生态适应性研究,考察其株高、生育期、产量、穗粒数、结实率、千粒重等.[结果]常规稻CDNO2、金农丝苗品种表现好,生育期适中,适应性强,米质优良,符合当地居民饮食习惯.杂交稻Ⅱ优恩22、宜香107、华1917A/12WHZ7的产量显著高于对照,生育期短,结实率较高,千粒重大,抗性和米质较好.[结论]杂交稻Ⅱ优恩22、宜香107、华1917A/12WHZ7建议在东帝汶大面积示范和推广.     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究

[目的]探索基于AFLP的拮抗链霉菌DNA模板制备方法及其扩增体系,为AFLP技术在链霉菌乃至放线菌资源分析中的应用提供依据。[方法]以改进的CTAB法提取DNA,利用Pst I／Mse I型AFLP试剂盒及其反应体系进行扩增,采用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析扩增结果。[结果]提取了10个拮抗链霉菌菌株的基因组DNA,0.8％琼脂糖凝胶电泳检测显示其主带清晰,片段大小为37.64-40.86Kb,无降解现象,亦无RNA残留;其OD260/OD280为1.625-1.833;Pst I／Mse I双酶切产物琼脂糖电泳呈弥散荧光长带,说明酶解充分;筛选出的3对引物对DNA模板的扩增谱带清晰,多态性丰富。[结论]该研究建立的DNA模板制备方法及其扩增反应体系可用于链霉菌的AFLP分析。     

Comparison Between AFLP and RFLP Markers in Detecting the Diversity of Rice (Oryza sativa L.)

AFLP and RFLP were used to study the diversity of 20 rice cultivars. 15 primer combinations were used in the AFLP analysis and 47 - 118 bands were amplified in each lane. A total of 107 polymorphic bands were detected in the RFLP analysis using 49 RFLP probes. The cluster analysis based on RFLP data showed that 20 rice cultivars could be divided into an indica group and a japonica group, as did the AFLP data; however AFLP is more suitable in detecting the difference of pedigree and ecotype among the 20 cultivars.The genetic distance based on AFLP and RFLP data showed the same tendency, but AFLP markers increased the measure of genetic distance among intra-subspecific cultivars and decreased the measure of genetic distance among inter-subspecific cultivars relative to RFLP markers. That indicated that AFLP is more suitable than RFLP in the diversity study and RFLP is more suitable to study the indica-japonica differentiation of cultivars.     

中药附子的指纹图谱研究

采用反相离子对高效液相色谱法，对中药附子进行了指纹图谱研究。结果表明：该方法可使附子中的生物碱成分得到较好分离。确定了附子的7个共有峰，可有效地用于附子的鉴别以及附子的质量控制。     

陕西不同核桃品种指纹图谱构建

为实现核桃品种的高效、准确鉴定,提高良种利用率,收集21个陕西常见的核桃品种,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳与荧光毛细管电泳检测技术进行基因组多态性分析,从20对SSR引物中筛选出6对核心引物,构建不同核桃品种的SSR指纹图谱。结果表明,6对荧光引物共检测出54个等位基因位点,平均每对引物扩增9个。21个核桃品种间的遗传相似系数(GS)在0.59～0.93。进一步分析发现引物WJR265与引物WGA331结合后,再与WJR031、WJR281、WGA321、WGA032这4个引物之一任意组合即可将21个核桃品种完全区分开。用3对高效引物进行组合鉴定21份核桃材料,可以有4种不同组合。用6对引物构建供试核桃品种的分子图谱,为陕西地方核桃良种的快速鉴定和核桃指纹数据库建立提供了数据。     

太湖稻区32个水稻品种DNA指纹图谱的构建及遗传多样性分析

[目的]采用SSR标记构建太湖稻区16个常规粳稻品种和16个杂交水稻品种DNA指纹图谱并进行遗传多样性分析.[方法]以筛选出的12对多态性高、稳定性好且在染色体上分布均匀的引物作为核心引物,构建太湖稻区32个主要栽植水稻品种DNA指纹图谱,以NTSYS-PCV2.10软件分析遗传多样性.[结果]12对SSR引物在32份材料中共扩增出了47个等位基因,平均每对引物4.7个,变幅2～6个;12对引物的多态性频率（FP）平均值为0.627,变幅0.266～0.833;以遗传相似系数0.74为阚值可将供试32个水稻品种分成4类.[结论]太湖稻区32个水稻品种遗传多样性相对狭窄.     

水稻SSR－PCR的反应体系优化及RIL亲本间多态性引物筛选

[目的]为比较三组概率分析法和传统 QTL定位法,建立高效稳定的 SSR扩增技术体系,筛选出在双亲间具有多态性的引物。[方法]本研究利用水稻Ⅱ-32B和特青两个亲本对605对均匀分布于12条染色体的 SSR引物的扩增情况进行了初步筛选,并研究了其扩增多态性和最优 SSR-PCR反应体系[结果]结果表明：适宜水稻的 SSR-PCR反应体系（10μl）为10×Buffer 2μl,Mg2＋终浓度2.0 mmol/L, dNTP 终浓度0.5 mmol/L,引物终浓度1.0μmol/L,DNA模板1μl,Taq DNA聚合酶0.15 U。从分布于全基因组的 SSR引物中筛选出142对在双亲间具有多态性的引物。[结论]为完成后续的QTL定位研究奠定良好的基础。     

棕榈科植物DNA的提取及SRAP引物筛选

采用CTAB法提取棕榈科植物基因组DNA,选用4个棕榈科植物DNA作模板,对100个SRAP引物组合进行筛选,以条带清晰多态性丰富为引物筛选原则,最后共筛选出14个组合作为棕榈科植物SRAP分子标记的核心引物,为后续SRAP分析提供依据。同时还对SRAP-PCR扩增程序进行优化,在不影响扩增效果的前提下,节约了大量实验时间。     

桃AFLP技术反应体系的优化

以"珲春桃"与"正满早生"杂交获得的32株F_1代群体为材料,对影响桃AFLP技术分析体系的因素作了详细的探讨,优化出一套稳定、可靠的桃AFLP反应体系。经优化,得出最适宜的结果:酶切时间为6h、Mg- Cl_2浓度为1.75 mmol/L、预扩增产物稀释倍数为10倍。利用优化后的桃AFLP分析体系对该技术的重复性进行了验证,重复率可达90%。     

耐低氮水稻材料筛选及筛选指标研究

[目的]确定耐低氮和氮高效水稻筛选指标。[方法]采用田间试验的方法,设正常供氮和低氮胁迫2个处理,对106个水稻株系在成熟收获期的株高、穗长、有效穗数、生物产量、单株产量、千粒重和结实率7个性状进行研究。[结果]结果表明,相对有效穗数、相对生物产量和相对单株产量(低氮胁迫/正常供氮)对低氮胁迫敏感大,且在株系间变异大(CV分别为21.97%,21.29%和22.13%);相关分析表明,相对株高与相对有效穗数、相对生物产量呈显著或极显著正相关,相对结实率与相对单株产量呈极显著正相关。株高、有效穗数、生物产量、单株产量和结实率可作为耐低氮和氮高效水稻材料的筛选指标。[结论]该研究结果为氮高效和耐低氮水稻筛选及新品种培育提供理论基础。     

杞柳AFLP反应体系的建立与引物筛选

以杞柳F1群体为试验材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,经过酶切、连接、预扩增和选择性扩增,建立杞柳AFLP的反应体系,筛选EcoRI和MseI各16条选择性扩增引物组成256对引物组合。结果表明:320 ng基因组DNA采用5U EcoRI和MseI双酶切6 h,20℃连接12 h,连接产物稀释10倍进行预扩增,预扩增产物稀释15倍进行选择性扩增,选择性扩增产物采用ABI-3130检测,可获得条带清晰的指纹图;从256对引物组合中共筛选出98对多态性较高的引物组合。     

马铃薯品种遗传多样性的AFLP分析

利用AFLP分子标记技术对19份克新系列马铃薯品种进行了遗传多样性分析,用30对引物组合进行了初筛,选出7对有多态性的引物组合进行了详细研究。每对AFLP引物组合扩增出54￣90条带,共获得495条带,其中多态性条带为302条。AFLP分析表明19个材料的遗传距离介于0.2091￣0.7679之间,平均值为0.4811。聚类分析将19份材料划分为4类,其中第2类包括14个品种,占总数73.86%,表明多数品种亲缘关系较近,但有少数品种亲缘关系较远,说明克新系列马铃薯的遗传基础有所拓宽。研究表明:AFLP指纹分析技术具有很高的分辨率,适于进行马铃薯遗传多样性研究。     

兰属品种间遗传多样性的AFLP分析

为从分子水平上研究兰属植物的遗传多样性和建立适合的分子标记反应体系.本研究采用AFLP分子标记技术,对兰属植物的9个品种进行了遗传多样性分析.结果表明,筛选得到的8对引物共扩增出965条DNA片段,其中多态性条带为931条,平均1对引物扩增条带121条（多态性带116条）,多态性位点频率为95.87％,说明遗传多样性丰富.用NTSYS2＆#183;10进行UPGMA聚类分析,属于同种的品种聚在一起,与表型分类基本吻合.兰属植物间遗传相似系数变化范围为0.416-0.606.此分子标记技术体系可为兰属分类及种质遗传多样性分析提供技术依据.     

AFLP标记在两个芒果品种间杂交F_1代的多态性及分离方式

本文利用14对引物组合对AFLP标记在两芒果品种间(Keitt×Tommy)杂交F1代的多态性及分离方式进行的研究结果表明,AFLP标记在该F1代群体中的多态性较高,分离位点出现的平均频率是37.16%.分离方式有孟德尔分离、偏孟德尔分离及异常分离3种方式.3种分离位点出现的平均频率与数量分别为21.13%、149,15.74%、111,2.27%、16,其中孟德尔分离位点占分离位点总数的53.99%.该研究结果可为进一步利用该群体构建芒果AFLP遗传图谱打下良好的工作基础并提供一定的理论依据.     

银杏雄株亲缘关系的AFLP分析

[目的]研究29个中国银杏雄株材料的亲缘关系，以期为该树种雄株的分类、保存、利用等提供理论依据。[方法]从64对EcaR Ⅰ／Mse Ⅰ引物（其中MseⅠ引物为荧光标记物）中筛选出7对清晰、多态性高的引物，对来自中国的29个银杏雄株材料的亲缘关系进行了AFLP分析。[结果]7对引物共产生1173条谱带，187个特异位点和1145条多态带，多态带的比例平均为97．6％。每对引物鉴别效率达到100％。所有材料之间相似系数在0.38～0．82之间，供试材料遗传变异大。当相似系数为0．51，将全部试材可以分为2大类，山东的大部分材料聚为一类。[结论]同一产地内不同试材和不同产地的试材存在不同程度的遗传差异。供试材料的聚类与其地理位置的远近不完全相关，山东大部分银杏雄株试材亲缘关系较近，‘天目山4’、‘宁国’、‘郯城6’可能是比较原始的雄株。     

蒌蒿DNA提取、RAPD优化及引物筛选初报

为了能从分子水平探讨蒌蒿资源的遗传多样性、蒿属的系统分类和种质资源的鉴定,在此,报道采用小量法(SDS法)和大量法(CTAB法)提取蒌蒿DNA,建立优化的RAPD-PCR体系,并进行引物初步筛选。结果显示,两种抽提方法都可有效抽提出高质量的DNA,大量法得率要明显高于小量法,但小量法抽提的DNA也足够RAPD-PCR反应几十至上百次,不同的实验室可根据实验的需要进行选择。对两种方法抽提的DNA,都进行PCR扩增体系梯度摸索,最优的RAPD-PCR反应条件为:25μl反应体系中,含DNA模板约20ng,10×TaqDNA聚合酶缓冲液2.5μl,2μldNTPs(2.5mM),Mg2 2μl(25mM),TaqDNA聚合酶0.15μl(5U/μl),引物0.5μl(25μM),其余以双蒸水补充。在剔除了重复性差,条带模糊和单态的引物后,有九个引物表现稳定,扩增出来的条带清晰、多态性高。     

Screening of Drought Resistance Identification Indexes for Rice (Oryza sativa L.) Cultivars in Ningxia

The morphological characters, physiological characters, yield traits and yield per plant of total 49 rice cultivars from Ningxia were investigated under conditions of water stress and non-water stress so as to determine the relationship between each trait and yield per plant under water stress and the relationship between each relative character and drought resistance coefficient under water stress and non-water stress. The correlation, grey correlation, stepwise regression and path analyses showed that the til er number per plant, plant height, grain density, effective panicle number per plant and grain number per pan-icle, total 5 traits, were significantly correlated with the drought resistance of rice, and they could be used to identify the drought resistance of rice in Ningxia. In addition, the drought resistance of rice was graded qualitatively according to the subordinate function value of corresponding drought resistance coefficient. The results showed that among the 49 rice cultivars from Ningxia, 6 rice cultivars were highly drought resistant, and 9 rice cultivars were moderately drought resistant, suggesting that the evalua-tion method was feasible and effective.     

泡桐AFLP反应体系的建立及引物筛选

以豫杂一号泡桐为材料,通过对影响AFLP技术体系的各主要因素的研究,建立了适于泡桐AFLP分析的技术体系.结果表明最佳酶切体系(20μL)为500 ng模板DNA,3 U的Pst 1和Mse I,在37℃下双酶切3 h;20μL最佳连接体系中为酶切产物15 μL,0.25 μmol·L-1Pst I接头,2.5 μmol·L-1 Mse I接头,1 μL 10×T4 Buff-er,2 U T4连接酶,22℃连接18 h;20 μL最佳预扩反应体系中5 μL稀释10倍的连接产物,100 μmol·L-1dNTP,2 U Taq酶,250 μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGT/M+AGT),2 μL 10×PCR Buffer.20 μL最佳选择性扩增反应体系中5 μL稀释20倍预扩增产物,100 μmol·L-1dNTP,2 U Taq酶,350 μmol·L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGT/M+AGT),2 μL 10×PCR Buffer.最后,筛选出了97对适宜于泡桐AFLP分析的引物.