水稻蛋白质双向电泳分析新方法

通过研究，建立了适合于水稻根蛋白质双向电泳分析用的磷酸缓冲液抽提、ＴＣＡ沉淀法浓缩蛋白质的新方法。本法用于水稻胚、叶片的蛋白质样品制备，也能获得稳定、清晰的双向电泳图谱。经考马斯亮蓝Ｒ２５０染色，根、叶和胚的清晰可分辨的蛋白质斑点数分别为３５０、３５０和４００个，用银染色，斑点数分别为６００、６００和７００个。三蛋白质的等电点总在３．０￣９．０之间，大多数在５．０￣８．０之间，分子量在１５￣１７     

水稻蛋白质双向电泳分析新方法

通过研究，建立了适合于水稻根蛋白质双向电泳分析用的磷酸缓冲液抽提、ＴＣＡ沉淀法浓缩蛋白质的新方法．本法用于水稻胚、叶片的蛋白质样品制备，也能获得稳定、清晰的双向电泳图谱．经考马斯亮蓝Ｒ２５０染色，根、叶和胚的清晰可分辨的蛋白质斑点数分别约为３５０、３５０和４００个，用银染色，斑点数分别为６００、６００和７００个．三者蛋白质的等电点总在３．０～９．０之间，大多在５．０～８．０之间，分子量在１５～１７０ｋＤ之间，大多在２５～９０ｋＤ之间     

水稻叶片质膜蛋白的提取与纯化

利用匀浆-差速离心法提取水稻叶片细胞粗膜微粒体,采用Dextran T-500、PEG3350两相分配法分离纯化粗膜微粒体中的质膜,研究不同聚合物浓度对分离效果的影响。结果表明,采用聚合物浓度为6.2%的两相分配体系分配3次可获得纯度较高、封闭性较好的水稻叶片细胞质膜。     

水稻地方品种月亮谷与LTH叶片蛋白质的双向电泳分析

 为了研究水稻地方抗病品种月亮谷与感病品种丽江新团黑谷（LTH）在未接种稻瘟菌前蛋白质间的差异,利用双向电泳技术对月亮谷与LTH叶片的蛋白质组分进行研究。试验选用pH 4～7,17cm的IPG胶条,利用双向电泳技术分离上述两个水稻品种的稻苗叶片的蛋白质,分析其蛋白质点表达量的差异,同时选取差异显著的蛋白质点进行质谱分析。利用Gene ontology软件对这些蛋白质进行了功能分类。月亮谷与LTH叶片蛋白的双向电泳图谱得到34个差异蛋白点,对其中20个蛋白点进行质谱测定,鉴定到13个差异蛋白,包括1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基,3-磷酸甘油醛脱氢酶,ATP合酶,UDP-葡萄糖焦磷酸化酶,铁氧蛋白-NADP-还原酶,叶绿素a/b结合蛋白等。因此认为月亮谷与LTH叶片中主要是参与生长代谢和防御相关的蛋白质存在差异。这些蛋白在水稻与稻瘟病菌互作中的表达模式和对抗病性的贡献值得下一步深入研究。     

影响木薯叶片蛋白质双向电泳图谱的因素分析

以木薯华南205为试材,采用苯酚抽提法提取叶片蛋白质,并通过双向电泳技术研究影响木薯叶片蛋白电泳分析图谱的主要因素。结果表明：pH 4～7的IPG胶条可提高特定范围蛋白质点的分辨率;上样量200μg可得到较好的双向电泳图谱。本研究不仅为进一步研究木薯叶片蛋白电泳分析提供技术手段,同时也为分析木薯块根、茎和繁殖器官的蛋白...     

两相分配法纯化受旱小麦绿色组织质膜的研究

通过研究氯化钠和多聚物浓度对质膜和各种内膜在PEG／Dextran两相系统中分配行为的影响，根据其影响膜在两相系统中分配系数的试验结果，应用两相分配纯化法，纯化生长正常和受旱条件下小麦绿色组织质膜，对匀浆介质稍加修改，加入5mmol/L ZnCl2，结果在较短的时间得到了两种小麦绿色组织细胞质膜的富集组分。     

适用于甜玉米叶片蛋白质组分析的双向电泳技术

采用改良的TCA/丙酮法提取叶片总蛋白,建立了一套适用于甜玉米叶片的蛋白质组学研究方法,并对蛋白溶解液、蛋白上样量、第一向IEF等电聚焦时间等条件进行了优化.用改进的蛋白溶解液提取叶片总蛋白,明显减轻了离子干扰造成的蛋白点横拖;500μg蛋白上样量的检出蛋白点最丰富,可达750个以上;延长8 000 V等电聚焦至30 000 Vh可获得良好的蛋白点分离效果;采用优化条件后的双向电泳参数,结果重复性较高,检出蛋白点的线性回归相关系数可达0.93以上.     

黄瓜叶片蛋白质双向电泳条件优化

建立了黄瓜叶片总蛋白双向电泳技术优化体系,即可溶性蛋白提取方法为TCA/丙酮沉淀法,上样量为600μg,染色方法为考马斯亮蓝G-350。从而获得一个比较稳定的黄瓜叶片蛋白质双向电泳体系。     

石斛叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立及优化

以石斛叶片为材料,建立了一套适用于石斛蛋白质组分析的双向电泳体系,探讨了石斛叶片蛋白的提取、蛋白定量以及双向电泳的一些关键技术。结果表明,通过三氯乙酸(TCA)法提取、高压等电聚焦和两步平衡等方法可以获得稳定、清晰的双向电泳图谱,获得了可分辨蛋白质斑点数约613个。     

木本植物叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立

以2种木本植物的成熟叶片为材料,对传统的双向电泳进行改进和优化,得到1种适合于木本植物叶片蛋白质电泳分析的方法,此方法大大降低了木本植物叶片中次生代谢物质对双向电泳结果的干扰,明显改善了分析效果。     

Extraction of Proteins from Apple Leaves for Two-Dimensional Electrophoresis Analysis

In order to develop an efficient method about protein extraction which is suitable for apple proteomic analysis, four protocols of total protein extraction from apple leaves, which are trichloroacetic acid/acetone precipitation method （TCA）, phenol extraction methanol/ammonium acetate precipitation method, Tris-HCl extraction method and modified Tris-HCl extraction method were compared. The results showed that the modified Tris-HCl extraction method was the most suitable method in protein extraction for two-dimensional electrophoresis （2-DE） from apple leaves based on the highest resolution and more informative spots of 2-DE gels with no apparent vertical or horizontal streaking.     

两相分配法纯化受旱小麦绿色组织质膜的研究

通过研究氯化钠和多聚物浓度对质膜和各种内膜在PEG/Dextran两相系统中分配行为的影响,根据其影响膜在两相系统中分配系数的试验结果,应用两相分配纯化法,纯化生长正常和受旱条件下小麦绿色组织质膜,对匀浆介质稍加修改,加入5mmol/L ZnCl_2,结果在较短的时间得到了两种小麦绿色组织细胞质膜的富集组分。     

水稻种子胚乳蛋白的双向电泳分析技术

为探讨水稻灌浆期间与籽粒充实相关蛋白表达的变化，建立了一套适于水稻种子胚乳蛋白双向电泳分析技术，探讨了胚乳蛋白的提取、纯化以及双向电泳的一些关键技术．结果表明，通过乙醇铵沉淀、高压等电聚焦和两步平衡等方法可以获得较好的分析结果，获得胚乳蛋白斑点数约350个，等电点范围在3．0～9．0，其中大部分集中在4．0～7．0．     

脱硫石膏改良盐碱土对水稻质膜和叶绿素荧光特性的影响

以水稻品种越光(盐敏感)和Bertone(耐盐)为试材,设置了正常稻田土、典型盐碱土和改良盐碱土3个处理,分别在水稻插秧后1、4、7、14 d取样测定水稻叶片伤害百分率、丙二醛含量、叶绿素含量、叶绿素荧光参数等,以分析改良盐碱土处理的效果。结果表明,随着处理时间的延长,与正常稻田土相比,典型盐碱土和改良盐碱土处理的水稻叶片伤害百分率、丙二醛含量均极显著增加,叶绿素a、b及总叶绿素含量以及Fm、Fv/Fm、ETR等叶绿素荧光参数均明显降低;与典型盐碱土处理相比,在改良盐碱土条件下,2个水稻品种的叶片伤害百分率、丙二醛含量总体均极显著降低,叶绿素a、b及总叶绿素含量以及Fm、Fv/Fm等叶绿素荧光参数总体均明显升高,并表现出不同的变化规律,其中Bertone的盐害症状较轻。表明,施用适量的脱硫石膏、改良剂和有机肥,辅以灌排水措施可以有效缓解盐碱土对水稻幼苗的伤害,尤其对耐盐水稻品种效果更佳。     

低温对水稻幼苗根细胞质膜、液泡膜Mg2+ -ATP酶活性的影响

水稻幼苗经冷处理 ( 1℃ ,1 50 μmol/(m2 ·s) ,2d)后 ,根质膜、液泡膜Mg2 -ATP酶活性均明显下降 ,而经低温锻炼 ( 1 4℃ ,75μmol/(m2 ·s) ,3d)的幼苗根质膜、液泡膜Mg2 -ATP酶活性升高 ,锻炼后的幼苗再经冷处理 ,其质膜、液泡膜Mg2 -ATP酶活性均与冷害前相近。     

柱状黄杆菌外膜蛋白的比较蛋白质组学研究

为了鉴定柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)的毒力相关因子,利用蛋白质组学方法分析了强毒株G4R3和弱毒株G18的外膜蛋白。双向电泳结合图像分析,共发现了8个差异表达的蛋白点。经过胶内酶解和质谱分析,其中的1个蛋白点被鉴定为LemA蛋白,它可能是柱状黄杆菌的一种毒力因子。     

胡杨异形叶蛋白质表达的电泳分析

[目的]研究胡杨异形叶发育的细胞与分子调控机制,揭示胡杨的生态适应性。[方法]利用SDS-PAGE及2-DE技术提取及分离同一株胡杨成年树异形叶片的蛋白质,建立适合胡杨叶片蛋白质分离的电泳技术。[结果]发现异形叶蛋白质的表达存在明显差异。由SDS-PAGE图谱可以看出,分子量为57.2,13.2,30.2,23.9,35.9及33.3 kD处的蛋白谱带差异明显。双向电泳图谱表明,胡杨叶蛋白多为分布在pH值5.0~6.5,20~40 kD之间的酸性低分子量蛋白质;共发现73个差异点,其中在锯齿卵圆形叶片中表达丰度上调的为51个点,下调的为22个点。[结论]推测在长期的进化过程中,胡杨叶片基因的调控表达发生改变而长出不同形状的叶片,以更好地适应环境。