猕猴桃胚乳再生植株体系的优化

以猕猴桃(Actindia chinensis)金桃品种的胚乳为外植体,探讨了培养基、生长调节剂和蔗糖浓度以及暗培养等条件对胚乳培养器官形成的影响。结果表明:2,4-D对猕猴桃胚乳愈伤组织的诱导效果显著;在20g/L的蔗糖浓度条件下,胚乳愈伤组织的器官分化效果最好;暗培养可以促进胚乳愈伤组织的生长和器官形成,其中暗培养7d效果最好。     

杜仲成熟干胚乳愈伤组织的诱导和植株再生

杜仲成熟干种子经ＧＡ３溶液浸泡后，去掉种胚，切取胚根端胚乳接种在愈伤组织诱导培养基上，５－７ｄ后多数胚乳顶端局部膨大，将膨大部分切下转入成分相同的新鲜培养基上，４０－５０ｄ后形成白色柔软的初生愈伤组织。初生愈伤组织经改造后变为绿色致密具分化能力的愈伤组织，转入分化培养基后出现器官分化，唯正常茎芽分化频率很低，且十分细弱，只有经壮苗培养后才能诱导生根。     

玉米幼胚愈伤组织的诱导及分化的研究

用不同培养基在不同条件下分别培养6个基因型的玉米幼胚，结果表明：其胚性愈伤组织的产生受玉米基因型、培养基及幼胚大小的影响，胚性愈伤组织的分化受蔗糖浓度、培养基及光照的影响。     

影响蒜头果离体胚乳愈伤组织培养的几种因子

四种基本培养基（MS、B5、N6和SH）的试验结果表明，MS和N6两种基本培养基适宜蒜头果胚乳愈伤组织培养；在相同的2，4-D和6-BA激素配组中，附加低浓度的GAs（O．5mg／L）有利于胚乳愈伤组织的诱导；添加甘氨酸和椰乳（CM）对悬浮培养愈伤组织的诱导不适宜。愈伤组织继代增殖培养的适宜培养基为MS＋2，4-D2．0mg／L＋KT0．2mg／L＋GA30．2mg／L和N6＋2，4-D2．0mg／L＋6-BA0．2mg／L＋GA30．6mg／L。     

培养条件对荞麦愈伤组织生长及黄酮合成的影响

以荞麦无菌苗胚轴作为外植体诱导愈伤组织,研究了光照、蔗糖、L-苯丙氨酸和植物激素(2,4-D、NAA、6-BA)等因素对荞麦愈伤组织生长及黄酮合成的影响,为荞麦大规模细胞培养和工业化生产黄酮类化合物奠定基础。结果表明:光照对荞麦愈伤组织生长没有明显的影响,但光照和黑暗交替处理能促进愈伤组织黄酮合成;蔗糖质量浓度为4%,荞麦的愈伤组织生物量、黄酮含量和产量达到最高;L-苯丙氨酸能促进荞麦愈伤组织黄酮合成,但对愈伤组织生长有一定的抑制作用,L-苯丙氨酸浓度为150μmol.L-1,黄酮产量达到最高;在一定浓度范围内,3种植物激素都能促进荞麦愈伤组织生长和黄酮合成,但2,4-D和6-BA的效果要优于NAA,但2,4-D的效果最佳。促进荞麦愈伤组织生长和黄酮积累最佳的激素配比组合为1.5mg.L-12,4-D+0.6mg.L-16-BA。     

阔叶猕猴桃抗生素敏感性及遗传转化的研究

以阔叶猕猴桃(Actinidia latifolia)叶片为外植体,研究了各种抗生素对形态分化和器官形成的影响,并以叶盘为受体,通过根癌农杆菌介导法获得了抗性愈伤组织和抗性芽,组织化学染色表明gus基因已在植物组织中表达。研究结果表明,对不定芽分化来说,头孢霉素(Cef)效果明显好于羧苄青霉素(Carb)。Cef浓度为300mg.L-1时效果最好,再生频率达100%,平均再生芽数达最大为9.76个芽/外植体。生根过程中高浓度的Cef(≥200mg.L-1)明显抑制生根,而Carb对生根没有显著影响。在卡那霉素(Kan)和Carb组合处理中,Carb对生根没有显著影响,但Kan明显抑制生根。随着Kan浓度的升高,生根率和平均根数迅速减少,当浓度升高到50mg.L-1时,生根完全被抑制。因此,农杆菌介导的阔叶猕猴桃遗传转化中愈伤组织和不定芽诱导过程宜选用300mg.L-1Cef来抑制农杆菌生长,Kan筛选的临界浓度为20mg.L-1。在抗性芽生根过程中Kan浓度应该控制在50mg.L-1以内,并改用Carb作为杀菌剂,生根效果会更好。该研究确定了农杆菌介导的阔叶猕猴桃叶片遗传转化中使用抗生素的种类和用量,为通过基因工程对阔叶猕猴桃进行遗传改良奠定了基础。     

预处理和激素对草莓花药离体培养的影响

花药培养是进行植物脱毒和获取单倍体的有效方法。为提高草莓花药培养的再生效率,采用低温和黑暗的方式对草莓花药进行预处理,以不同种类和浓度的激素诱导诱导愈伤组织形成、不定芽形成与增殖。结果表明,培养前低温处理可促进愈伤组织形成,以4℃低温处理72h的效果最好。但花药黑暗预处理对愈伤组织形成没有作用。较高浓度的2,4-D(MS+1.0mg·L-16-BA+2.0mg·L-12,4-D)最适合诱导且促进花药愈伤组织形成,有助于下一步分化培养。而NAA对不定芽分化起着重要作用,诱导成功率达到10%以上,其中以MS+1.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA诱导效果最好。在添加NAA的基础上再加入KT也能提高不定芽分化率。不定芽增殖过程不宜添加过高浓度的细胞分裂素和生长素,以MS+0.7mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA诱导增殖效率最高,激素浓度过高时易出现玻璃化,现象,形成畸形苗。本研究建立了高效的草莓花药培养再生体系,为获得无病毒草莓苗和单倍体提供了条件。     

萘乙酸对温床枸杞插穗促根效果的影响

在温床条件下试验观察了不同浓度萘乙酸(NAA)处理对枸杞插穗生根成苗的效果。结果表明,用浓度为 7.5、15.0、25.0、50.0、75.0、100.0 mg/L的NAA浸泡15 h枸杞插穗基部,经过10 d 22 ℃温床处理,可形成愈伤组织和不定根。以NAA 15.0 mg/L处理的愈伤组织形成效果最佳,愈伤率83.33%,愈伤周长比0.54;以NAA 25.0 mg/L处理的插穗生根效果最优,生根率78.32%,生根量1.93条/插穗。温室扦插育苗结果表明,以NAA 25.0 mg/L处理的成苗效果最好,成苗率88.33%,株高16.76 cm、径粗1.51 mm,总体生根和成苗效果最佳。     

玉米单倍体胚性愈伤的诱导与鉴定

为建立一套适合玉米单倍体胚性愈伤培养和快速筛选体系,以单倍体诱导系MT-1为父本,18-599红为母本进行单倍体诱导,设置暗培养、全光照培养和光暗周期培养3种光照培养方式,均分别培养0、1、5、10、20、40 h后,观察幼胚形态和颜色。结果表明,自交系18-599红的单倍体和二倍体幼胚均能正常诱导形成胚性愈伤组织;不同光照培养方式对紫色(二倍体)愈伤率的检出效果依次为光培养>光暗周期培养>暗培养。通过光照筛选的方法可在早期鉴定愈伤组织,其二倍体愈伤的筛选率在培养20 h时可达68%,40 h时为71%,剔除了大部分非单倍体愈伤,综合分析确定光照强度为2 000 lx、20℃处理20 h为最适光照筛选处理。染色体压片技术获得的拟单倍体愈伤中有二倍体愈伤的检出,但经流式细胞仪检出获得的拟单倍体愈伤再经染色体压片检测,无二倍体愈伤,表明流式细胞仪检测单倍体愈伤的准确性高于染色体压片技术。通过光照初步筛选结合流式细胞仪的精确鉴定,迅速从3 000个单倍体愈伤中获得110个单倍体愈伤,单倍体愈伤率3.67%。本研究结果为以玉米单倍体愈伤为转基因受体,快速获得转基因植株提供了一定的技术支撑和理论参考。     

水稻抗氯磺隆体细胞突变体筛选研究初报

选用籼稻品种D-68成熟胚作为离体诱变材料，以氯磺隆(Chorsulfuron)为选择剂，5-溴尿嘧啶(5-BU)、2-氨基嘌呤(2-AP)及混合诱变剂(5-BU：2-AP=1：1)为化学诱变剂，研究了不同浓度的诱变剂与氯磺隆筛选复合处理对水稻愈伤组织再分化率的影响。结果表明：氯磺隆浓度为25mg／L时，极显著的抑制愈伤组织的生长；浓度超过50mg／L时存活的愈伤组织无分化能力；适宜浓度的诱变剂处理与氯磺隆筛选相结合，有提高诱发抗氯磺隆细胞突变频率的作用；与对照比，20～60mg／L化学诱变剂诱导的愈伤组织，再用25～75mg／L氯磺隆离体筛选复合处理的愈伤组织抗性增强；其中以5-BU诱变剂处理的效果最好。此外，细胞水平抗性反应与再生植株抗性反应是一致的，初步筛选出水稻抗氯磺隆的细胞突变体。     

不同抗氧化剂预处理防止优质籼稻种胚愈伤组织褐化的研究

以优质籼稻桂华占和油占8号的成熟胚为外植体，采用0．1％的3种抗氧化剂对离体稻胚作不同时间预处理，研究抗氧化剂对2个籼稻品种种胚愈伤组织的诱导和防褐效应。结果表明，柠檬酸的适宜处理时间为18h和24h，抗坏血酸(VC)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的适宜处理时间均为3h；柠檬酸的防褐效果最好，但会降低愈伤组织的诱导率；抗坏血酸的防褐效果次之，且能提高愈伤组织的诱导率并促进愈伤组织生长；PVP仅在愈伤组织诱导阶段有一定的防褐作用。     

草地早熟禾愈伤组织诱导及柠檬酸对其褐化的抑制效应

本研究以草地早熟禾新歌莱德、午夜、纳苏3个品种的成熟种子为材料,研究了浸泡、研磨和接种方式等因素对愈伤组织诱导率和出愈时间的影响以及不同浓度的柠檬酸对其愈伤组织褐化的抑制效果。结果显示,浸泡48h处理有利于种子愈伤组织诱导,随着浸泡时间延长愈伤组织平均诱导率逐渐下降,且3个品种的出愈时间均推迟;在浸泡48h处理下,无论采取机械接种或随机接种方式接种,研磨处理与未经研磨处理所得到的3个品种种子愈伤组织诱导率均无明显差异;在种子浸泡48h,未经研磨处理条件下,分别采用随机接种与机械接种方式所得到的3个品种种子愈伤组织诱导率差异极显著。此外,研究表明在愈伤组织的继代培养中对愈伤组织褐化抑制效果较好的浓度是2mg·L-1,培养2周未见有褐化现象,而随柠檬酸浓度升高褐化率逐渐增加,且对照的褐化率达到25%~37.5%。经试验观察发现2 mg·L-1柠檬酸浓度对愈伤组织的增殖和分化再生无明显影响,新歌莱德、午夜、纳苏的胚性愈伤组织分化率分别为75%、50%、70%,生根率分别为85%、70%、80%。本研究初步探讨了影响草地早熟禾愈伤组织诱导的因素,解决了草地早熟禾愈伤组织继代培养中的褐化现象,完善了草地早熟禾愈伤组织诱导和再生体系建立,为利用愈伤组织再生体系进行基因工程改造研究奠定了重要的技术基础。     

匍匐翦股颖匍匐茎愈伤组织的诱导

离体再生体系的建立是植物基因工程的重要前提。以匍匐翦股颖（Agrostis palustris Huds）栽培品种L-93细叶突变体的匍匐茎为外植体,比较了不同消毒方法对外植体进行消毒的效果,以及生长调节剂配比、蔗糖浓度、固化物种类等因子对愈伤组织诱导的影响。结果表明：外植体适宜的消毒方法为75%乙醇处理60s后,再用0.1% HgCl2处理6min;与细胞分裂素配合使用时,2,4-D对愈伤组织诱导的效果好于NAA和IBA;2 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L 6-BA的组合最利于愈伤组织的诱导,诱导率为74.0%;蔗糖浓度为40g/L时愈伤组织诱导率最高,为62.5%;与Agar A、Agar B和Canageenen相比, Phytagel作为固化物时,愈伤组织诱导率最高,可达67.9%。     

香蕉花蕾诱导愈伤组织再生体系优化

研究诱导香蕉花蕾愈伤组织再生的最佳外植体部位、TDZ(噻苯隆)浓度和光照条件等因素。以2个不同品种的香蕉(桂蕉六号和矮蕉)花蕾的不同部位作为外植体,通过诱导花蕾形成愈伤组织等过程进行研究。试验获得了较高的愈伤组织诱导率,试验中TDZ对花蕾愈伤组织的诱导效果表现出较大差异,桂蕉六号花蕾的顶端和矮蕉花蕾的中部最容易诱导产生愈伤组织,不同外植体对TDZ和光照的敏感程度不同。     

小麦不同品种外植体的农杆菌转化方法的研究

本实验在小麦中对农杆菌介导的大麦黄矮病病毒CP基因进行了转化，选择生产用小麦品种（系），对影响小麦组织条件和转化的主要因素进行研究，并获得了小麦转基因植株，研究表明，增加肌醇浓度有利于小麦愈伤组织的分化，而添加ABA却只对部分品种有效；采用幼胚和幼胚愈伤组织均能获得转基因植株；以茎尖和花药愈伤组织为受体未能获得阳性植株；小麦不同品种对不同农杆菌菌株的反应不同。     

不同培养条件对瞿麦诱导愈伤组织的影响

试验以瞿麦叶片为材料,通过对其进行不同消毒时间,不同激素配比浓度和不同光照条件处理,探究瞿麦组织培养的最佳培养条件。试验结果表明:酒精浸泡30s、Na Cl O浸泡15min的处理可以极大降低外植体的污染率和褐化率;MS+1.0mg/L6·BA+0.4 mg/L NAA的培养基愈伤组织诱导率最高,为90%;接种后先暗培养25d,然后在光照下进行培养的外植体,其愈伤组织比接种后直接在光照条件下培养的外植体要出现的快且生长状况较好。     

红花小孢子培养与胚状体诱导研究

小孢子培养是创造单倍体和双单倍体的重要途径,对提高红花的育种效率具有重要意义。为了研究红花游离小孢子的高效培养体系,用20份红花材料研究花药及小孢子培养中影响愈伤组织生长和胚发生的关键因素。结果表明,小孢子发育时期、红花品种、基本培养基和激素浓度是影响红花诱导愈伤组织的关键因素。花药培养的愈伤及胚诱导率高于游离小孢子,且受基因型影响。单核靠边期管状花长度为 0.45～0.50 cm时,诱导成功率达到68.32%。供试的20份红花材料中,有11份诱导出了愈伤组织,有1份分化出了胚状愈伤,诱导成功率为15.79%。分化培养最适培养基组合为1/2 MS+B5+ 6-BA 1.0 mg/L + NAA 1.0 mg/L;小孢子悬浮培养最适培养基激素浓度以添加6-BA 4.0 mg/L 和NAA 0.5 mg/L效果最好,诱导愈伤率为22.5%。     

不同植物激素对冬凌草愈伤组织增殖及褐化的影响

研究了不同种类的植物激素对冬凌草叶片诱导愈伤组织及褐化的影响,结果表明:培养基中植物激素的种类、浓度及其组合对愈伤组织增殖及褐变影响较大。适宜浓度的2,4-D、IAA和NAA生长素、KT和6-BA细胞分裂素及GA3,能不同程度地减轻或抑制褐化,促进愈伤组织的生长,其中以2,4-D(2.5) KT(0.2) GA3(0.2)效果最好。     

高羊茅高频植株再生体系的建立及其影响因子的分析

研究了高羊茅(Festuca anmdinacea)愈伤组织诱导培养基和分化培养基组分的最适配比，建立了高羊茅高频再生体系。结果表明，培养基MSM 5mg／L 2,4-D 0．02mg／L KT诱导高羊茅种子出愈率高达92％；愈伤组织可在培养基MSM 4．5mg／L 2,4-D 0．2mg／L KT上长期保持；愈伤组织在培养基MSM 2mg／L 2,4-D 0．2mg／L KT诱导体细胞胚发生后，可在添加2mg／L KT和20mg／L蔗糖的SH培养基(MSH)上诱导分化形成丛生芽，愈伤组织分化率可达96％。再生芽在1／2MS培养基上14d生根率达100％。     

我国主要栽培木薯品种体细胞胚胎发生与芽器官发生的研究

本研究对我国10个木薯(Manihot esculenta Crantz)主要栽培品种离体培养,研究结果表明不同品种之间在体细胞胚胎发生和器官发生的能力上因基因型不同而差异显著.以组培苗茎段侧芽或顶芽为外植体,在添加Picloram和2,4-D的体细胞胚胎发生诱导培养基上暗培养2周后,可诱导胚状体的形成.生长素浓度中,2,4-D在6mg/L及Picloram在12mg/L为最佳使用浓度,并且Picloram的效果明显优于2,4-D.NZ188、SC124和SC205体细胞胚胎发生的频率可达到80%以上.诱导的胚状体经循环继代培养可形成次生胚状体.次生胚状体在成熟培养基上经2～3周的光培养可形成绿色子叶的体细胞胚,进而萌发形成再生植株.NZ188及SC8体细胞胚萌发频率最好,可达80%以上.以培养2周的子叶胚切块置于体细胞胚胎发生诱导培养基上可诱导形成次生胚状体,诱导频率都在77%以上.子叶胚切块置于器官发生培养基上可诱导芽器官发生,2周后可形成芽原基及不定芽,诱导频率在34.4%到72.2%之间,其中NZ188、NZ199和SC124诱导效果较好.再生培养附加乙烯抑制剂AgNO_3可明显抑制愈伤组织的形成,提高芽器官发生的能力,包括再生频率及芽再生的数目,浓度以4 mg/L为宜.从含AgNO_3的培养基上再生的芽有利于进一步生长和移栽成活.