徐州地区猪源致病性大肠杆菌耐药性检测

为了考察徐州地区猪源致病性大肠杆菌的耐药情况,采用传统微生物法对徐州周边地区52株猪大肠杆菌进行分离鉴定,试管二倍稀释法测定细菌对药物的敏感性,提取耐药菌质粒DNA,PCR扩增耐药基因目的片段。结果表明,氟苯尼考和阿莫西林对徐州周边临床大肠杆菌分离株的最小抑菌浓度(MIC)值与标准菌株相比较,分别提高20～512倍、10～800倍,个别临床分离株对恩诺沙星的MIC值高达80μg/mL,对头孢曲松的MIC值高达80μg/mL,对安普霉素的MIC值高达320μg/mL;经PCR检测临床分离株均扩增出氟苯尼考Flor耐药基因,Tem型ESBLs耐药基因目的片段。说明徐州周边临床大肠杆菌对氟苯尼考和阿莫西林已产生严重耐药性,对恩诺沙星和安普霉素已经耐药,但大部分菌株对头孢曲松敏感。提示徐州周边地区猪场应科学合理、有计划地轮换使用不同药物。     

徐州地区猪源致病性大肠杆菌耐药性调查

为了掌握徐州地区猪场大肠杆菌耐药菌株的产生情况和耐药程度,在2016-2018两年间对徐州地区猪源大肠杆菌进行耐药监测。从猪场分离鉴定致病性大肠杆菌,采用纸片扩散法测定46株分离菌株对15种抗菌药物的敏感性。结果表明,猪源大肠杆菌分离株多重耐药现象严重,至少耐药10种以上,其中10耐和11耐的菌株所占比例最大,分别为28.3%和23.9%;分离菌株对阿莫西林、氟苯尼考、强力霉素耐药率最高,达到80%以上,对头孢噻呋耐药率最低,为17.4%。两年间痢菌净耐药率下降幅度最大,丁胺卡那霉素耐药率增长幅度最大。     

猪源大肠杆菌血清型耐药性整合子调查

分别在北京地区采集正常猪泄殖腔拭子50份,河南123份,分离到大肠杆菌150株,分离率为86.7%.菌株血清型分布广,呈地区性、多样性和可变性.北京菌株耐药率低,除对四环素为73.8%外,对其他21种药物耐药率均在16.7%以下;河南地区菌株耐药率高,对青霉素类、磺胺甲基异噁唑高达75.0%以上.北京地区菌株整合子携带率为18.6%,河南地区为75.7%.整合子携带频率与细菌耐药性相关.     

晋东南猪源大肠杆菌血清型调查与药敏试验

本研究对晋东南10个县区的养猪场进行取样,通过细菌分离、培养和鉴定后,发现大肠杆菌有12种血清型,其中主要血清型为O_(138)(8/42)、O_2(6/42)、O_(107)(5/42)和O_(152)(5/42)。药敏试验结果显示,大肠杆菌高敏感性的药物有头孢吡肟(高敏率89.47%)、阿米卡星(高敏率81.58%)、呋喃唑酮和氧氟沙星;中度敏感药物有庆大霉素和氟苯尼考;低敏感药物有利福平(耐药率81.58%)、阿莫西林(耐药率71.05%)和大观霉素等。本研究结果为晋东南地区猪大肠杆菌病的有效防控提供了理论基础。     

猪源大肠杆菌tem耐药基因的检测

为了解和掌握大肠杆菌耐药性的流行情况,从而为控制大肠杆菌的耐药性提供科学依据,用K-B法对临床分离的15株猪源大肠杆菌进行β内酰胺类抗生素药敏试验,以15株分离菌DNA为模板对β内酰胺类抗生素耐药基因tem进行PCR扩增。结果表明:15株猪源大肠杆菌对β内酰胺类抗生素均耐药,耐药率从高到低分别为头孢哌酮(82%)、头孢噻肟(24%)、头孢他啶(18%)、头孢呋辛(6%)、苯唑西林(6%);PCR扩增均检测到β内酰胺类抗生素耐药基因tem。说明β内酰胺类抗生素耐药基因tem广泛存在于猪源大肠杆菌中,与抗生素敏感性表型一致。     

上海地区猪源大肠杆菌血清型及其毒力因子分布调查

对上海地区分离的199株猪源大肠杆菌分离株进行血清型鉴定和毒力因子检测,使用大肠杆菌标准抗O因子血清进行玻片凝集试验;采用普通和多重PCR方法,对分离株进行STa、STb、LT、Stx2e等4种肠毒素和K88、K99、987P、F18、F41等5种黏附素检测。结果:199株猪源大肠杆菌分离株有110株鉴定出血清型,占检测菌株的55.28%,覆盖了30种血清型,优势血清型为O8、O45、O64、O78、O138、O157、O163、O7+O8,占定型菌株的60%。共有32株大肠杆菌检测到毒力因子,阳性率为16.08%,检测出9种毒力因子。其中有21株单独检测到肠毒素,占65.63%,STa和STb+LT阳性的菌株分别为14和4;6株单独检测到黏附素,3株菌株K99阳性;5株同时检测到肠毒素和黏附素。在32株毒力基因阳性的大肠杆菌中,有15株血清型定型,覆盖7种血清型,其中O138、O7+O8与肠毒素STa相关,O8、O45与STb+LT相关。研究表明,上海地区猪源大肠杆菌分离株优势血清型至少覆盖了包括O8、O45、O64、O78、O138、O163等在内的8种血清型;大肠杆菌分离株以产肠毒素为主,主要毒力因子包括黏附素K99和肠毒素STa、STb+LT等。     

泉州地区猪源致病性大肠杆菌的分离鉴定血清型检测与耐药性分析

为了解泉州地区猪源致病性大肠杆菌流行血清型分布及耐药性,无菌采集的患病仔猪肝脏、肛拭子和粪便等病料组织样品87份,通过细菌的分离鉴定得到了42株大肠杆菌,其中,30株为致病性大肠杆菌。利用玻板凝集法和K-B药敏纸片法分别检测30株猪源致病性大肠杆菌分离株的血清型和耐药性。结果显示,30株猪源致病性大肠杆菌分离株属于9个血清型中,定型的猪源致病性大肠杆菌分离株27株,定型率为90%(27/30),2株未鉴定出来,占分离菌菌株的64.3%(27/42),以O147和O141为该地区流行的优势血清型;30株猪源致病性大肠杆菌分离株对新霉素、环丙沙星、恩诺沙星等5种药物的耐药率在80.0%~100%之间,对克林霉素、多西环素、丁胺卡娜霉素等5种药物的耐药率在60.0%~73.3%之间;对其他的药物耐药率在33.3%~53.3%之间,且呈现多重耐药性。本研究为该地区的猪源致病性大肠杆菌病的防治提供了重要的参考价值。     

规模化猪场仔猪源大肠杆菌血清型调查及耐药性检测

从第六师五家渠市7个地区规模化猪场疑似仔猪腹泻病例中采集了361份病料,分离并鉴定其中335份病料的病原为大肠杆菌。采用26种主要大肠杆菌O抗原进行血清型鉴定,结果 258株大肠杆菌可定型,分属17种血清型,其中O14、O65、O157、O24、O138为优势血清型。药敏试验结果显示,分离株对四环素等13种抗菌药的耐药率从14.93%~-97.01%不等,多重耐药从耐2到耐13。研究表明,不同地区猪场分离菌株血清型有所不同,同一地区猪场可存在多个血清型,不同地区可流行同一种优势血清型,分离株表现出不同程度的耐药性,且呈多重耐药。     

广西某地区猪源大肠杆菌耐药性及部分菌株耐药基因调查

试验旨在探究广西某地区猪源大肠杆菌的耐药性及部分菌株所含耐药基因情况,为预防及治疗动物性大肠杆菌类疾病提供参考。采用麦康凯琼脂培养基及伊红美蓝琼脂培养基初步鉴定、显微镜镜检、分子生物学16S rRNA鉴定、药物敏感性二倍肉汤微量稀释法等方法进行大肠杆菌的分离鉴定,并结合PCR相关技术对部分菌株的三十余种耐药基因进行检测。结果显示,从广西某地区采集的猪源病料中共分离得到65株猪源大肠杆菌,其均为多重耐药大肠杆菌且多集中于六重耐药与七重耐药。按所耐抗菌药物的种类分析发现其对β-内酰胺类、磺胺类、大环内酯类药物具有较高耐药性,耐药率分别98.46%、90.77%及84.62%,进一步分析发现其主要是对头孢噻呋钠、阿莫西林、磺胺间甲氧嘧啶、阿奇霉素等抗菌药物具有较高耐药性,对美罗培南、阿米卡星、黏杆菌素较为敏感。对部分菌株所含耐药基因进行整理发现,其多含有四环素类(tetA、tetM)、β-内酰胺类(CTX-m-u)及磺胺类(Sul2)耐药基因。综上所述发现广西地区猪源大肠杆菌耐药性情况较为严重,所含耐药基因也相对较多,因此在实际生产中需采用联合用药等相关措施进行疾病治疗以达到快速高效治疗疾病的目的。     

广西某地区猪源大肠杆菌耐药性及部分菌株耐药基因调查

试验旨在探究广西某地区猪源大肠杆菌的耐药性及部分菌株所含耐药基因情况,为预防及治疗动物性大肠杆菌类疾病提供参考。采用麦康凯琼脂培养基及伊红美蓝琼脂培养基初步鉴定、显微镜镜检、分子生物学16S rRNA鉴定、药物敏感性二倍肉汤微量稀释法等方法进行大肠杆菌的分离鉴定,并结合PCR相关技术对部分菌株的三十余种耐药基因进行检测。结果显示,从广西某地区采集的猪源病料中共分离得到65株猪源大肠杆菌,其均为多重耐药大肠杆菌且多集中于六重耐药与七重耐药。按所耐抗菌药物的种类分析发现其对β-内酰胺类、磺胺类、大环内酯类药物具有较高耐药性,耐药率分别98.46%、90.77%及84.62%,进一步分析发现其主要是对头孢噻呋钠、阿莫西林、磺胺间甲氧嘧啶、阿奇霉素等抗菌药物具有较高耐药性,对美罗培南、阿米卡星、黏杆菌素较为敏感。对部分菌株所含耐药基因进行整理发现,其多含有四环素类（tetA、tetM）、β-内酰胺类（CTX-m-u）及磺胺类（Sul2）耐药基因。综上所述发现广西地区猪源大肠杆菌耐药性情况较为严重,所含耐药基因也相对较多,因此在实际生产中需采用联合用药等相关措施进行疾病治疗以达到快速高效治疗疾病的目的。     

猪源多重耐药大肠杆菌中整合子的检测

为了解猪源多重耐药大肠杆菌中整合子的流行状况和分子特性,分析整合子在细菌多重耐药中的作用,采用PCR方法检测75株多重耐药大肠杆菌中整合酶基因和整合子基因盒。结果显示,猪源大肠杆菌Ⅰ型整合子流行普遍,75株猪源大肠杆菌中检出Ⅰ类整合子56株,检出率为74.7%;检出Ⅱ类整合子4株,检出率5.3%;未检出Ⅲ类整合子。共检出5种Ⅰ型整合子,各种Ⅰ型整合子整合不同种类、不同数目的耐药基因盒。这表明Ⅰ型整合子对细菌多重抗药性的产生和传播起着重要作用,整合子是介导细菌多重耐药性的重要分子机制。     

猪源大肠杆菌flor耐药基因的检测与分析

旨在了解动物源大肠杆菌中氯霉素类药物耐药基因的分子流行病学特征。采用PCR技术检测兽医临床分离的30株猪源大肠杆菌中flor基因的携带情况,利用序列分析技术对GenBank中登录的不同来源的大肠杆菌flor基因序列和临床分离的2株大肠杆菌(HZ19株与MZ6株)的flor基因序列进行相似性分析,并构建系统进化树。结果表明,有24株猪源大肠杆菌为flor基因阳性,阳性率为80%;2株猪源大肠杆菌flor基因的相似性为99.2%,与其他序列的相似性在99.0%~100%。提示分离到的猪源大肠杆菌对氯霉素类药物的耐药情况较为严重,在兽医临床中应引起足够重视。     

广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析

对广西规模化猪场分离的120株猪源大肠杆菌进行了头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和酰胺醇类药物耐药表型检测,并通过PCR检测菌株的β-内酰胺酶基因(bla_(TEM)、bla_(CTX-M))、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、oqxA、oqxB)、氨基糖苷类耐药基因(aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)和酰胺醇类耐药基因(floR)携带情况。耐药性检测结果显示,猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星具有高敏感率(74.0%),而耐药率最高为四环素类84.2%,酰胺醇类为70.8%,氟喹诺酮类为68.9%,氨基糖苷类为49.4%,大环内酯类为43.3%,最低为头孢菌素类31.4%。猪源大肠杆菌最低对1种药物耐药,最高对18种药物耐药,111株为多重耐药菌,以11耐(15株)、8耐(13株)和7耐(12株)为主,共有82种耐药谱型。耐药基因检测结果显示,8个耐药基因的阳性率均≥50.0%,其中阳性率最高为bla_(TEM)基因(91.7%),最低为aac(6′)-Ib-cr基因(50.0%),共存在53种基因组合类型,主要为bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr+ermB+floR(14株,11.7%)和bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+ermB+floR(13株,10.8%)。耐药基因和耐药表型相关性分析结果显示,bla_(TEM)和bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢氨苄耐药情况极显著相关(P0.01),bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢拉啶和头孢曲松耐药情况极显著相关(P0.01),qnrA、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星耐药极显著相关(P0.01),aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对庆大霉素和卡那霉素耐药极显著相关(P0.01),floR基因与大肠杆菌对氟苯尼考耐药情况极显著相关(P0.01)。本研究结果表明广西规模化猪场猪源大肠杆菌仅对极少数抗菌药物具有较高敏感率,多重耐药情况严重,具有丰富的耐药谱型,携带多种耐药基因且具有复杂的基因组合类型,所携带的耐药基因与其耐药表型具有一定的相关性。     

锦州地区肉鸡大肠杆菌的血清型调查

从锦州地区几家肉鸡场送检的病料中分离出了69株大肠杆菌,确定62株菌分属11个血清型,其中Ο2,Ο78,Ο1,Ο74,Ο11为主要血清型,分别占分离株的26.8%,18.8%,12%,9.7%,9.3%。表明锦州地区大肠杆菌血清型的复杂性,给该病的疫苗预防带来困难。药敏试验结果表明,所分离的69株大肠杆菌对丁胺卡那霉素、头孢曲松钠、头孢噻呋最敏感,高敏菌株达94%～100%,可作为防治肉鸡大肠杆菌病的首选药物。     

哈尔滨地区猪源大肠杆菌PMQR基因流行性检测

为了解哈尔滨地区猪源大肠杆菌中质粒介导的氟喹诺酮耐药(Plasmid mediated fluoroquinolone resistant,PMQR)基因的流行情况,本文通过对哈尔滨地区规模化养猪场进行采样处理,最终分离得到67株猪源大肠杆菌菌株,采用微量肉汤稀释法测定其对8种药物的最小抑菌浓度,针对PMQR基因设计特异性引物进行PCR扩增,结果显示,对8种兽医临床常用抗菌药物耐药率较高,多表现为多重耐药。oqx AB,qnr S,aac(6′)-Ib-cr,qnr B,qep A的检出率分别为70.15%,64.18%,22.39%,13.43%,11.94%,并没有检测到qnr A、qnr C、qnr D基因,这表明,PMQR基因在哈尔滨地区猪群中存在很高的检出率,这势必会加剧临床用药的难度,并且还为基因的水平传播提供可能。     

淄博地区猪源产ESBL大肠杆菌的多重耐药分析

为了解淄博地区猪源产ESBL大肠杆菌耐药特点,本研究于2016年4月对淄博地区3个养猪场采集猪粪便棉拭子,分离猪源产ESBL大肠杆菌,14种抗生素药敏片进行药敏检测。共收集236份猪粪便棉拭子样本,通过产ESBL确证试验获得94株产ESBL大肠杆菌,占猪源大肠杆菌的39.8%。所有产ESBL大肠杆菌菌株耐药性较强且呈现多重耐药,对碳青霉烯类药物敏感率较高。猪源产ESBL大肠杆菌分离率高且耐药谱广,给临床中应用抗生素的治疗猪源大肠杆菌病带来很大的障碍。     

广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药性和耐药基因检测分析

本研究目的是了解广西不同养殖模式猪源大肠杆菌的耐药情况和耐药基因流行情况,为临床合理用药治疗猪大肠杆菌病以及减缓细菌耐药性产生提供参考。采用K-B纸片法测定了180株分离自广西3种养殖模式猪源大肠杆菌的耐药情况,并通过PCR检测其携带EABLs(bla_(TEM)、bla_(CTX))、PMQR因子(qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)、磺胺类耐药基因(suL)和氟苯尼考耐药基因(floR)的情况。结果显示,大规模、中小规模和散养户养猪场的大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星的敏感率高于70%,而对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、利福平、林可霉素和复方新诺明的耐药率均高于90%。大规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星的耐药率极显著低于散养户(P<0.01),对氧氟沙星、庆大霉素和氟苯尼考的耐药率显著低于散养户(P<0.05);中小规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星、强力霉素和氟苯尼考的耐药性显著低于散养户(P<0.05);散养户大肠杆菌对环丙沙星、卡那霉素和壮观霉素的耐药率极显著高于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01),而对头孢噻肟的耐药率极显著低于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01)。大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户大肠杆菌的多重耐药指数(MARI)分别为0.62、0.63和0.68,分离自散养猪场的83.3%菌株(50株)表现为对13-23种药物的多药耐药,极显著高于大规模养猪场(50%,30株,P<0.01),显著高于中小规模养猪场(61.7%,37株,P<0.05)。在3种模式养猪场的大肠杆菌中均检测到bla_(TEM)、bla_(CTX、)qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr、ermB、suL和floR 9种耐药基因,其中bla_(TEM)和suL的阳性率高达100%,bla_(CTX)的阳性率最低,各模式猪场均低于57%。3种养殖模式之间的耐药基因阳性率相比差异显著,但与耐药表型不具有显著相关性。结果表明,3种养殖模式的猪场分离的大肠杆菌均具有严重的耐药问题,且菌株可携带多种耐药基因,表现为多重耐药,而不同养殖模式猪场分离的菌株耐药性存在显著性差异。     

苏中地区猪大肠杆菌病血清型鉴定及毒力基因的调查

无菌采集苏中地区兽医站、养殖场、动物医院疑似大肠杆菌感染的病死猪的有明显病变的肝、心、脾、肺等病料413份。通过细菌的分离培养,并进行生化试验和血清型鉴定,共分离到208株大肠杆菌,共鉴定出145株的的血清型,63株未能定型,定型菌株分别属于19种不同的血清型,同时对签定出的145株猪源大肠杆菌进行毒力基因检测,发现苏中地区猪大肠杆菌所含的毒力基因为含estⅡ的占50.3%,含estⅠ的占39.3%,含LT的占30.3%,含毒力基因Stx-2e的为20.7%,含Intimin的占15.9%。其中estⅠ和estⅡ较为流行。     

猪源多重耐药大肠杆菌Ⅰ型整合子的检测

为分析猪源多重耐药大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,应用PCR方法检测其Ⅰ型整合酶基因(intⅠ)。结果表明:58.6%(34/58)猪源多重耐药大肠杆菌菌株为Ⅰ型整合酶阳性,表明猪源大肠杆菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

辽宁地区猪源大肠埃希菌血清型调查分析

为了解辽宁地区猪群中大肠埃希菌流行的血清型,对来源于辽宁省9个不同地区的病料进行了大肠埃希菌的分离培养、生化鉴定,并采用平板凝集法与试管凝集法测定了这些大肠埃希菌的血清型。结果表明:分离鉴定的70株大肠埃希菌中有63株能够定型,分别属于28种血清型,O_(14)、O_(65)、O_(101)为优势血清型,占已定型菌株的44.44%;其次为O_8、O_(92)、O_(153),占已定型菌株的19.05%;4株自凝,3株未能定型。