应用ELISA方法检测猪尿中莱克多巴胺残留量

为了验证ELISA方法检测猪尿中莱克多巴胺残留量的可行性,采用ELISA方法对试剂盒的校正曲线、检测限、加标回收率试验等方面进行了验证。结果为试剂盒校正曲线的线性相关系数为0.9913;样品的定性检出限为0.087ng/mL,定量检出限为0.29ng/mL;添加1.1ng/mL、2.2ng/mL、4.4ng/mL、6.6ng/mL和11.0ng/mL的莱克多巴胺标准液时,变异系数分别为3.06%、8.55%、4.41%、9.92%、8.19%;平均回收率分别为93%、113%、103%、96%、91%。结果表明,应用ELISA方法检测猪尿中莱克多巴胺残留量符合要求,适合检测猪尿中莱克多巴胺残留量的初筛。     

ELISA测定猪尿液中β-受体激动剂残留的准确性评价

本研究建立克伦特罗间接竞争ELISA检测方法,对检测条件进行了优化确定,并利用猪尿液进行添加回收试验。结果显示:ELISA反应CLE-OVA包被抗原和CLE单抗的最适浓度分别为1:40 000和1:20 000,间接竞争ELISA的线性范围为0.016 l^8.520 0 ng/mL。该方法对克伦特罗、溴氯特罗、马布特罗和溴布特罗均有交叉反应。对冷冻储存半年以上的猪尿进行ELISA测定时,发现检测限可达58.848 3 ng/mL,药物添加回收率为85.19%~5 173.25%,变异系数为4.78%~96.79%;而经过MCX固相萃取柱净化处理后,检测限为0.076 ng/mL,添加回收率在101.21%~119.10%之间,变异系数为6.05%~18.38%。结果表明,SPE净化处理后,可有效去除尿液中的色素、蛋白等基质,提高了该法的灵敏度和准确性。     

猪肝和猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗残留的酶联免疫吸附检测法研究

采用混合酸酐法将沙丁胺醇与牛血清白蛋白偶联，并免疫家兔制备抗沙丁胺醇抗血清。以间接ELISA法测定血清效价，测得抗血清最佳工作浓度为1：6400，该抗沙丁胺醇抗血清对克伦特罗有110％的交叉反应性。建立了能够同时检测SAL和CL的间接竞争ELISA方法，该方法对沙丁胺醇的检测范围为0．48ng／mL～8．0μg／mL，对克伦特罗的检测范围为0．43ng／mL～7．3μg／mL，对沙丁胺醇的检测灵敏度为o．48ng／mL，对克伦特罗的检测灵敏度为0．43ng／mL。在猪肝和猪尿中添加1～50ng／g(ng／mL)的沙丁胺醇，添加回收率为72．2％～84．8％，变异系数为4．2％～28．3％，在猪肝脏和猪尿中添加1～50ng／g(ng／mL)的克伦特罗，添加回收率为84．3％～103．4％，变异系数为O．3％～35．5％。     

三种方法检测克伦特罗确保猪肉食用安全

本篇文章主要提出用三种方法:试剂条法、ELISA法、液相串联质谱法做为检测克伦特罗的重要手段。我们利用6个尿样和6个组织样品分别做了添加回收。用试剂条法检测6份添加浓度分别是3μg/L、6μg/L猪尿样品,其结果显示是阳性。用ELISA法对添加浓度分别是100ng/kg、300ng/kg的6份组织样品进行检测,回收率是98.9%～99.4%,液相串联质谱法检测猪肉组织中添加浓度为50ng/kg,100ng/kg,300ng/kg,500ng/kg的组织样品,检测回收率为99.4%～103.4%,验证结果证明三种方法均能满足实际检测的需要。     

克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒的检测效果比较

经克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒检测效果比较。结果表明,CLEIA试剂盒检测时间为33 min,而ELISA试剂盒则需要50 min,采用CLEIA试剂盒方法检测比ELISA试剂盒方法更加节省时间;CLEIA试剂盒IC50为40 ng/L,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为20.1 ng/L和90.7 ng/kg,而ELISA试剂盒IC50则为125.2 ng/L,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为23.5 ng/L和99.3 ng/kg,CLEIA试剂盒方法检测灵敏度高于ELISA试剂盒方法。     

同位素内标GC/MS法测定猪尿和猪肝中克伦特罗

建立了同位素内标法定量测定猪尿和猪肝中克伦特罗的方法。猪尿和猪肝用乙酸乙酯、盐酸溶液提取，再经SCX固相萃取柱净化、N，O-双三甲基硅基-三氟乙酰胺（BSTFA）衍生化，定容后用气相色谱-质谱（GC／MS）测定，并以D9一克伦特罗为内标定量。猪尿和猪肝中克伦特罗的检出限分别为0．3ng／mL和0．3ng／g，克伦特罗的测定在5．0～400ng／mL范围内具有良好的线性关系，猪尿和猪肝中的平均回收率分别为100．3％和97．2％，批内变异系数分别为2．1％～4．8％，3．4％～6．4％，批间变异系数分别为2．5％～5．1％，2．7％～6．0％。通过与外标法比较，该方法定量准确可靠，更加适宜用作猪尿和猪肝中克伦特罗的定量测定。     

GC/MS离子法测定猪尿中瘦肉精残留的研究及应用

GC／MS离子法测定猪尿中盐酸克伦特罗的残留，具有很好的分离度，特征离子与谱库检索一致，匹配度高。浓度10-200ng／mL范围呈良好的线性关系（R=0．9947）；仪器检出限为5—10ng／mL；回收率范围为69．7％-97．6％；批内变异系数≤6．1％。批间变异系数≤3．2％。检测60批猪尿中盐酸克伦特罗的残留。检出率为0。本方法对确证猪尿中盐酸克伦特罗残留具有重要意义。     

3种ELISA试剂盒检测盐酸克伦特罗效果评价

用3种盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒对10份未知猪尿液样品及5份标准浓度猪尿液样品进行检测,以比较试剂盒的检测效果。结果表明,试剂盒A在盐酸克伦特罗浓度为0ng／mL-10ng／mL的范围内其检测结果较准确,当浓度大于10ng／mL时其检测结果偏小;试剂盒B对盐酸克伦特罗的检测结果较标准样品浓度有时偏高,有时偏低,结果不够准确;试剂盒C的检测结果与标准样品的实际浓度相近,结果较准确。稳定性方面,试剂盒B的稳定性差,而试剂盒A及试剂盒C的稳定性较好。总的来说,试剂盒C在检测结果的准确性和稳定性上均较好,是3种试剂盒中效果最为理想的盐酸克伦特罗检测试剂盒。     

国内外克伦特罗ELISA检测试剂盒评价

根据B/B0-50%抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加检验、实际样品检验等方面的比较结果对两种克伦特罗ELISA检测试剂盒(A: 中国兽医药品监察所研制, B: 德国 r-Biopharm公司研制)进行评价。结果表明,试剂盒A的50%抑制浓度低于1.0 ng/mL; 检测范围在0.10~3.0 ng/mL之间;标准溶液浓度梯度中包括1.0 ng/mL这一限定值;板内变异系数小于13.7%,板间变异系数小于8.8%;样品回收率在70%~110%之间;实际样品检验和试剂盒B检样的阳性符合率为95.5%。试验证明,试剂盒A与试剂盒B的水平相当。     

两种克伦特罗ELISA试剂盒的比对试验

应用意大利Tecna公司和德国r-B iopharm公司的克伦特罗酶联免疫(ELISA)试剂盒检测猪尿样和猪肝样品,并对两者的标准曲线线性范围、斜率和B/B0抑制浓度、板内和板间变异系数、阳性检出率、回收率等进行了比对。结果表明,当阳性判定阈值设定在1.0~5.0 ng/mL范围时,2种试剂盒均能满足分析要求,对尿样检测Tecna试剂盒比r-B iopharm试剂盒的检测时间要短;但在检测低浓度克伦特罗的尿样时,r-B iop-harm试剂盒更好,对肝样检测Tecna试剂盒有优势。     

氯霉素竞争ELISA检测方法的研究

用抗氯霉素的MAb 2G2建立了检测氯霉素的竞争ELISA,对主要影响因素进行了研究,其回归方程为y=0.3522x+0.5939,相关系数为RZ=0.9906,检测线性范围为0.098 ng/mL～25 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为1.848 ng/mL.检测限为0.135 ng/mL.与氯霉素琥珀酸钠交叉反应率为143%,与其它结构类似物和常见抗菌素的交叉反应率均小于0.01%.批内和批间变异系数分别为4.98%和9.42%,牛奶样的平均添加回收率为101.31%.所建立的检测氯霉素竞争ELISA法,符合检测氯霉素残留的要求,为氯霉素残留快速检测试剂盒的研制奠定了基础.     

某肉联厂屠宰猪“瘦肉精”残留的检测

采用英国进口试剂盒 ,用竞争性ELISA对某肉联厂屠宰猪“瘦肉精”残留量进行了检测 ,按 3 %～ 5 %的比例在 54批 5 42 8头屠宰猪中进行随机抽样 ,检测了 197头尿样 ,结果表明 ,“瘦肉精”的残留量超过 5 1ng/kg的为 83头 ,占总检测屠宰猪的 42 13% ,其中某地区猪“瘦肉精”残留量超过 5 1ng/kg的为 78 95 % ,由此可见 ,猪肉中“瘦肉精”的残留量不容忽视。     

酶联免疫吸附法检测猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留

以莱克多巴胺单克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附（ELISA）法测定猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留。该法对莱克多巴胺的检测限为0.8ng/mL（g）,在空白组织中的添加回收率为80.4%～109.5%,变异系数为5.8%～12.6%。     

ELISA对猪尿中沙丁胺醇的测定效果

本文探讨了酶联免疫吸附法(ELISA)测定猪尿中沙丁胺醇的效果。在猪尿中添加1、2、4和8ng/m L四个不同浓度的沙丁胺醇,利用ELISA法测定回收率。结果显示,猪尿中沙丁胺醇在0~8.1ng/m L范围内的回收率在86.0~94.5%之间,精密度在3.9~11.6%之间,说明ELISA法检测猪尿中沙丁胺醇结果相对稳定、可靠,能够满足初检筛选要求,是一种值得在基层检测部门推广使用的方法。     

固相萃取-液相色谱串联质谱法测定猪尿中的巴氯芬

为了建立用固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物尿液中巴氯芬药物残留的检测方法,试验采用叔丁醇-叔丁基甲醚对猪尿样品进行提取,提取液经混合型阳离子固相萃取小柱（MCX）净化、富集后,以液相色谱串联质谱测定,外标法定量。结果表明,该方法检出限为0.2 ng/mL,定量限为0.8 ng/mL,巴氯芬在0.8~20 ng/mL的添加浓度范围内线性良好,线性相关系数大于0.9997,在低、中、高（0.8、1.6、5.0 ng/mL）三个浓度的添加水平回收率在80%~120%之间,批内、批间精密度均小于10%。该方法灵敏度高,定性、定量准确,可用于猪尿中巴氯芬药物残留的定性、定量检测。     

磺胺二甲基嘧啶残留检测ELISA方法的研究

本实验对磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA反应的各种条件进行了筛选优化,建立了直接竞争ELISA检测方法,该法最小检出量为1.97ng/mL,检测范围5ng/mL～200ng/mL,样品添加回收率为73.20%～91.16%,批内变异系数<5.5%,批间变异系数<9%。与美国进口Max Signal试剂盒相比较,灵敏度为100%,特异性为96.0%,两者的符合率为98.3%。     

盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒质量的评价

本研究使用盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒,基于免疫荧光层析原理,实现对猪尿中所含克伦特罗的定量检测,并对试纸条的灵敏度、准确度与精密度、特异性、稳定性等进行了初步的性能评价。结果表明,以四参数法对定量曲线进行拟合,线性系数为R²=0.99972;检测限达到0.1 μg/L;对3个不同浓度的添加回收试验,测得其回收率为80%~120%;批内变异系数分别为12.2%、11.1%、15.2%;与4种β-肾上腺素受体激动剂和8种常用的抗生素交叉反应率均低于0.01%;同时验证了本试剂盒在1年的保存期限有效。整个检测过程只需15 min。     

进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立

为了建立进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗残留快速检测技术,试验建立间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行检测。结果表明:包被抗原的最适质量浓度为20.0μg/mL,抗体的最佳稀释度为1∶5 000,半抑制浓度(IC50)=2.1 ng/mL;该方法的最低检测限达0.05 ng/mL,与沙丁胺醇和莱克多巴胺的交叉反应率分别为8.28%、7.75%,平均加标回收率为94.52%。该方法灵敏度高,样品前处理简便、快速,适用于进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗残留的大批量现场检测。     

ELISE测定猪尿、猪肝中克伦特罗残留的研究

ELISA(酶联免疫吸附法)测定猪尿、猪肝中违禁药物克伦特罗残留量影响实验结果表明,德国拜发与北京望尔生产的两种ELISA试剂盒具有操作简单、时间短、成本低、敏感度高等特点。在室温20-22℃条件下,试验制备过程中必须做到控温度、控转速、控流速及洗板过程中应注意事项,这样可大大提高在实际操作过程中检测的准确性。     

化学发光免疫分析法检测猪尿中莱克多巴胺残留

本试验运用化学发光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay,CLIA）检测猪尿中莱克多巴胺（Ractopamine,RAC）的残留。检测限为0.01 ng/mL,检测范围为0.036～32.2 ng/mL。添加浓度分别为0.1、1、10 ng/mL,平均回收率为73.2%,批内平均变异系数为9.7%,批间平均变异系数为11.3%。而本研究所建立的化学发光免疫检测方法(CLISA)可以达到检测RAC残留的要求。