猪腹泻相关的冠状病毒检测方法研究进展

猪冠状病毒是猪病毒性腹泻的一类重要病原,感染仔猪死亡率可达100％,给养猪业带来了巨大的经济损失.文章将对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒以及猪急性腹泻综合征冠状病毒等4种猪冠状病毒检测方法研究现状进行总结,对各种方法的优缺点和应用前景进行系统的讨论和展望,以期为临床上猪冠状病毒的高效检测、精准防...     

猪德尔塔冠状病毒纳米PCR检测方法的建立

根据Gen Bank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCo V)毒株M基因设计特异性引物,建立了PDCo V纳米PCR检测方法并进行了临床样品检测。结果显示:该方法对标准品检测的最低浓度可达102 copies/μL,与其他几种常见猪病病毒无交叉反应;用该方法检测国内猪场62份腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,该纳米PCR方法的检出率更高,而两种方法对268份进境活猪粪拭子样品检测均为阴性。结果表明,本研究所建立的纳米PCR检测方法适用于国内猪场的PDCo V检测和进境活猪的监控检测,可作为PDCo V实验室检测的有力技术手段。     

猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)毒株序列设计特异性引物,建立了检测PDCoV的实时荧光PCR方法。该方法在标准品浓度2.49×10~8~2.49×10~2 copies/μL范围内线性关系良好;特异性试验显示,其他几种常见猪病病毒未见典型扩增曲线;敏感性试验显示,最低检测下限为24.9 copies/μL;重复性试验显示,批内和批间变异系数小于3%。用该方法检测62份猪腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,前者的检出率更高;两种方法检测1 168份进境活猪粪便拭子样品,结果均为阴性。结果表明,本研究所建立的方法适用于国内猪场的PDCoV的检测和进境活猪的监控检测,也可作为PDCoV的诊断及分子流行病学调查的技术手段。     

我国猪急性腹泻综合征冠状病毒研究进展

猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV),一种来源于蝙蝠的新型冠状病毒,于2017年1月在华南地区首次被发现,是冠状病毒科(corona2viridae)、α冠状病毒属(alphacoronavirus)的新成员.SADS-CoV主要感染5日龄以内新生仔猪,对初生仔猪的危害严重.SADS-CoV可引发引起剧烈呕吐、...     

猪德尔塔冠状病毒致病机理及防治研究进展

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新发现的猪肠道冠状病毒,能引起猪腹泻、呕吐、脱水甚至死亡,给养猪业带来巨大威胁。深入开展PDCoV的研究对该病的防控有重要意义。PDCoV基因组编码的4种结构蛋白、15个非结构蛋白和3个辅助蛋白在病毒复制、增殖及致病过程中发挥重要作用。PDCoV致病机理复杂,笔者从其侵入宿主细胞以颉颃干扰素反应、诱导细胞凋亡、调控细胞自噬、抑制细胞焦亡途径来逃避宿主免疫应答,以及其他影响PDCoV复制的分子机制方面对其致病机理进行总结。PDCoV呈全球性流行趋势,常用S、M和N基因作为核酸检测和抗体检测靶标进行诊断。目前,尚未开发出针对PDCoV的安全有效的商品化疫苗和治疗方法,随着生物技术的发展,在灭活病毒疫苗、减毒活疫苗、重组载体疫苗、病毒样颗粒疫苗和乳酸菌载体口服疫苗上取得一定进展,且广谱抗病毒药物、抗病毒分子蛋白和新型抗病毒技术在PDCoV抗病毒研究中显示了良好的应用前景。因此,笔者总结PDCoV编码蛋白功能、致病机理、诊断方法及PDCoV的疫苗开发和抗病毒治疗,以期为后续科学研究和有效防治提供借鉴。     

猪冠状病毒的起源与遗传演化

冠状病毒变异率高,宿主广泛,主要感染哺乳动物和禽类,严重威胁公共卫生安全与养殖业发展.生猪养殖业中,冠状病毒也是危害猪只健康的重要病原.本研究对4种代表性猪冠状病毒:猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic...     

猪呼吸道冠状病毒研究进展

综述了猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的病原学意义、分子生物学特性、与传染性胃肠炎病毒TGEV的鉴别诊断、PRCV对TGEV的免疫保护作用等四个方面的研究进展。     

我国猪德尔塔冠状病毒病的流行情况及分子生物学检测方法研究进展

猪德尔塔冠状病毒主要引起猪的腹泻,各阶段猪均可感染发病,哺乳仔猪受到的危害最严重,易与其他猪病混感或继发多种疾病,致猪死亡率增加,给养猪业造成巨大的经济损失。文章就我国猪德尔塔冠状病毒病的流行情况及分子生物学检测方法研究进展进行综述,希望对该病的诊断和防控工作提供参考。     

猪冠状病毒感染

冠状病毒属(Coronavirus)病毒颗粒略呈球形,直径约80-220nm,因其外被囊膜,且囊膜纤突规则地排列成皇冠状而得名。冠状病毒的基因组为单分子线状正股单链RNA,大小27-32kb,是已知RNA病毒基因组     

Research Advances on Porcine Emerging Coronaviruses

Currently, corona virus disease 2019 (COVID-19) caused by SARS-CoV-2 is still raging worldwide, which attracts great concern about coronavirus originated from animal. Porcine deltacoronavirus (PDCoV) and swine acute diarrhea syndrome coronavirus (SADS-CoV) are newly discovered porcine coronaviruses in recent years, they not only damage pig industry severely but also pose potential threats to public health. This article reviews the literature concerning the etiology, origin and evolution, pathogenicity, and diagnostics of PDCoV and SADS-CoV, presenting the prospect of research work. We aim to expand understanding on SARS-CoV-2 and provide references for subsequent research on PDCoV and SADS-CoV.     

Research Advances on Porcine Epidemic Diarrhea and New Vaccine

Porcine epidemic diarrhea (PED) is one of the important diseases that endanger the healthy development of the pig industry.It has acute and highly infectious characteristics,causing severe economic losses to the pig industry.Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) infection could destroy the animal's digestive system,cause the appetite of sick pigs to decline,vomit,and severe diarrhea.And the piglets cured by drugs will also have a serious impact on production due to factors such as poor growth and development,which will bring huge problems to the farmers.The outbreak of PEDV highly pathogenic mutant strains in China in 2010 led to a significant increase in the incidence and mortality of PED,which severely affected pig production in China.The outbreak of PED has drawn close attention from the pig industry.Scholars in related research fields have conducted more in-depth research on the pathogenic mechanism of PEDV and the new PED vaccine.Five new types of PED vaccines,including subunit vaccine,virus live vector vaccine,bacterial live vector vaccine,transgenic plant vaccine and nucleic acid vaccine,have been developed successively,and new breakthroughs and progress have been made.Compared with the traditional PED inactivated vaccine and PED attenuated vaccine,the new PED genetically engineered vaccine has the advantages of good safety,simple preparation,and good immune effect.This article focuses on the pathogenesis of PEDV and the research progress of five new PED vaccines,so as to deepen our understanding of new PEDV and PED vaccines,in order to provide references for prevention and control measures of PEDV infection.     

猪流行性腹泻及新型疫苗研究进展

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是危害养猪业健康发展的重要疾病之一,具有急性、高度传染性的特征,给养猪业造成了严重的经济损失。猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）感染会破坏动物机体的消化系统,造成患病猪食欲下降、呕吐以及严重腹泻等,且药物治愈后的仔猪也会因为生长发育不良等因素严重影响生产,给养殖户带来巨大的困扰。2010年PEDV高致病变异毒株在中国暴发流行,导致PED的发病率和死亡率大幅升高,严重影响中国养猪生产。此次PED的暴发流行引起了养猪行业的密切关注,相关研究领域的学者对PEDV致病机制和PED新型疫苗进行了更加深入的研究,亚单位疫苗、病毒活载体疫苗、细菌活载体疫苗、转基因植物疫苗和核酸疫苗5种PED新型疫苗相继被开发,并取得全新的突破和进展。与传统的PED灭活苗和PED弱毒疫苗相比,PED新型基因工程疫苗具有安全性好、制备简单、免疫效果好等优点。文章着重对PEDV发病机理和5种PED新型疫苗的研究进展展开综述,从而加深对PEDV和PED新型疫苗的了解,以期为PEDV感染的预防和控制措施提供参考。     

猪巨细胞病毒病研究进展

猪巨细胞病毒病作为一种传染性疾病,全世界98%以上的猪受到过本病毒的感染,感染猪群98%以上的血清抗体均呈阳性。该病主要通过上呼吸道传播和排毒,对猪场造成较大危害。本文就猪巨细胞病毒病的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断方法等方面作一综述。     

2018年江西及福建省新现猪急性腹泻冠状病毒的分子流行病学调查

猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-CoV)是2017年在我国广东首次发现的一种可导致新生仔猪急性水样腹泻及死亡的新型冠状病毒。为调查2018年江西及福建猪群中该病毒的感染情况,试验建立了一种SADS-CoV套式RT-PCR检测方法,并调查2018年江西及福建腹泻猪只样本中SADS-CoV的流行情况。根据GenBank数据库中SADS-CoV GDS04毒株(登录号MF167434)的核衣壳蛋白(N)基因核酸序列,设计了两对特异性套式引物。以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等病毒的基因组为模板检测引物的特异性。通过优化反应条件建立了检测SADS-CoV的套式PCR方法,用建立的套式PCR方法对2018年从江西和福建两省8个猪场采集的492份腹泻样品进行检测。应用设计的两对套式引物扩增出了650 bp和291 bp两个特异性片段。试验建立的套式PCR检测方法特异性好,只能扩增SADS-CoV,其最低检测限度为102拷贝/μL。利用所建立的方法对来自江西和福建省的492份腹泻猪临床样品进行检测,从福建猪群样品中检出了2份SADS-CoV感染,未从江西临床样品中检出SADS-CoV。试验将为SADS-CoV的临床检测提供一种套式PCR检测方法,结果表明该病毒在福建猪群而未在江西腹泻猪群中流行,将对SADS-CoV的临床诊断等具有应用价值。     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV)是断奶猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的病原。本文对其流行病学、理化特性、致病机理、诊断方法及分子生物学作了较为全面的综述。     

苯基吡啶酮衍生物影响猪δ冠状病毒复制的作用分析

本研究旨在探讨苯基吡啶酮衍生物JIB-04对猪δ冠状病毒（porcine deltacoronavirus,PDCoV）的抗病毒作用,并初步研究可能的作用机制。首先应用CCK-8方法检测不同浓度JIB-04作用后的细胞活力,并计算半数毒性浓度（CC₅₀）和半数有效浓度（EC₅₀）。应用TCID₅₀方法检测JIB-04预处理和共处理对PDCoV复制的影响,检测JIB-04处理对PDCoV吸附或入侵细胞的影响。最后,应用qRT-PCR、TCID₅₀和Western blot方法检测JIB-04处理对不同时间点病毒复制的影响。结果表明,JIB-04在所有受试浓度下均不影响LLC-PK细胞的活力,CC₅₀>640 μmol·L^-1,EC₅₀=0.216 μmol·L^-1,SI指数>2 963。与未处理的病毒感染组相比,JIB-04处理极显著降低了PDCoV的滴度（P<0.001）,但对PDCoV吸附和入侵过程没有影响。感染6 h后,与未处理的病毒感染组相比,JIB-04处理组PDCoV滴度极显著下降（P<0.01）;感染12和24 h后,PDCoV滴度、基因组拷贝数、N蛋白表达水平均极显著下降（P<0.01）。JIB-04的细胞毒性较低,药物选择性指数较高,在体外能抵抗PDCoV感染,可以作为潜在的抗病毒药物。在PDCoV感染过程中,JIB-04能够抑制病毒核酸和蛋白质的合成,抑制病毒的复制。     

猪细小病毒疫苗研究进展

猪细小病毒是引起猪繁殖障碍的主要病原之一。在世界范围内造成了巨大的经济损失，本文不常规疫苗，免疫程序及新型疫苗的研究作了综述，特别是猪细小病毒VP2基因在基因工程疫苗及核酸疫苗方面的应用前景的介绍，对其深入的研究甚有参考价值。     

猪急性腹泻综合征冠状病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立快速、灵敏且特异的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒（swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）检测方法,本试验扩增SADS-CoV N基因保守区域将其克隆至pMD18-T载体。所构建的重组质粒pMD18-T-SADS-qN作为阳性质粒标准品,以其为模板建立一种SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示,所建立方法在3.31×10¹~3.31×10⁷拷贝·μL^-1模板量时,呈良好的线性关系,相关系数（R²）为0.997,斜率为-3.318。该方法特异性检测SADS-CoV;而猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）检测结果均为阴性。所构建的标准品检测灵敏度下限可以达到3.31×10¹拷贝·μL^-1,组内和组间变异系数均小于1%,表明其具有良好的灵敏性和重复性。用该方法检测SADS-CoV感染IPI-2I和IPEC-J2细胞后不同时间点和不同接毒剂量的复制情况,结果显示,SADS-CoV感染细胞后2 h病毒含量较低,在12~36 h病毒含量迅速增长,36 h后增长速度减缓且病毒含量维持在较高水平。分别用0、0.1、1 MOI SADS-CoV感染细胞结果显示病毒的mRAN转录水平呈现剂量依赖性增加,当MOI为1时,IPI-2I和IPEC-J2细胞病毒含量分别为10^6.7、10^5.3拷贝·mL^-1。进一步利用所建立的方法对经口服攻毒SADS-CoV仔猪的临床样本进行检测,结果发现病毒在空肠回肠含量较高,表明病毒主要定殖于空肠和回肠。综上表明,本研究建立SYBR Green荧光定量PCR检测方法能灵敏特异地检测SADS-CoV,为SADS-CoV的诊断和病毒相关基础研究提供可靠的检测手段。     

猪腹泻相关肠道病毒分离研究进展

猪腹泻是全球养猪生产中最常见的疾病之一,病毒性腹泻具有传播快、致死率高和防控难的特点。常见的引起仔猪腹泻的病毒包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV),近几年新发现的猪δ冠状病毒(PDCoV)、猪嵴病毒(PKV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)也与仔猪腹泻相关。病毒分离是病毒感染诊断的金标准,也是进行病毒研究的前提。对上述6种常见猪肠道病毒的分离进展进行综述,可为掌握这些病毒的分离情况、疾病发展动向监测、疫苗研发以及猪腹泻病的防控提供参考。