数字PCR技术在动物疫病检测中的应用

为了支持动物疫病流行地区的控制及消除计划,以及在动物疫病非流行地区进行有效筛查,必须使用更加准确灵敏的诊断手段。数字PCR可实现绝对定量及痕量核酸的检测,与传统检测方法相比具有不依赖参考物或标准品、对抑制剂具有较高耐受性、灵敏度和精准度更高的优点。数字PCR作为一种定量分析的核酸检测新方法,在动物疫病检测中得到了应用,围绕数字PCR技术的原理、应用、存在的问题及发展趋势等进行综述及分析,为数字PCR在动物疫病检测中的进一步应用提供参考。     

数字PCR技术及其在动物生产中的应用

数字PCR(digital PCR,dPCR)技术是近几年迅速发展起来的第三代PCR技术,通过把反应体系均分到大量反应室中独立扩增单分子核酸,采集产生的荧光信号后根据泊松分布和阳性比例计算得到检测结果.dPCR技术能实现对样本中低水平目标核酸的绝对定量,具有高灵敏度、高准确度、重现性好、无需标准曲线等优点.本文综述了d...     

多重PCR技术在动物疫病诊断中的应用

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术已经建立20余年,在这20多年里,它被广泛应用于生命科学各个领域,已经显示出了强大的工具性作用和旺盛的生命力。     

防止PCR检测动物疫病反应体系污染措施

PCR技术是利用DNA聚合酶,在体外大量合成(扩增)DNA片段的分子生物学技术.具有特异性好、灵敏度高、简便快速等特点.即使在10万个细胞中含有一个拷贝的待检核苷酸序列,也可用PCR技术检测出来.     

实时荧光PCR技术在动物疫病诊断中的应用

近年来，实时荧光PCR技术在动物疲病诊断中的应用得到了进一步的发展，在诊断动物的病毒性、细菌性和寄生虫性疫病中得到了广泛的应用。实时荧光PCR不仅实现了常规PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，实时荧光PCR技术由于多使用了一条可与模板互补配对的荧光探针，提高了特异性，并且由自动化仪器收集荧光信号，避免了肉眼判断的主观性，又可进一步提高灵敏度；实时荧光PCR技术全封闭反应，无须PCR后处理，避免污染，保证了结果的可靠性和重复性。随着实时荧光PCR试剂盒的进一步开发，实时荧光PCR技术将会在动物疫病诊断中得到更加广泛的应用。     

动物疫病检测新技术展望

随着现代物理学、生物化学和分子生物学的不断发展,动物疫病检测技术也在常规的传统技术层面上不断得到了延伸、拓宽、衍化和派生,诞生了许多新方法新技术,有不少进入了应用研究阶段。这些新技术大致可分两类,一类为免疫检测技术;另一类为分子生物学技术。在此,本文将简单介绍一些新技术,并对这些技术应用于动物疫病检测的前景作一些前瞻性认识。     

狂犬病病毒微滴式数字PCR检测方法的建立

为了建立可绝对定量狂犬病病毒(RABV)的微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法,本试验根据RABV基因组起始区域设计引物和探针,继而优化引物和探针浓度以及退火温度,并对建立的ddPCR方法的灵敏度、特异性和重复性进行分析。结果显示：ddPCR方法的最佳引物和探针浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为55℃;ddPCR方法的标准曲线相关系数(R²)为0.999,呈现良好的线性关系;灵敏度高,最低可检测到3.37 copies/μL;特异性良好,与常见犬病原无交叉反应;重复性好,检测结果稳定。临床样品的检测结果显示,本试验建立的狂犬病病毒ddPCR方法与实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)方法的符合率为100%。结果表明,本试验建立的狂犬病病毒微滴式数字PCR方法灵敏度高、特异性强,可用于狂犬病病毒的绝对定量检测。     

液相芯片技术在动物疫病检测中的研究进展

液相芯片技术是整合了激光技术、流式细胞仪、数字信号处理和传统化学技术的一种新型生物分子检测技术,目前广泛应用于各种免疫分析和核酸检测中。液相芯片技术支持单重和多重分析,可在多种测定方法中对蛋白质和核酸靶标进行高通量检测,具有高通量、操作简单、适用范围广、重复性好、特异性高、所需样品量少、更灵敏稳定、成本低等优点,正逐渐代替传统检测和定量病原体的工具,如实时荧光定量PCR扩增检测系统（qPCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等检测方法。动物传染病严重危害着养殖业健康发展,一些诸如高致病性禽流感的人畜共患病对人类健康造成了严重威胁。高效灵敏的诊断系统将有助于在传染病暴发期间筛选大量样本,防止感染扩散。液相芯片技术的发展为高通量检测和疾病的预防提供了新的平台。作者简要概述了液相芯片技术的原理和优点,重点阐述了液相芯片技术在检测动物疫病,包括猪病、禽病、兔病、犬病、啮齿类动物和其他动物疫病方面的研究进展。相信今后液相芯片技术会成为临床诊断、基础研究、新药开发、司法鉴定、食品卫生监督、生物武器防范等领域的一项重要分析检测技术,该技术的发展将大大推动生命科学研究与进步。     

数字PCR技术在动物疫病诊断中的应用进展

数字PCR技术是一种能够进行绝对定量的核酸检测技术,与实时荧光定量PCR技术相比,该技术敏感性更高、定量不依赖于标准曲线、对反应抑制物的耐受能力也更高.目前,该技术在转基因检测、物种鉴定、疾病诊断、病原微生物鉴定和精确定量分析等领域具有较广阔的应用前景.论文对数字PCR的发展历史、原理、优缺点及在动物疫病诊断中的应用进...     

抗体检测技术在动物疫病防控中的应用

做好动物疫病防控工作是维护我国畜牧养殖产业健康发展的重要保障.在动物疫病防控工作中,抗体监测技术的应用能更加有效地诊断出动物疫病感染状况,为制定针对性的治疗方案提供科学依据,进而提高动物疫病防控工作的质量.     

微滴式数字PCR定量检测滑液囊支原体方法的建立及应用

为绝对定量滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）,试验根据已发表的MS VlhA基因序列,针对其保守区域分别设计了1对特异引物和1条探针,建立了ddPCR定量检测MS的方法,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示：建立的方法最佳引物浓度为20μmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为54℃;该方法仅检测出MS毒株,不能检测出其他禽源病原,MS重组质粒标准品最低检测限为3.5拷贝/μL,3个连续稀释的MS重组质粒DNA检测的变异系数均小于5%;45份病鸡喉拭子、肺脏及关节囊样品检测结果显示,该方法的MS阳性检出率（11.1%）高于荧光定量PCR(8.9%)。结果表明,建立的ddPCR方法定量检测MS特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量MS提供了适合的技术手段。     

PCR技术在动物疫病诊断中的应用

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）,又称体外扩增技术,最早于1985年由Kary Mullis研制,是一种根据生物体内DNA复制的特点而设计的在体外对特定DNA序列进行快速扩增的新技术,具有特异性和敏感性高、操作简便、快速高效等特点。它能特异地在体外扩增微量基因或DNA片段,将皮克（pg）水平的DNA特异地扩增10^6～10^7倍,达到检测诊断的目的;在对特异性基因进行扩增时可使核苷酸的错配率低于万分之一;其操作过程在2～4h即可完成,有效缩短了诊断的时间。PCR技术目前已广泛应用于从基因扩增、基因检测到基因克隆、基因改造、     

血样采集技术在动物疫病检测中的注意事项及应用

为全面提升动物健康水平,应积极落实动物疫病预防工作,而疫病检测是动物疫病防治的基础,本文提出采用血样采集技术的建议。文章在阐述动物疫病检测工作中存在的主要问题基础上,对禽、牛羊、猪对应的采血方法分别探究,最后分析了动物疫病检测工作中的注意事项。希望与动物疫病检测人员分享技术经验,共同优化动物疫病检测工作质量。     

蜜蜂幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR检测方法的建立

为建立新型高灵敏度的幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR (droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,针对幼虫芽孢杆菌16S rRNA基因设计特异性引物和探针。通过对反应体系优化,建立幼虫芽孢杆菌ddPCR检测方法,并对方法的灵敏度、线性关系、特异性及重复性进行评估。结果:建立的方法与其他6株非幼虫芽孢杆菌无交叉反应,具有良好的特异性;线性关系良好(R^2=0. 991 4);灵敏度为2. 9 copies/μL; ddPCR检测的相对标准偏差(RSD)在0. 93%～5. 27%,重复性好。试验表明本研究建立的ddPCR方法可以对幼虫芽孢杆菌进行绝对定量检测。     

抗体检测技术在动物疫病防控中的应用分析

兽医师日常的主要工作内容就是进行动物疫病的防控,随着我国农业现代化的不断推进,动物疫病监控已经被提升到一个最为重要的地位,各水产畜牧兽医站都将大量的物力、人力投入到动物疫病防控中.随着抗体检测技术水平的提高,其在基层水产畜牧兽疫病防控中作用越来越显著,本文作者结合自己的实际工作经验,并参阅相关参考文献对抗体检测技术在动物疫病防控中的应用进行回顾性总结论述,为今后更好的提高本县动物疫病防控工作质量提供一定参考.     

化学发光免疫分析技术在动物疫病检测中的应用

化学发光免疫分析(chemiluminesecence immunoassay,CLIA)是用于疫病检测的一种免疫检测技术,是基于免疫反应原理,结合化学发光检测技术而建立的。与放射免疫分析、酶免疫分析等标记免疫技术相比,具有无放射性污染、灵敏度高和特异性强的特点,已被广泛应用于疫病流行病学调查、诊断、药物分析以及微生物检测等方面。本文简要介绍了CLIA技术的基本原理及发展,从细菌、病毒和寄生虫检测方面,综述了近年来该技术在动物疫病检测中的应用,提出该技术正向高特异性、高灵敏度、高通量、快速和自动化检测的方向发展,这为今后CLIA在动物疫病检测中的应用研究提供参考。     

谈抗体检测技术在动物疫病防控中的应用

近几年来,我市的畜牧业养殖得到快速的发展,成为农民增收,农业增效的重要的支柱产业.但是,在畜牧养殖产业发展的同时我们不得不正视一个问题,那就是动物疫病,导致动物生长不佳,同时还会降低畜牧产品质量,甚至引起动物死亡,造成一定的经济损失.本文将通过分析动物疫病的危害、抗体检测技术,进一步探讨抗体检测技术在动物疫病防控中的有效应用,希望对于动物疫病防控和良好的进行畜牧养殖有所帮助.     

实时荧光PCR技术在动物疫病诊断中的应用研究

实时荧光定量PCR技术于1996年美国Applied Biosystems公司推出以来,取得飞速发展。该技术通过在普通PCR反应体系中加入荧光探针或荧光染料,在PCR过程中直接检测荧光信号的变化情况,从而能够实时监测整个PCR进程,     

水貂阿留申病毒的微滴式数字PCR方法的建立及初步应用

为建立水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,本研究根据AMDV VP2基因的保守区设计特异性引物和探针,通过PCR扩增AMDV VP2基因并克隆至p MD19-T载体,构建重组质粒p MD19-T-AMDV,并经PCR和测序鉴定后利用该质粒标准品作为模板,通过各反应条件的优化,初步建立了检测AMDV的ddPCR方法。分别以AMDV、水貂肠炎细小病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、水貂流感病毒基因组为模板,按照本研究建立的ddPCR方法检测,评估其特异性;将1.43×10⁷拷贝/μL～1.43×10⁰拷贝/μL的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR和文献中的荧光定量PCR (qPCR)检测,评估该方法的敏感性;分别以不同浓度的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR分别进行批内和批间重复性试验,以变异系数(CV)评估该方法的重复性。优化结果显示,该方法的最佳引物终浓度为400 nmol/L (1.2μL)、探针终浓度为200 nmol/L (0.6μL)、退火温度为60℃。特异性试验结果显示,该方法仅可检...