影响马胚胎移植成功率的关键因素分析

旨在探讨影响马胚胎移植效率的几种关键因素。本研究统计了国内北京马场、河北马场和山东马场2013-2018年胚胎移植数据,3个马场供体马数量分别为15、21和25匹,受体母马数量分别为56、50和75匹。所有母马年龄为3~12岁。统计供体马冲胚时间对胚胎回收率的影响;胚胎日龄对移植后受体马妊娠率的影响;供、受体母马排卵同期化程度对移植后妊娠率的影响;受体母马居住移植基地时间对移植后妊娠率的影响。结果显示,母马在配种季节注射前列腺素（PG）+GnRH类似物或PG+hCG诱发排卵,发情周期分别为（14.5±0.8）和（14.3±1.1）d,显著低于对照组的（（20.5±2.6）d,P<0.05）;排卵后第8天冲洗子宫的胚胎回收率均高于第7天,但差异不显著;8日龄胚胎移植后受体马的妊娠率均高于7日龄,差异不显著;供体母马排卵比受体母马早1 d时,胚胎移植后的妊娠率最高;受体母马在移植基地居住时间大于1年时,移植后妊娠率高于居住时间小于0.5年的受体马。根据以上结果,本研究得出如下结论,PG与hCG或GnRH类似物联合使用可缩短母马发情周期,母马排卵后第8天的胚胎回收率和移植后妊娠率较高,胚胎移植时选择居住时间大于1年且排卵时间比供体晚1 d的母马作受体。     

马胚胎移植现状

马的胚胎移植自七十年代首次移植成功以来有了很大的进展．目前，胚胎回收率达５５－８０％，移植妊娠率为７０％。而低生殖力的母马在其胚胎回收率．受体妊娠率及维持妊娠方面均较低．手术移植与非手术移植的妊娠率稍有不同。受体母马排卵时间在供体排卵前１－２天至排卵后２－３天的妊娠率比较高．卵巢摘除的母马用孕酮处理与供体同步排卵的前提下，也可以成功的作为胚胎受体．利用垂体制剂、促性腺素释放激素等类药品超排并不是很有效．每周期平均只有３个卵泡排卵．通过胚胎切割可以产生双驹，但成功率低；桑椹期较囊胚期胚胎冷冻效果好．胚胎在４℃保存２４小时其活力并未丧失。将体外受精的卵母细胞移植到受休进一步研究。     

非手术采集和移植骡胚的研究

选择已经配种的供体母马18匹,非手术冲洗子宫20次,其中排卵后4～5天的母马,冲洗5次,冲洗液平均回收率为94.80％,但未采到卵;排卵后5(1/2)～7(1/2)天的,冲洗15次,冲洗液平均回收率为85.66％,采到受精卵(骡胚)14个,采卵率为93.00％。结果表明,在排卵5(1/2)天之前,用非手术子宫采卵法未采到母马受精卵,而排卵5(1/2)天之后,非手术子宫采集马受精卵是有把握的。此外,另选没有配种而确切排卵的母马12匹,于排卵后5(1/2)～9天,回收马的未受精卵,虽冲洗液的平均回收率为89.30％,但也未采到未受精卵。显然,未受精的马卵没有进入子宫角,仍停留在输卵管中。经非手术采卵和二次重复采卵的母马都能按期发情,正常排卵。将14个骡胚中的7个以非手术法移植给7匹受体母马,结果一匹妊娠,妊娠率为14％。妊娠的受体母马生下一匹母骡驹,借腹怀胎350天。排卵同步差为-1(1/2)天。     

世界首匹体细胞克隆马诞生

通过意大利科研人员的努力 ,世界第一匹通过体细胞克隆的马驹已经诞生 ,而且产生这匹克隆马的供体细胞就来自于生其的母马 ,因此母马和马驹 (母亲和女儿 )从遗传学的角度来说则是基因完全一致的“双胞胎”。研究人员从阿拉伯纯种公马 (Arabian thoroughbred m ale)和 Haflinger母马的皮肤活检标本中分别建立了公马和母马的成纤维细胞系 ,用这些细胞与卵母细胞融合后建立重构胚胎 ,共有 2 2个胚泡 (blastocysts)成功发育 ,将其移植到 9匹受体母马体内 ,在妊娠 2 1d时通过超声波诊断有 4匹怀孕 ,但 2匹随后流产 ,另一匹也在妊娠 187d时也流产…     

波尔山羊供体和受体异地饲养鲜胚移植研究

为了进一步扩大良种波尔山羊的推广,提高胚胎移植效率,该文就饲养在不同牧场间的供体和受体实现鲜胚移植进行了系统研究,得到了以下结果:①洪体运输1h、2～3 h、＞4h、0h(对照)收集胚胎,分别得到可用胚胎数为15.8枚±4.3枚、13.0枚±5.7枚、13.8枚±6.6枚和14.2枚±6.3枚,不同运输时间回收可用胚胎数之间无显著性差异(P＞0.05).回收可用胚胎移植后,受体妊娠率分别为71.6％、67.6％、76.7％和80.7％,胚胎成羔率分别为74.1％、67.2％、69.9％和71.5％,供体不同运输时间回收胚胎移植妊娠率和胚胎成羔率无显著差异(P＞0.05).②胚胎在20℃,36.5℃和38.5℃运输2h后移植,受体妊娠率分别为42.0％、64.5％和66.7％,胚胎成羔率分别为41.7％、63.6％和66.7％.20℃运输胚胎受体妊娠率和胚胎成羔率显著低于36.5℃和38.5℃下运输胚胎(P＜0.01);胚胎在36.5℃分别运输0.5 h、1h、2h后移植,受体妊娠率分别为72.5 ％68.7％和64.9％,胚胎成羔率分别为69.1％、67.8％和63.0％,受体妊娠率和胚胎成羔率之间无显著性差异(P＞0.05).③受体在手术前2～4h通过卡车运输到另一畜牧场,运输时间分别为0.5 h、1h、≥2h,胚胎移植后受体妊娠率分别为61.2％、49.6％和42.0％.随着受体运输时间的延长,受体妊娠率呈下降趋势,运输时间超过2h的妊娠率显著低于运输0.5 h的妊娠率(P＜0.05).胚胎成羔率分别为60.9％、45.6％和32.0％,随着受体运输时间的延长,胚胎成羔率显著下降(P＜0.05或P＜0.01).从以上研究得出以下结论:山羊供体和受体饲养在不同饲养场,欲进行鲜胚移植,选择供体运输是最好的方法,其次为胚胎运输后移植.受体运输对胚胎移植效果(即受体妊娠率及胚胎成羔率)均有不利影响,不宜在生产中采用.     

蒙古绒山羊胚胎移植效果研究

通过评价双胚胎移植方法和单胚胎移植方法对蒙古绒山羊妊娠率及产羔率的影响,为优质种羊的快速扩繁提供技术支持。选取5只供体母羊进行同期发情与超数排卵处理,供体母羊发情后进行人工授精,收集胚胎;利用收集的可用胚胎对选取的39只受体母羊进行胚胎移植,其中10只受体母羊做双胚移植,29只受体母羊做单胚移植;比较双胚移植和单胚移植受体母羊的妊娠率及产羔率。结果表明:供体母羊经CIDR处理,发情率达100%,超数排卵、人工授精后共收集胚胎64枚,其中可用胚胎49枚,可用胚胎率为76.56%;双胚移植受体母羊的妊娠率为90.00%(9/10),产羔率为180.00%(18/10),单胚移植受体母羊的妊娠率为68.97%(20/29),产羔率为62.07%(18/29)。双胚移植方法比单胚移植方法可获得更高的妊娠率及产羔率,表明双胚移植方法适用性良好,具有极大的推广价值。     

供受体羊发情同期化程度对胚胎移植效果的影响

将2008枚鲜胚移植给1146只受体羊,移植单胚和双胚的受体总妊娠率为63.1r3/1146,移植胚胎成羔率为52.861/2008。结果表明供、受体发情同步差在 1～ 0.5d、0d和-0.5～-1d时,移植单胚的受体妊娠率和胚胎成羔率没有明显的差异P>0.05;移植双胚的受体差异显著P<0.05,同步差为0d时的胚胎移植效果最好。移植双胚的受体中,奶山羊受体与供体同步差为-0.5～-1d和0d时,胚胎成羔率显著高于同步差为 1～ 0.5d的受体P<0.05;成都麻羊与供体同步差在 1～ 0.5d、0d和-0.5～-1d时,其胚胎成羔率均有显著差异P<0.05;南江黄羊和大耳羊做受体时,供、受体同步差在 1～ 0.5d、0d和-0.5～-1d时进行胚胎移植,胚胎成羔率无统计学差异。     

受体母猪排卵状况对体细胞克隆胚胎移植效率的影响

为了确定猪体细胞克隆胚胎的受体母猪最佳发情阶段,本研究比较了供受体同期化方案对猪体细胞克隆胚胎输卵管内移植后30 d受胎率和妊娠足月率的影响。将体外培养2 d的猪体细胞克隆胚胎,移植到发情第1~2天的受体母猪。根据受体母猪卵泡发育与排卵状况将受体猪群分为2个类别:卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段(组一);卵泡发育处于排卵前阶段或完全排卵阶段(组二)。结果发现:(1)组一6头受体母猪胚胎移植后30d受胎率为100%;而组二10头受体母猪受胎率为40%,二者差异显著(P0.05)。(2)组一6头受体母猪全部产仔,妊娠足月率为100%;组二10头受胎母猪2头产仔,妊娠足月率为20%,二者差异极显著(P0.01)。以上结果表明:体外培养2 d的猪体细胞克隆胚胎发育阶段与即将排卵或正在排卵的受体母猪的子宫环境同期性最好,得到了理想的胚胎移植效率。     

绵羊胚胎移植受体同期发情方法的比较

为了比较CIDR＋PG与CIDR＋PG＋PMSG两种激素处理方法对于受体同期发情以及胚胎移植的效果,将103只小尾寒羊作为胚胎移植受体分为两组,分别使用上述两种方法进行同期发情处理。其中,CIDR＋PG组83只,CIDR＋PG＋PMSG组20只。在对供体羊人工输精后第6．5天获取移植囊胚,分别移植到两组受体子宫内。统计受体的发情率、黄体生成情况,以及移植后的妊娠情况。CIDR＋PG组与CIDR＋PG＋PMSG组受体羊发情率分别为87．95％、90．00％;有黄体羊的比例分别为37．35％和75．00％,平均黄体数为1．81和1．93个;两组受体胚胎移植后妊娠率分别为77．41％和86．67％。结果表明,使用CIDR＋PG＋PMSG进行同期发情效果较好,且胚胎移植后妊娠效果较好。     

马繁殖季节和非繁殖季节卵泡波变化观察

利用B型超声波诊断仪,对繁殖季节和非繁殖季节母马卵泡发育过程进行连续观察,揭示母马卵泡生长发育的动态模式。在繁殖季节的5—7月随机选取5匹空怀和4匹排卵后配种妊娠的伊犁马为监测对象,在非繁殖季节的8—10月随机选取8匹空怀伊犁马为监测对象,用B型超声波诊断仪每日或隔日扫描两侧卵巢1次,记录卵泡数量并测量卵泡直径,分别持续观测一个发情周期和40 d。结果表明,母马在繁殖季节的一个发情周期内有1～2个卵泡波;在非繁殖季节,马卵巢也有卵泡波的变化;母马不是严格的季节性发情动物。     

胚胎质量和发育阶段对奶牛胚胎移植妊娠率的影响

[目的]为了评估胚胎质量和发育阶段对奶牛胚胎移植妊娠率的影响。[方法]使用63头青年奶牛作为供体进行超数排卵,评估回收胚胎质量和发育阶段。选择334头青年奶牛作为受体鲜胚移植不同质量和发育阶段胚胎。对胚胎质量分布、发育阶段分布、不同质量胚胎和不同发育阶段胚胎移植30 d妊娠率进行统计分析。[结果]可用胚胎中A级胚胎比例(60.78%)显著高于B级和C级胚胎比例(36.70%和2.52%)(P<0.05);致密桑椹胚比例(54.36%)显著高于早期囊胚,囊胚和扩张囊胚比例(18.35%,25.0%和2.29%)(P<0.05)。A级和B级胚胎移植30 d妊娠率(63.55%和64.35%)显著高于C级胚胎移植30 d妊娠率(44.44%)(P<0.05);致密桑椹胚、早期囊胚、囊胚和扩张囊胚移植30 d妊娠率差异不显著(P<0.05),早期囊胚、囊胚移植30 d妊娠率高于致密桑椹胚、扩张囊胚移植30 d妊娠率(P<0.05)。[结论]选择不同发育阶段的A级和B级胚胎能够获得较高胚胎移植妊娠率,增加早期囊胚和囊胚阶段胚胎移植数量能够提高胚胎移植妊娠率。     

性别鉴定后胚胎移植妊娠率影响因素分析

对影响后的性别鉴定胚胎移植妊娠率的因素进行了分析。结果表明,性别鉴定胚胎的鲜胚和冻胚移植妊娠率均低于非性别鉴定胚胎,但二者差异不显著(P>0.05),这表明性别鉴定胚胎在生产中应用是可行的。随着胚胎细胞取样数的增多,其移植妊娠率逐渐下降,且冷冻带来的损伤明显增大;性别鉴定胚胎在体外放置时间小于5 h的妊娠率比大于5 h的高,且差异极显著(P<0.01);性别鉴定胚胎移植时受体的最佳移植时间在发情后的7.5~8.5 d;繁殖力好的受体牛移植妊娠率比繁殖力差的受体牛移植妊娠率高,且差异极显著(P<0.01)。     

和牛胚胎移植后代超数排卵和胚胎移植试验

为了研究胚胎移植后代超数排卵技术,试验使用120,160,200 mg促卵泡素(FSH)对172头和牛胚胎移植后代母牛进行超数排卵,并用9头公牛的精液进行人工授精,选择956头青年奶牛和564头泌乳奶牛作为受体进行胚胎移植,对使用不同剂量FSH和不同精液的胚胎生产情况和受体移植妊娠率进行统计。结果表明:供体超数排卵获得5. 30枚平均可用胚胎; 120 mg FSH超数排卵供体获得(6. 00±0. 22)枚平均可用胚胎,显著高于160,200 mg FSH超数排卵供体(P0. 05),平均退化胚胎和平均未受精卵数均差异不显著(P0. 05); 015,305号公牛精液人工授精后获得6. 40,7. 40枚平均可用胚胎,显著高于107,003,629号公牛(4. 20,4. 50,4. 70枚,P0. 05);青年奶牛和泌乳奶牛受体胚胎移植妊娠率差异不显著(P0. 05)。说明和牛胚胎移植后代母牛使用低剂量FSH和高活力公牛精液进行超数排卵,可以增加可用胚胎数量,受体移植妊娠率未受影响。     

奶牛超数排卵及胚胎移植的试验研究

本试验采用FSH＋PG的方法对22头供体荷斯坦牛分两批进行了超数排卵处理,140头受体南阳黄牛和供体牛采用2次PG法分批进行了同期发情处理。结果如下：（1）共有20头供体牛、104头受体牛在第二次注射PG后96h内发情,同期发情率分别为90.90%和74.29%;（2）20头供体牛回收胚胎176枚,可用胚胎140枚/头,平均回收胚胎8.8枚/头,平均可用胚胎7.0枚/头,可用胚胎比率79.55%;（3）104头南阳黄牛受体均移植单胚,51头妊娠,妊娠率为49.04%。     

萨福克羊超排处理与胚胎移植技术应用研究

2015年11月至12月笔者在新疆哈密市牧祥合作社开展绵羊鲜胚移植,对合作社提供的87只供体羊采用自然观察法选取55只,通过PG注射同期发情处理,再采用FSH递减法超排技术。研究结果表明:55只供体羊共冲胚胎675枚,可用胚胎575枚。通过对比试验15月龄羊10只冲胚胎94枚,可用胚胎70枚;24月龄羊45只冲胚胎581枚,可用胚胎505枚,差异均极显著(P0.01)。按胎次分组经产羊44只冲胚胎578枚,可用胚胎495枚,11只初产羊冲胚胎97枚,可用胚胎80枚,两者差异极显著(P0.01)。受体羊采用两次注射PG法同期处理母羊450只,发情410只,发情率91%,移植392只,受体羊可利用率95.6%。将575枚可用胚胎移植给392只受体羊,移植受胎率达64.03%。但从处理的392只不同品种受体羊移植受孕率来看,多浪羊略低,但湖羊、小尾寒羊、湖哈杂交羊间受孕率差异均不显著(P0.05)。从胚胎类型上看,桑葚胚受孕64.9%,囊胚受孕55.0%,说明受体羊与供体羊子宫处于同一环境中收集6 d胚胎,移植桑葚胚受孕率较高。在胚胎移植质量上看,移植A级胚胎受胎率明显高于B、C级胚胎,且胚胎利用率差异显著(P0.05)。     

和牛超数排卵及胚胎移植效果观察

为了研究和牛超数排卵和胚胎移植的效果,试验以和牛作供体,荷斯坦青年母牛作受体,采用PG+FSH方案对7头和牛供体进行超数排卵处理,用非手术法取胚并进行鲜胚移植。结果表明：采用PG+FSH方案头均获得胚胎数为(11.29±4.86)枚,可用胚胎(5.86±3.27)枚(A级和B级);鲜胚移植(A级和B级)妊娠率为51.22%。说明采用该方案对和牛供体进行超数排卵,并进行鲜胚移植的效果较为理想。     

牛胚胎移植技术要领

“胚胎移植（Embryo Transfer,简称ET）”是指对生产性能优良和遗传性稳定的母牛经过超数排卵处理后,将多出自然排卵数几倍的受精卵取出,分别移植到生产性能较低和遗传性差的母牛子宫内,使其着床、妊娠、并产出优良后代的技术。供给胚胎的母畜通常称为供体,接受和孕育胚胎的母畜称为受体。经胚胎移植出生的后代是从供体母畜和与供体母畜交配的公畜那里获得的遗传基因。所以,胚胎移植实际上就是产生胚胎的供体和养育胚胎的受体分工合作共同繁殖后代的过程。     

核心群奶牛超数排卵技术影响因素的研究

[目的]为进一步研究核心群奶牛超数排卵技术影响因素。[方法]试验使用3个FSH剂量和4 个公牛精液对27头青年奶牛进行超数排卵。对供体牛胚胎生产情况和受体胚胎移植妊娠率进行统计。[结果]结果显示供体2次超排获得7.8枚平均可用胚胎显著高于1次超排获得的5.7枚平均可用胚胎(P<0.05);260,280 mg FSH超排供体获得6.0和7.7 枚平均可用胚胎显著高于300 mg FSH超排供体获得的4.6枚平均可用胚胎(P<0.05);供体使用4个公牛精液人工授精后获得的平均可用胚胎数和平均未受精卵数差异不显著(P>0.05);移植前接种疫苗的受体胚胎移植妊娠率显著降低(P<0.05）。[结论]核心群奶牛超排适宜FSH剂量为260-280 mg,使用高受精力公牛精液和对超排反应好的供体重复超排能够提高超排效率,受体移植前避免疫苗接种能够提高胚胎移植妊娠率。     

猪胚胎移植技术研究

利用外源激素PMSG+HCG处理母猪58头,同期发情有效率和超排成功率分别为89.3％(25/28)和100％(30/30)。14头供体用手采集胚胎,平均每头排卵23.6±6.2个,共获得胚胎218枚,其中可利用胚胎206枚,胚胎可利用率为94.5％。将143枚胚胎移植给10头 受体,平均每头移植14.3±3.6枚,8头受体妊娠并产仔52头,移植妊娠率为80％(8/10),平均每头产仔6.5头,妊娠母猪胚胎存活产仔率为45.6％(总产仔数/胚胎移植总数)。仔猪初生平均体重为1.25±0.28公斤。其中12头供体手术冲卵后,第1个情期发情配种受胎率为91.8％(11/12)。     

前列腺素及其类似物对黄牛及其杂种同期发情和超排作用的试验

我们在牛的胚胎移植工作中,用前列腺素及其类似物对受体牛作同期发情,对超排牛作诱导发情,现介绍如下。受体牛同期发情在牛的胚胎移植工作中,供体牛和受体牛发情周期必须同步。wright研究发现,供体牛发情后第7天采的胚胎移植至第4—5天的受体牛时,比移植给同期受体牛的妊娠率降低52.2％。如果同步差更