西藏羊蜱蝇中巴尔通体检测及gltA基因序列分析

为了明确西藏部分地区绵羊体外寄生羊蜱蝇携带病原巴尔通体的感染情况,作者于2019年1-9月采集了西藏林芝、日喀则、那曲地区绵羊体外寄生羊蜱蝇298只,通过形态学鉴定、PCR扩增羊蜱蝇18S rRNA基因进行虫体鉴定,并对病原巴尔通体的gltA基因进行检测,将部分阳性PCR产物连接pMD^TM-18T后转入DH5α感受态细胞,将阳性结果进行测序并进行遗传进化分析。结果显示,雌性阳性率49.8%（113/227）,雄性阳性率42.3%（30/71）,雌雄之间差异不显著（χ²=0.944,P=0.267）;羊蜱蝇携带病原巴尔通体的总感染率为48.0%（143/298）,林芝极显著高于日喀则、那曲地区（χ²=13.801,P<0.01;χ²=17.067,P<0.01）,日喀则和那曲地区无显著差异（χ²=0.084,P=0.771）;散养模式羊蜱蝇携带阳性率44.3%（102/230）,圈养阳性率85.0%（34/40）,屠宰场阳性率23.3%（7/30）,宿主散养和圈养、屠宰场存在极显著差异（χ²=20.929,P<0.01;χ²=24.38,P<0.01）,宿主散养和屠宰场存在显著差异（χ²=3.989,P=0.046）;将测序结果上传GenBank数据库获得3个巴尔通体gltA基因登录号（MN623006、MN623007、MN623008）;序列比对表明和云南、新疆巴尔通体相似性为99.6%~100%。本次研究首次检测出西藏羊蜱蝇携带病原巴尔通体,为了解西藏绵羊体外寄生虫携带病原巴尔通体和病原防控提供依据。     

西藏部分地区羊蜱蝇分子生物学鉴定及基因序列分析

为了了解西藏绵羊体外寄生虫羊蜱蝇的遗传进化,更好地认识和防控羊蜱蝇,减少牧民经济损失,试验采集西藏日喀则地区岗巴县、江孜县某牧场和林芝市巴宜区某绵羊屠宰场绵羊体外寄生虫羊蜱蝇,通过形态学进行虫体鉴定,对3对相对保守的基因(12S rDNA、16S rDNA、18S rDNA)进行PCR扩增、部分测序,并将序列中羊蜱蝇进行遗传进化分析。结果表明:利用立体显微镜能够清晰辨别羊蜱蝇体态和雌雄结构,且雄虫背侧末端与腹侧相比有明显的凹陷,阴茎裸露。将PCR产物测序结果上传GenBank数据库,并获得登录号(12S rDNA 4个,16S rDNA 4个,18S rDNA 6个);羊蜱蝇12S rDNA序列与中国云南羊蜱蝇(KU664532.1)的基因序列相似性高达100%;16S rDNA序列(MK729023、MK732970)与中国新疆羊蜱蝇(KY224146.1、MH119054.1)和捷克共和国羊蜱蝇(MF4959411.1)的基因序列相似性高达100%;18S rDNA序列与英国(FN66411.1)羊蜱蝇的基因序列相似性高达100%。说明将形态学和分子生物学技术两种方法结合能准确鉴定西藏羊蜱蝇,可促进了解该地区羊蜱蝇基因遗传进化情况。     

羊蜱蝇携带巴尔通体和斑点热群立克次体PCR检测及遗传关系分析

为了解四川省石渠县羊蜱蝇巴尔通体和斑点热群立克次体感染情况,采集藏绵羊体表羊蜱蝇,经形态学鉴定后,提取羊蜱蝇总DNA,PCR扩增巴尔通体gltA和rpoB基因、斑点热群立克次体OmpA和OmpB基因,对阳性产物测序、比对及构建进化树,从而确定羊蜱蝇感染巴尔通体和斑点热群立克次体的种类及感染率.在石渠县的4个乡镇总计采集...     

新疆昆玉市某牧场羊蜱蝇中携带立克次体的检测及分析

试验旨在了解新疆昆玉市某牧场绵羊体外寄生虫羊蜱蝇所携带立克次体的感染情况。从该牧场绵羊体表采集羊蜱蝇82只,经形态学鉴定后,提取羊蜱蝇DNA,对立克次体17 kDa基因和geneD基因运用分子生物学技术进行PCR扩增,测序结果采用序列分析软件MEGA7.0构建系统进化树并进行遗传进化分析。结果显示,采集物种为羊蜱蝇并检测到其携带立克次体,经鉴定为暂定巴布瑞立克次体（Candidatus Rickettsia barbariae）。研究表明,新疆昆玉市某牧场绵羊羊蜱蝇携带立克次体,结果可为新疆地区羊蜱蝇携带的立克次体病原提供一定的数据支撑。     

四川省攀西地区蜱携带立克次体检测及基因序列分析

为了解攀西地区蜱种类及蜱源立克次体的种类和感染状况,采用形态学和PCR方法,对随机采集自攀枝花和凉山州部分地区牛羊体表的252只蜱进行种类鉴定;利用特异性引物对立克次体ompA、gltA基因片段进行PCR扩增,随机选择阳性样本进行测序,并对测序序列进行分析,构建系统发育树。经种类鉴定,攀西地区存在微小扇头蜱和褐黄血蜱2种蜱种;蜱携带立克次体平均阳性率为29.37%(74/252),存在敬信立克次体暂定种(Candidatus Rickettsia jingxinensis)、立克次体共生菌(Rickettsia endosymbiont of Rhipilephalus microplus)、马赛立克次体(Rickettsia massiliae)共3种立克次体,其中敬信立克次体暂定种为优势种,共检出31份。不同县市的蜱携带立克次体阳性率不同,其中盐源县和昭觉县未检测到立克次体,而布拖县(57.14%)、西昌市(55.26%)阳性率较高;牛、羊体表蜱携带的立克次体阳性率分别为29.55%(26/88)和29.27%(48/164),差异不显著。结果表明,攀西地区存在多种蜱传立克次体,其...     

华南虎源血巴尔通体的PCR检测

为了快速准确检测华南虎感染的血巴尔通体种类,我们根据已发表的猫血巴尔通体的16S rRNA基因序列,利用软件Primer Premier 5.0设计2对特异性引物,以华南虎源血巴尔通体基因组DNA进行PCR检测。2对引物分别扩增出1452 bp和170 bp的rDNA序列,1452 bp序列与GenBank~（TM）发表的3种猫血巴尔通体序列相似性分别为99.3%、91.7%和79.5%,而170 bp序列与序列AM748929的相似性为100%。实验结果表明华南虎感染的血巴尔通体为大型猫血巴尔通体,实验建立的PCR检测方法为华南虎血巴尔通体病的诊断及分子流行病学的调查提供了新的手段。     

溴氰菊酯等喷雾杀灭羊蜱蝇试验

试验证明在剪毛前、毛长14—22厘米的条件下,用30ppm的溴氰菊酯喷湿绵羊体表各个部位的被毛,羊蜱蝇在24小时后大部分干瘪死亡,部分活力不佳;72小时后观察全部死亡。为了进一步验证喷雾试验的效果,我们于1986年6月在湖东种羊场利用剪毛的机会做了5000多只绵羊的喷雾试验,现将试验情况报告如下: 一、材料和方法 1.药品:5％溴氰菊酯(商品名:倍特),法国罗素·优克福公司生产。     

五日热巴尔通体RPA检测方法的建立

五日热巴尔通体(B. quintana)病原通过人虱的叮咬在人群中传播,导致间歇性发热,头痛及杆菌样血管瘤等临床症状。本研究以五日热巴尔通体gltA为靶标基因,建立重组聚合酶快速扩增方法(RPA)。通过与Bartonella henselae, Bartonella tribocorum, Bartonella vinsonii, Bartonella washoensis及Bartonella grahamii等不同菌种进行对比检测,证实本研究建立的RPA检测方法仅特异性识别五日热巴尔通体,无种间无交叉反应,该方法检测敏感性为10¹ copies/μL,与实时荧光PCR检测敏感性相同。因此,本研究建立的五日热巴尔通体RPA检测方法具备高特异性及敏感性的特点,对五日热巴尔通体菌的检测及疾病临床诊断具有重要意义。     

四川省松潘县牦牛体表蜱、高原鼠兔携带巴尔通体和无形体的PCR检测与进化分析

旨在了解四川省松潘县牦牛体表蜱、高原鼠兔巴尔通体和无形体感染情况。采集牦牛体表的蜱和捕获高原鼠兔，对蜱进行形态学初步鉴定后，提取蜱和高原鼠兔脾总DNA，PCR扩增蜱16S rRNA、巴尔通体rpoB和无形体16S rRNA基因，对PCR产物阳性产物测序、比对及构建系统进化树，从而确定蜱种类及蜱和高原鼠兔感染巴尔通体和无形体的种类及感染率。结果显示：在松潘县进安乡、山巴乡、下八寨乡各采集到蜱102、97和131只，共计330只，经鉴定均为青海血蜱。蜱巴尔通体仅检出1种巴尔通体，与B.melophagi亲缘关系最近，进安乡、山巴乡和下八寨乡检出率分别为16.7%、8.2%和18.3%，其中下八寨乡检出率显著高于进安乡（P<0.05）；蜱源无形体进安乡、山巴乡和下八寨乡检出率分别为9.8%、12.4%和26.7%，下八寨乡检出率显著高于进安乡（P<0.01），检出的无形体均为1种，与牛无形体（A.bovis）亲缘关系最近；下八寨乡检出的鼠兔源巴尔通体与B.queenslandens亲缘关系最近，感染率为6.7%；进安乡、山巴乡和下八寨乡检出的鼠兔源巴尔通体与B.grahamii亲缘关系最近，感染率分别为8.7%、17.9%和13.3%，3个点检出率无显著差异；未定种Bartonella sp.（MN296294）和Bartonella sp.（MN296293）仅分别在进安乡和下巴乡检出；与蜱均检出无形体不同，高原鼠兔均未检出无形体。此外，蜱和高原鼠兔均未发现2种及2种以上病原混合感染。松潘县青海血蜱携带巴尔通体和无形体，高原鼠兔感染巴尔通体，且首次在高原鼠兔体内检测到疑似B.queenslandens的病原体，提示当地居民有感染这两类病原风险。     

应用舒利保、功夫杀灭羊蜱蝇、羊虱试验

“舒利保”是一种动物体外寄生虫速杀剂,其中含有40％的巴胺膦,使用一次便能杀灭多种体外寄生虫,而且能保持一定药力,可预防再度感染。“功夫”是一种活性特高、安全、低残留广谱杀虫剂,能扑灭作物上大部分害虫,对于家畜外寄生虫病的防治也具有良好的杀虫效果。为了验证上述两种药物的杀虫效果、安全性以及在我县高寒条件下的适应性,我们于1992年8月初在东巴乡进行了试验,现报告如下。     

应用溴氰菊酯春季喷雾杀灭羊蜱蝇试验简报

笔者发现当年产的羔羊羊蜱蝇感染率较高,为此于1988年4月初应用30ppm的溴氰菊酯对唐乃亥乡11群杂种绵羊(成年羊1890只、羔羊945只;感染率100%)进行了喷雾试验,结果对羊蜱蝇杀虫效果为100%,羊只安全,并认为产羔后20天左右是防治绵羊外寄生虫的最佳时机。     

巴尔虎羊的外形分析

呼伦贝尔草原的特色产品“巴尔虎”羊,属于短脂型肉用绵羊,是培育中的呼伦贝尔羊的一个主要类群,主要产于水草丰美的新巴尔虎左旗、新巴尔虎右旗和陈巴尔虎旗的草原上,故巴尔虎三旗人们昵称其为“巴尔虎”羊。“巴尔虎”羊分布较集中,数量最多的为新巴尔虎右旗,占全旗150万头只牲畜的90％,并向集约化和产业化方向发展,成为当地支柱和优势产业。全旗草地面积224万ha,其中有效面积     

羊蜱蝇的生物学特征与中文种名释疑

综合多方面资料分析,对我国羊蜱蝇的分类学位置及生物学特征进行了分析。该虫无翅和平衡棒,周身有密集刚毛,主要寄生于绵羊。在我国近年较频繁的报道中,对羊蜱蝇的命名较为混乱,如绵羊蜱、绵羊虱蝇和羊蜱等,应该命名为羊蜱蝇或绵羊蜱蝇。     

布鲁氏菌、弓形虫及巴尔通体多重TaqMan荧光PCR检测方法的建立及应用

为建立一种应用于宠物布鲁氏菌、弓形虫及巴尔通体的高通量、高灵敏、高特异的检测方法,根据各自保守序列合成了特异性引物及Taq Man探针,通过优化反应体系,建立了多重Taq Man荧光PCR检测方法,并利用该方法对2021年厦门市抽检的304份犬猫全血样品进行了检测。结果显示：该方法特异性好,可特异性扩增布鲁氏菌、弓形虫和巴尔通体阳性核酸,其他对照菌株核酸均无扩增信号;抗干扰性强,检测混合模板时,不同成分间无交叉干扰反应;灵敏度高,最低检出限均为3×10⁰ copies/μL;重复性好,批内及批间重复试验变异系数均小于2%。应用该方法在4 h内即可完成304份临床样品的快速检测,此次临床抽检样品中未检出布鲁氏菌、弓形虫及巴尔通体阳性核酸。该方法大大提高了检测效率,为多种动物布鲁氏菌、弓形虫及巴尔通体感染的早期诊断及筛查提供了技术支持。     

一例猫血巴尔通体病的诊治及体会

1只体重为3.2 kg的1岁雄性中华狸猫,就诊前出现精神沉郁,食欲、饮欲废绝,呕吐的症状,为了对该例家猫进行诊治,试验采用血常规、血涂片、实时荧光定量PCR、血液生化指标等检查方法进行诊断,并根据诊断结果进行治疗。结果表明:红细胞数、血红蛋白含量、血细胞比容、血小板数均低于参考值;血涂片镜下观察可见变形的红细胞表面有数个紫染的小体。全血实时荧光定量PCR检测为猫血巴尔通体阳性,确诊为猫血巴尔通体病。患猫通过对症治疗、预防细菌继发感染、促进食欲等治疗7 d后,恢复食欲、饮欲,临床症状消除。说明该病通过综合治疗方法可取得良好的治疗效果。