猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究

猪圆环病毒2型（PCV2）经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下：①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著（P〈0.05）。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。     

母源抗体对感染PCV2仔猪体内病毒变化和免疫反应的影响

将16头断奶仔猪随机分成两大组即直接感染组和间接感染组,再将每大组用ELISA测抗体水平并排序分成两小组,即高抗体水平的4头为高起始抗体组,低抗体4头为低起始抗体组。直接感染组注射PCV2攻毒后再注射钥匙孔血蓝蛋白(KLH)刺激,间接感染组不注射与直接感染组混养。Q-PCR检测血清中病毒拷贝数,血常规检测全血中淋巴细胞数,定时称量体质量,屠宰后采样制作HE染色病理切片。结果,HE染色病理切片和临床分析显示感染猪只表现断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状;直接感染组和间接感染组攻毒后抗体水平持续降低,且分别在攻毒后20、30d降到相对最低值。直接感染组在攻毒后4d检测到抗原,攻毒后7d低起始抗体组病毒拷贝数显著高于高起始抗体组,间接感染组分别在攻毒后4、7d检测出抗原,攻毒后24、29d低起始抗体组抗原显著高于高起始抗体组;两组中外周血淋巴细胞数量在攻毒后减少,攻毒期间两大组中低起始抗体组和高起始抗体组体质量无差异。结果表明,PCV2+KLH能够复制出PMWS症状;PCV2母源抗体的半衰期为15d左右;低起始抗体组更容易感染病毒;攻毒后起始母源抗体的高低对断奶仔猪增重差异不明显。     

免疫刺激商品断奶仔猪复制多系统衰竭综合征(PMWS)

猪圆环病毒2型（PCV2）是引起PMWS的必需病原,与其他病原混合感染或受到外界刺激时表现PMWS临床症状。本试验将16头商品化断奶仔猪（32日龄）随机分为4组（每组4头）,即对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组、PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组,用上海某猪场分离株PCV2-SH、钥匙孔血蓝蛋白（KLH）反复刺激断奶仔猪以复制PMWS。其中对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组未出现症状;PCV2攻毒组症状较轻,出现增重缓慢,伴有短暂的体温升高;而PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组出现明显的临床症状,2头猪在攻毒后第11天濒临死亡,其中1头在第12天死亡,攻毒猪宰杀后脏器出现明显的病理变化。PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组于攻毒后第4天出现病毒血症,宰杀后肺脏、淋巴结均检测到PCV2的DNA。以上结果说明,PCV2-SH感染结合免疫刺激可以引起商品化仔猪发生PMWS,为PCV2致病机理和免疫学研究提供了动物发病模型。     

猪圆环病毒2型感染对猪瘟弱毒疫苗免疫效果的影响

为了解猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪瘟(CSF)弱毒疫苗诱导的体液免疫的影响,从未接种PCV2疫苗的猪场育肥猪中选取疑似病猪和健康猪各10头,分为A、B、两组,其中A组经ELISA试剂盒检测PCV2抗体呈阳性。A、B两组同时免疫CSF弱毒疫苗,免疫后每隔2周检测CSFV抗体水平。结果显示:感染PCV2后的猪只,CSFV抗体为阴性,而未感染PCV2组在接种CSF弱毒疫苗后抗体阳性率较高,抗体水平呈现逐渐升高的趋势,提示PCV2感染对CSF弱毒疫苗的产生有明显的抑制作用。     

猪α干扰素对猪圆环病毒2型亚单位疫苗免疫效果的影响

为了评估酵母表达的PCV2 Cap蛋白在猪体的免疫特性以及猪α干扰素对其的免疫佐剂效果,将酵母表达的PCV2 Cap蛋白配比适量的铝胶或重组猪α干扰素制成亚单位疫苗.30日龄仔猪分别接种铝胶佐剂亚单位疫苗和猪α干扰素佐剂亚单位疫苗,同时设攻毒对照与空白对照,首免后21 d加强免疫,二免后14 d用PCV2 JS株攻毒.铝胶佐剂亚单位疫苗免疫猪体后产生了PCV2特异性中和抗体.猪α干扰素佐剂亚单位疫苗组仔猪免疫后产生的ELISA抗体和中和抗体都显著高于铝胶亚单位疫苗组仔猪.攻毒对照组的4只仔猪攻毒后全都产生了病毒血症,并有较长时间的发热;铝胶亚单位疫苗组4头仔猪中只有1头仔猪产生病毒血症,添加猪α干扰素亚单位疫苗组的仔猪攻毒后都没有产生病毒血症.综合分析试验猪的病毒感染、临床表现和生产性能等情况表明Cap蛋白亚单位疫苗具有免疫保护效果,猪α干扰素可显著增强Cap蛋白亚单位疫苗接种仔猪的体液免疫反应,提高PCV-2 Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护效果.     

PCV2a/2b灭活疫苗与PCV2b亚单位疫苗免疫效力比较试验

比较猪圆环病毒(PCV)2a、PCV2b基因型全病毒灭活疫苗和PCV2b亚单位疫苗对PCV2b基因型强毒株免疫攻毒保护效力。取3种类型PCV2疫苗,分2次免疫PCV2抗原和特异性抗体阴性的BALB/c小鼠和14日龄仔猪,间隔21d,分别于免疫后14、21和35 d进行PCV2特异性ELISA抗体测定。使用临床分离鉴定的PCV2b基因型强毒株进行攻毒,通过攻毒前后临床观察、体温变化、平均相对日增重及PCV2核酸载量检测等对疫苗免疫效果进行评价。结果:不同类型PCV2疫苗免疫BALB/c小鼠后14 d能检测到PCV2特异性抗体,在35 d时抗体水平持续升高,其中PCV2b亚单位疫苗产生抗体水平高于全病毒灭活疫苗;不同类型疫苗均能刺激仔猪产生较好的免疫应答,其中PCV2b亚单位疫苗刺激机体免疫应答强于灭活疫苗;仔猪免疫攻毒试验表明,3种类型疫苗均可刺激机体产生抵御PCV2强毒攻击的特异性免疫应答,免疫组体温变化、相对日增重及PCV2核酸载量检测均与攻毒对照组间存在显著性差异,3种类型疫苗之间差异不显著。试验表明:3种类型PCV2疫苗免疫小鼠和仔猪后均能诱导产生抵御PCV2b基因型强毒攻击的特异性免疫应答反应,有效抵抗PCV2感染和提高猪的生长性能。     

猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒的研制与应用

为了进一步提高对猪圆环病毒2型(PCV2)检测的特异性,利用PCV2Cap蛋白及酶标记Cap单克隆抗体,建立了一种检测猪血清中PCV2Cap蛋白抗体的阻断ELISA方法,并将其组装成试剂盒。对阻断ELISA试剂盒进行了敏感性、特异性、重复性、符合率和保存期测定。结果显示,其敏感性高,特异性强,批内批间重复性好,与商品化试剂盒符合率高,保存期长且性质相对稳定。先后制备了5个批次的阻断ELISA试剂盒,用于检测PCV2不同疫苗免疫猪血清、规模猪场PMWS发病猪及同群健康猪血清、不同日龄猪群血清.结果显示,PCV2油佐剂免疫组血清抗体水平相对较高,PWMS发病猪血清抗体水平高于同群健康猪,猪群中育肥猪血清抗体水平最高。     

3种TLR配体对猪圆环病毒2型病毒样颗粒疫苗佐剂活性的比较

为比较3种TLR配体对猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)疫苗的佐剂活性,本研究利用重组大肠杆菌表达脑膜炎奈瑟菌Ag473脂蛋白、创伤弧菌FlaB鞭毛蛋白和结核分枝杆菌热应激蛋白70(Hsp70),采用镍亲和柱纯化获得该3种重组蛋白;分别将相同剂量(10μg)3种重组蛋白、ISA206佐剂(100μL)和不完全弗氏佐剂(FIA)(100μL)与PCV2 VLP疫苗(50μg)混合,肌肉注射免疫小鼠,初免后14 d加强免疫1次;初免后每周采血分离血清,采用ELISA检测抗原特异抗体;加强免疫后14 d利用PCV2攻毒,攻毒后7 d和14 d采血分离血清,采用荧光定量PCR检测病毒DNA拷贝数;攻毒后14 d迫杀小鼠,制备并培养其脾细胞,经PCV2 VLP疫苗刺激后,采用试剂盒检测细胞因子的表达。SDS-PAGE分析结果显示,3种TLR配体在重组大肠杆菌中均获得正确表达,纯化重组蛋白的纯度大于90%。从初免14 d起,3个分子佐剂组中Ag473佐剂组的PCV2抗体水平最高,但低于ISA206佐剂组却高于FIA组,差异不显著(p0.05)。在PCV2攻毒前,3个分子佐剂组中Ag473佐剂组的小鼠脾细胞TNF-α和IFN-γ表达水平最高,但低于ISA206佐剂组却高于FIA组,差异显著(p0.05);Hsp70佐剂组的IL-4表达水平最高,Ag473佐剂组次之,但均高于ISA206和FIA组。在攻毒后第7 d,5个免疫组小鼠的病毒拷贝数均较对照组显著下降(p0.05),但免疫组间差异不显著;在攻毒后第14 d,5个免疫组小鼠的病毒拷贝数进一步下降,免疫组间差异不显著。研究结果表明在测试的3种分子佐剂中,Ag473脂蛋白具有较强的总体免疫佐剂活性,有望进一步开发为PCV2等病毒的亚单位疫苗佐剂。     

3种不同类型佐剂的猪圆环病毒2型亚单位灭活疫苗免疫效果的比较研究

为制备猪圆环病毒2型商品化亚单位疫苗选择良好的佐剂,对由水性佐剂GEL 01、白油佐剂以及氢氧化铝胶佐剂分别制备的3种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的免疫效果进行比较研究。本实验选取3~4周龄猪圆环病毒2型抗体阴性猪30头,根据试验疫苗接种情况分为6组,分别为:3种不同佐剂制备的亚单位疫苗(A组、B组和C组)、商品化疫苗(D组)以及空白对照组和攻毒对照组,然后进行临床观察、抗体水平监测和免疫效力评价,观察各组仔猪的不良反应情况、抗体水平以及攻毒保护情况。结果显示:3种不同类型佐剂制备的猪圆环病毒2型亚单位疫苗接种猪后均无任何不良反应、能刺激机体产生良好的ELISA抗体水平和免疫效果,但水性佐剂GEL 01制备的疫苗与另外2种佐剂制备的疫苗相比,综合抗体水平、免疫效果等因素,水性佐剂GEL 01制备的疫苗在临床使用上更具优势,为商品化亚单位疫苗佐剂的选择提供了重要的数据支持。     

断奶仔猪衰竭综合征育肥猪群PCV2抗原和抗体水平的动态变化

尽管断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)多感染8～16周龄的仔猪,许多研究结果表明,PMWS也可影响育肥猪群。本试验主要研究不同临床症状的PMWS育肥猪群猪圆环病毒2型(PCV2)抗原和抗体效价的动态变化。从3个育肥猪群(来自Swedish猪场的A、B猪群和Norwegian猪场的C猪群)各收集40份血样本用以分析血清PCV2抗原、抗体和唾液皮质醇。虽然A、B猪群由同一母猪群,但其PMWS症状有所不同。结果表明,A、B猪群最初的PCV2抗原相同。在A猪群进入育肥期2周后,PCV2抗原水平达到最高;PCV2抗体水平也较高,达到107/mL;随着PMWS的发展,PCV2抗体水平也随之消长。B猪群表现为PCV2抗体水平升高到一定水平并维持整个试验期,而PCV2抗原水平则稳定下降。在育肥期的前5周,C猪群未感染PMWS,从而未检测到PCV2抗体,即使PCV2DNA量也很低,然后PCV2抗原水平有小幅上升,PCV2抗体水平也随之上升。A、B猪群的PCV2为PCV2b,而C猪群为PCV2a。C猪群的唾液皮质醇水平低于A、B猪群。A、B猪群与C猪群最大的不同之处在于PCV2的基因型不同和因PCV2感染时间不同导致的感染分布部位不同。临床型PMWS可表现低血清抗体水平,且高PCV2抗体水平不一定发展为临床型PMWS。由此可知,A猪群可能是因管理不善从而导致PMWS的发生,提示应重视合适的卫生管理和常规疾病预防措施的重要性。     

规模化猪场猪圆环病毒2型的血清流行病学调查

为了解规模化猪场猪圆环病毒2型(PCV2)血清学流行情况,采用ELISA进行PCV2抗体检测。结果表明,运城地区规模化猪场广泛存在PCV2感染,未免疫接种猪圆环病毒疫苗的外观健康猪血清样品中PCV2抗体平均阳性率为49.66%,其中种猪感染率达67%,哺乳仔猪感染率4.55%,保育猪感染率43%,育肥猪感染率64.71%;外观健康猪群检测结果提示,随着年龄的增长PCV2感染有升高趋势。为了进一步研究猪圆环病毒感染各症候群在规模化场发病特点及流行规律,采集临床疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、仔猪先天性震颤(Congenital tremors,CT)、猪肾炎皮炎综合征(PDNS)、猪的繁殖障碍(Reproductive failure)、PCV2相关性肺炎等症状猪血清400份进行PCV2抗体检测。检测结果显示,疑似PMWS症状PCV2抗体阳性率最高,达86.25%,然后依次是疑似PCV2相关性肺炎阳性率56.25%,疑似PDNS阳性率46.25%,疑似繁殖障碍阳性率26.25%,最低的是疑似CT阳性率11.25%。研究结果表明,运城地区规模化猪场PCV2感染以PMWS和PCV2相关性肺炎为主,其次是PDNS和繁殖障碍,仔猪先天性震颤感染率最低。     

以胸膜肺炎放线杆菌菌影作为佐剂的猪圆环病毒亚单位疫苗的研究

为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设PCV2灭活苗组和对照组,在加强免疫14 d后攻毒。结果显示,r Cap+APP-ghost组仔猪的抗体水平显著高于r Cap+ISA61组(p0.05);攻毒后,r Cap+APP-ghost组仔猪未检测到病毒血症,而对照组仔猪在攻毒后14 d~28 d检测到病毒血症;攻毒后28 d,r Cap+APP-ghost组仔猪腹股沟淋巴结中的病毒载量显著低于r Cap+ISA61组和对照组仔猪的病毒载量(p0.05);同时,r Cap+APP-ghost组仔猪相对体质量增长率显著高于对照组仔猪的相对体质量增长率(p0.05)。以上结果表明,APP ghost可以作为有效的佐剂增强机体免疫反应,提高机体的抗病原感染能力。     

猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌5型二联灭活疫苗研制与免疫效力研究

猪圆环病毒2型(PCV2)和副猪嗜血杆菌(HPs)混合感染十分普遍,造成我国养猪业严重经济损失。本研究将杆状病毒表达的重组PCV2 Cap蛋白(BCap)和PCV2灭活病毒液(i PCV2),分别与HPs血清5型(HPs5)灭活菌液混合,加入水性佐剂混合制备成BCap/HPs5与i PCV2/HPs5二联灭活疫苗,进行猪体免疫保护试验。仔猪免疫保护试验结果为:两种疫苗免疫后均可诱导猪体产生PCV2和HPs抗体。免疫后35天用PCV2攻击,两免疫组猪均无明显临床症状,相对日增重(RDWG)与空白对照组相似,但高于攻毒对照组(P0.05);攻毒后14天,病毒血症明显低于攻毒对照组(P0.05);攻毒后28天剖解,腹股沟淋巴结PCV2载量明显低于攻毒对照组(P0.05),病理学变化明显轻于攻毒对照组。免疫后35天用HPs攻击,对照组猪均出现明显临床症状,但两免疫组猪无明显临床症状;攻毒后14天剖检,两免疫组病理学变化方面相似,但明显轻于攻毒对照组。结果表明,BCap/HPs5与i PCV2/HPs5两种二联苗免疫仔猪后均能诱导机体产生免疫应答,产生免疫保护作用,具有较好应用前景。     

嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0.07～0.60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组(3头)肌肉注射免疫103.5TCID50的PCV1-2/头,2组(2头)肌肉注射真核表达质粒200μg/头,3组(2头)肌肉注射空载体(pcDNA3.1)200 μg/头,4组(2头)不免疫作为攻毒对照组.于免疫后42 d,PCV1-2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体.免疫后42 d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×104.5TCID50/头和106TCID50/头.攻毒后21 d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒载量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组.这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗.     

嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头,2组（2头）肌肉注射真核表达质粒200μg／头,3组（2头）肌肉注射空载体（pcDNA3．1）200μg／头,4组（2头）不免疫作为攻毒对照组。于免疫后42d,PCV1—2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体。免疫后42d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×10^4.5 TCID50／头和10^6 TCID50／头。攻毒后21d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒栽量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组。这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗。     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗.选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒.攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化.采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高.2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护.以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株.病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤.本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护.     

云南省某乡镇育肥猪PRV、PRRSV和PCV-2抗体的检测及分析

为了评价某乡镇育肥猪群中猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)及猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)疫苗免疫效果,试验随机采集该乡镇育肥猪血清81份(公猪52份,母猪29份),采用ELISA抗体检测试剂盒进行猪PRV-gB、PRRSV和PCV-2抗体检测。检测结果表明:该乡镇育肥猪PRV-gB抗体阳性率均为0,即为阴性;PRRSV抗体阳性率为30.86%,抗体水平较低;PCV-2抗体阳性率为91.36%。由于PCV-2抗体水平较高,且该乡镇未全面实施PCV免疫,免疫程序存在问题,可能存在野毒感染,需要进行合理改进。     

猪肺炎支原体与猪支气管败血波氏杆菌在猪体液免疫和生长性能上的协同作用

试验选用10日龄成华×大约克杂交猪36头,随机分成四组(1、2、3、4),每组9头.其中1、2组用猪肺炎支原体全菌抗原免疫后再分别用猪肺炎支原体和猪支气管败血波氏杆菌进行攻毒,3、4组注射生理盐水作为对照,并与前两组同时分别用猪肺炎支原体和猪支气管败血波氏杆菌进行攻毒.采用间接ELISA、组织切片等方法对猪血清中的抗体水平、肺脏的病理变化及生长性能进行测定.试验表明:用猪肺炎支原体全菌抗原接种猪后,在血清中能检测到较高的抗体水平(25).猪肺炎支原体攻毒后2周,免疫猪和对照猪血清中猪肺炎支原体抗体的滴度分别为23.8与22.4(P＜0.05),且免疫猪的生长性能比对照猪好.在猪支气管败血波氏杆菌攻毒组,攻毒2周和4周后免疫猪血清中的猪支气管败血波氏杆菌抗体水平与对照猪相比分别提高了26.67%和30.00%(P＞0.05),6周后免疫猪和对照猪血清中的猪支气管败血波氏杆菌抗体分别为21.7和20.3(P＜0.05),且在攻毒后4～6周,免疫猪的生长性能有了显著的改善.组织切片显示,无论是用猪肺炎支原体攻毒还是用猪支气管败血波氏杆菌攻毒,免疫猪的肺脏病变程度都较对照猪轻.     

猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合表达质粒在猪体内诱导的保护性免疫反应

为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2/猪白介素-2(PoIL-2)嵌合重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2重组表达质粒或PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白进行免疫及免疫保护试验。共进行4次肌肉注射免疫,每次间隔2周;于第4次免疫后3周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞(Th)和细胞毒性T细胞(Tc)亚群的百分含量、排毒率和病毒血症阳性维持时间等指标以评价其免疫和免疫保护效果。结果表明,各免疫组猪均产生了抗PCV2特异性ELISA免疫抗体,但rCap蛋白免疫组猪抗体水平较低;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果显著优于rpcDNA3.1/ORF2质粒;在rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒或rpcDNA3.1/ORF2质粒中添加rCap蛋白对重组质粒免疫及免疫保护效果无明显影响。因此,选取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒为下一步研制PCV2核酸疫苗的主要成分。     

猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗免疫效力

利用猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗免疫4周龄仔猪,免疫后7、14、21、28d采血,测定免疫后血清中抗PRRSV、PCV中和抗体和ELISA抗体较价,并于免疫后28d分别用PRRSV和PCV2攻毒,攻毒后每日检测猪体温和观察临床症状,于攻毒后21d所有存活猪全部扑杀,分别对每头猪肺、肝、脾、淋巴结、心和血进行剖解病理和组织病理学观察及PRRSV和PCV2核酸检测,以确定该疫苗免疫保护率。结果表明,所有试验猪于免疫后7d血清抗体开始检出,28d达到峰值,免疫后28dPRRSV和PCV2攻毒保护率均为100%(5/5)。