新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析

本研究旨在明确新城疫病毒（NDV）溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。     

稳定表达RKIP对新城疫病毒复制的影响

为了研究Raf激酶抑制蛋白（RKIP）对新城疫病毒（NDV）复制的影响,从鸡胚成纤维细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增RKIP基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,经PCR、双酶切和测序鉴定,采用Fu-GENEHD法将阳性质粒转染Vero细胞,经G418筛选,有限稀释法获取单克隆细胞株,Western-blotting检测RKIP的表达。利用Real-time PCR测定病毒感染细胞后培养上清的病毒量。结果表明：成功构建鸡RKIP真核表达质粒;转染Vero细胞后经克隆化培养获得稳定表达鸡RKIP的细胞株Vero-RKIP;感染初期,NDV在Vero-RKIP上表现出了更强的复制能力。     

重组鸡α-干扰素对新城疫病毒复制的影响

毕赤酵母表达鸡α-干扰素经纯化后,以50000U、5000U和500U分别与200ELD50新城疫病毒疫苗株LaSota和中等毒力Q株等量混合,接种9～10日龄SPF鸡胚,记录鸡胚死亡情况并测定尿囊液HA效价,结果表明,高浓度重组干扰素可使病毒致死鸡胚时间延长,并使Q株在尿囊液中的HA效价下降2～3个滴度。     

HeLa细胞中泛素蛋白酶体系统对新城疫病毒复制的影响

本文主要对细胞的泛素-蛋白酶体系统是否参与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的复制过程进行了研究。用NDV感染HeLa细胞,对细胞样品进行Western blot实验,并检测细胞26S蛋白酶体的三种蛋白水解活性变化。同时使用多种泛素-蛋白酶体系统相关的抑制剂处理细胞并做NDV感染,测定细胞上清中病毒TCID50值,比较药物处理与DMSO处理对病毒增殖的影响。结果表明,HeLa细胞在感染NDV后,细胞内泛素化蛋白水平降低,而26S蛋白酶体的三种蛋白水解活性都显著升高;使用泛素-蛋白酶体系统抑制剂后NDV的增殖受到了明显的抑制,证明NDV在HeLa细胞内的增殖与细胞自身的泛素-蛋白酶体系统关系密切。     

复方制剂抗鸡新城疫病毒作用的初步研究

本实验对以山茶叶、黄芪等组成的复方进行了抗病毒效果评价与药理作用研究及临床治疗试验.结果表明由山茶叶组成复方对NDV的灭活率和抑制率分别为59.19%、67.5%,抗病毒效果明显优于单方的山茶叶和药物对照黄连,对NDV 50%(IC50)抑制浓度为1∶610.5,提示有较强抗病毒作用.     

中草药对鸡新城疫病毒鸡胚复制的抑制试验报告

多种中草药具有抗病毒和增强免疫机能的作用,为探索中草药对鸡新城疫病毒的抑制作用,笔者选用金银花、板兰根、连翘、黄芩进行了人工感染鸡胚新城疫病毒的复制抑制试验,现报告如下:……     

新鱼腥草素钠对新城疫病毒复制与抗体消长规律的影响

为了研究新鱼腥草素钠对新城疫病毒的作用效果及其对新城疫病毒抗体消长规律,试验采用不同浓度的新鱼腥草素钠与新城疫病毒活疫苗接种鸡胚的方法,以鸡胚尿囊液血凝效价判断新鱼腥草素钠体外对新城疫病毒复制效果,同时用新城疫病毒活疫苗(La Sota株)和新鱼腥草素钠免疫黄羽肉鸡,于免疫前及免疫后第14,21,35,42,49天分别采血检测血清中新城疫血凝抑制(HI)抗体。结果表明:不同浓度的新鱼腥草素钠能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖,其中以200 mg/L浓度抗病毒效果最好。说明一定剂量的新鱼腥草素钠与新城疫疫苗联合使用可降低HI抗体消长规律,从HI抗体水平来看亦能保护整个肉鸡生长周期,但与其给药浓度有关。     

影响新城疫病毒分子变异的因素分析

新城疫是危害我国家禽业的重要疫病,有关新城疫病毒的变异问题成为众多禽病研究者关注的焦点。本文总结了近年来国内外对新城疫病毒分子变异研究的新进展,结合作者多年来的工作积累,对影响该病毒分子变异的关键因素进行了分析。     

新城疫病毒基质蛋白第23位苯丙氨酸对病毒复制与细胞致病性的作用

副黏病毒科的副流感病毒5型(Parainfluenza virus5,SV5)和腮腺炎病毒(Mumps virus,MuV)的基质蛋白(Matrix protein,M)都编码FPIV-like晚期结构域(Late-domain,L-domain),L-domain中的苯丙氨酸(Phenylalanine,F)对病毒出芽与复制有很重要的作用。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白也包含潜在的L-domain23FPIV26,但23F对NDV的出芽及复制的作用尚不明确。本试验应用反向遗传学技术,以NDV ZJ1株为母本病毒,拯救一株M蛋白F23A突变的重组病毒ZJ1F23A,并在DF1细胞上对ZJ1F23A的复制性能和细胞致病性进行评价。结果显示,ZJ1F23A在DF1上的复制水平显著低于母本病毒ZJ1,ZJ1F23A对DF1的致病性比ZJ1弱。试验结果说明NDV M蛋白23F对病毒复制及病毒的细胞致病性具有重要作用。     

新城疫病毒糖蛋白致病作用的研究

本实验以分子生物学和现代免疫学方法,对新城疫病毒（ＮＤＶ）中国毒株Ｆ４８Ｅ９和ＬａＳｏｔａ等毒株的糖蛋白的致病作用进行了探讨。结果表明,ＮＤＶ Ｆ和ＨＮ蛋白为糖蛋白,强弱毒株之间Ｆ蛋白裂解位点的氨基酸序列有明显的不同,并决定了毒株的毒力,但ＮＤＶ的致病作用尚需ＨＮ、Ｆ蛋白的协同作用,单一的Ｆ或ＨＮ蛋白不能构成ＮＤＶ的致病作用。     

西藏林芝新城疫病毒分离与初步鉴定

西藏林芝地区某牧场出现藏鸡大量死亡情况,临床症状与新城疫极为相似。笔者采集病料,根据病理剖检结果和实验室细菌学、血清学、病毒学检测结果,鉴定该牧场发生新城疫疫情。分离到的毒株血凝价为28,能被ND阳性血清抑制,不能被禽流感(H9和H5)阳性血清抑制。     

新城疫病毒分子生物学研究进展

新城疫是由新城疫病毒引起禽类的高度接触性传染病。该病表现为发病较急、死亡率较高,给养禽业造成巨大的经济损失。该病被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病。本文主要叙述了新城疫病毒基因组的结构和功能,以及新城疫疫苗的最新进展。     

山东省鸡新城疫病毒弱毒株的初步分离

某鸡场饲养的罗曼产蛋鸡群爆发了典型的新城疫,采集病料接种１１日龄ＳＰＦ鸡胚进行病毒分离。经致鸡胚病变,回归试验、血凝和血凝抑制试验结果表明,所分离到的病毒系鸡新城疫病毒弱毒株,定名为ＮＤＶ－Ｓ１。     

新城疫病毒载体研究进展

随着反向遗传学操作技术的发展,重组新城疫病毒载体成为当今病毒载体系统研究的热点之一.论文在综述了新城疫病毒的安全性评价、分子生物学特性的基础上,着重介绍了以新城疫病毒作为病毒载体表达外源基因应用于基础研究、疫苗研究和作为基因治疗载体等研究概况.     

新城疫病毒分子生物学研究进展

新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种急性、高度接触性禽类传染病,被世界动物卫生组织(OIE)定为法定必报传染病,我国也将其列为一类动物疫病,本文从新城疫病毒的形态及分子结构、致病力的分子基础、分子流行病学特征和基因工程疫苗等分子生物学相关研究进展进行了综述。     

麦冬多糖对鸡新城疫病毒作用的体外研究

为探究麦冬多糖对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的作用,试验采用水提醇沉法提取5种分子量麦冬多糖,采取三氯乙酸法去除蛋白等杂质,用苯酚-硫酸法和考马斯亮兰G-250法分别测定提取物的糖和蛋白含量,用MTT法测定不同分子量麦冬多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,用3种作用方式测...     

用单克隆抗体对新城疫病毒分离物的血清学初步鉴定

根据1株 ND 单抗与 NDV 分离物在 IIF 试验中的反应性,将8株 NDV 分离物划分为 a、b、c、d、e、f6个不同反应谱组,此反应谱与对照株(F_(48)E_8、NM、I 系、I 系和 La Sota株,)和11株 ND 单抗之反应谱各不相同。HI 试验表明,8株 NDV 分离物的 HA 活性都能被鸡新城疫阳性血清所抑制:大部分 NDV 分离物的 HA 活性能被ND 单抗 F_(2(?)-5-8-4)、L_(2-3-1)、Lc_(24-11)、L_(15-(5))、LE_(22-3)和 M_(10)所抑制;部分 NDV 分离物的 HA 活性能被 ND 单抗LD_(2-3-(7))和 L_(10-4)所抑制;8株 NDV 分离物的 HA 活性均不能被 ND 单抗 FHY_(33-29-3)所抑制。以上结果表明,8株 NDV 分离物之间以及与 NDV 对照株间存在抗原性差异。     

山东省鸡新城疫病毒弱毒株的初步分离

某鸡场饲养的罗曼产蛋鸡群爆发了典型的新城疫 ,采集病料接种11日龄SPF鸡胚进行病毒分离。经致鸡胚病变、回归试验、血凝和血凝抑制试验结果表明 ,所分离到的病毒系鸡新城疫病毒弱毒株 ,定名为NDV—S1。