应用液相色谱技术检测饲料中硝基呋喃类药物的方法研究

硝基呋喃类抗生素被广泛应用于大肠杆菌和沙门氏菌的预防和治疗中,也会对动物的增长有促进作用。但世界卫生组织(WHO)和欧盟只允许非常低的残留量,因其过多会对人体产生危害,所以在动物饲养过程中被禁止使用。我国目前有该类药物的检测标准《NY/T 727-2003饲料中呋喃唑酮的测定—高效液相色谱法》,但该方法仅能测定一种硝基呋喃类药物,远远不能满足我国对饲料中该类药物实际监控的需要。因此,研究建立饲料中多种硝基呋喃类药物的快速、准确、灵敏的检测方法十分迫切。本研究拟建立饲料中4种最常见的硝基呋喃类药物的同步检测HPLC分析方法标准。用乙腈提取试样中的硝基呋喃类药物,浓缩近干,用2%甲酸溶解,经混合型阳离子交换柱净化,高效液相色谱法测定,外标法定量。经试验:在10μg/g、50μg/g和500μg/g三个浓度添加水平,添加剂预混合饲料中NFZ、NFT、FTD和FZD的平均回收率在86.77%~98.50%之间,日内变异系数在1.85%~8.44%之间,日间变异系数在3.19%~9.65%之间。配合饲料中NFZ、NFT、FTD和FZD的平均回收率在86.16%~98.52%之间,日内变异系数在1.24%~8.99%之间,日间变异系数在2.53%~10.26%之间。     

检测饲料中4种硝基呋喃类药物的简易高效液相色谱法

本文建立了一种同时检测饲料中呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃它酮等4种硝基呋喃类药物的高效液相色谱法(HPLC-UV)。以乙腈:0.01 mol/L乙酸钠缓冲液(2/8)为流动相,检测波长375 nm,4种药物的保留时间均在15 min之内。样品提取过程简便,饲料样品以乙腈在80℃加热条件下提取,过滤膜后HPLC检测,整个过程在20 min内完成。该法对4种药物在饲料中的检测限为16~50μg/kg,4种药物在空白饲料中的添加回收率为80.1%~93.5%。因此,该方法可以用作饲料中硝基呋喃类药物的常规检测方法。     

高效液相色谱法检测饲料中7种硝基呋喃类药物

硝基呋喃类药物是一类化学合成的广谱抗菌药物,因具有高效抗菌作用和促生长作用曾广泛应用于畜牧和水产养殖业中,但此类药物及其代谢物具有潜在的致癌和诱导突变作用.其中的呋喃唑酮(FZD)、呋喃西林(NFZ)、呋喃妥因(NFT)和呋喃它酮(FTD)在世界多数国家中被禁止用于食品动物养殖,硝呋索尔(NFS)于2002年被欧盟禁用,呋喃苯烯酸钠(NFSS)于2002年被中国禁用.     

饲料中硝基呋喃类药物的检测研究进展

硝基呋喃类药物(Nitrofurans)是一类合成的抗菌药物,硝基呋喃类药物主要有:呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林;其作用机制为干扰细菌氧化还原酶从而阻断细菌的正常代谢。硝基呋喃类抗生素被广泛应用于大肠杆菌和沙门氏菌的预防和治疗中,也会对动物的增长有促进作用。长期使用会使此类药物残留在被饲喂动物的肌肉组织与内脏组织中,人在食用这些动物性食品后也会出现类似于药物过敏的症状,重者会出现心动过速、血压升高、胸闷、烦燥等。孕妇在长时间食用这些肉食品后还有可能造成新生儿畸形的风险。由此可见,对饲料中硝基呋喃类药物进行监测是保障人类食品安全的重要组成部分,是保障人类身体健康与生命安全的重要措施。文章从高效液相色谱法(HPLC)、联用技术分析法、超高效液相色谱法(UPLC)、免疫分析法(IA)、分光光度法的检测技术手段分别加以讨论。     

高效液相-质谱法测定饲料中硝基呋喃代谢物

采用高效液相色谱/串联质谱(LC/MS/MS)法同时测定饲料中4种硝基呋喃类代谢产物3-氨基-2-恶唑酮(AOZ)、5-马啉代甲基-3-氨基-2-恶唑酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-乙内酰胺(AHD)。盐酸水解饲料中蛋白结合的代谢物,同时加入2-硝基苯甲醛(2-NBA),37℃过夜衍生化。加入醋酸锌,调pH至7后,再加入亚铁氰化钾去除蛋白。后用乙酸乙酯提取,正己烷净化,分析物采用电喷雾电离正离子(ESI+)和多反应监测(MRM)模式检测,内标法定量。在添加质量浓度1~4μg/kg范围内,内标法回收率为85%~110%;相对标准偏差(RSD)小于15%;方法检出限AMOZ和AOZ为0.5μg/kg,SEM和AHD为1μg/kg。     

HPLC法检测饲料中4种硝基呋喃类药物

时饲料中四种硝基呋喃类药物呋喃西林(NFZ)、呋喃妥因(NFT)、呋喃它酮(FTD)和呋喃唑酮(FZD)的高效液相色谱(HPLC)检测方法进行了研究.采用50 mL乙腈于65℃下超声提取药物.经MCX固相萃取小柱净化后进行液相色谱-紫外检测,检测波长为370 nm对饲料进行10～500μg/g硝基呋喃类药物的添加回收实验,结果表明,4种药物的平均回收率为80.6%～99.9%(n=4),日内变异系数为0.68%～8.99%(n=4),日间变异系数为1.85%～8.44%(n=3).配合饲料中NFZ、NFT、FTD、FZD的检测限分别90、69、56μg/g和148 μg/g,定量限分别为180、137、112μg/g和296 μg/g;预混合饲料中NFZ、NFT、FTD、FZD的检测限分别为59、132、66μg/g和88 μg/g,定量限分别118、265、132μg/g和176μg/g.     

硝基呋喃类药物的残留检测（下）

(二)高效液相色谱-串联质谱法由于液相色谱-紫外法、液相色谱-质谱法灵敏度较差,液相色谱-串联质谱法已成为此类代谢物检测的主要方法,也被文献多次报道.     

高效液相色谱法检测饲料中磺胺嘧啶

磺胺嘧啶具有抗菌谱较广、性质稳定、使用简便等特点,所以在畜牧养殖业被用作治疗动物的肠道感染等疾病,但是如果以预防为目的在饲料中长期添加使用,则会使病菌产生耐药性,当细菌产生耐药性后,为达到疗效又不得不加大剂量使用,从而形成恶性循环。长期使用也会使动物体内致病细菌产生变异,给动物疾病检疫与防治带来不利影响,而且也会使磺胺嘧啶残留在被饲喂动物的肌肉等组织中,人食用后对人体健康带来不利影响。建立对磺胺嘧啶的检测方法有利于对违禁药物使用进行有效的监控,本文以高效液相色谱法(HPLC)对饲料中磺胺嘧啶进行检测,经试验:磺胺嘧啶离散系数(CV值)≤1.929%,回收率≥96.90%,回收率标准偏差≤0.94%;标准曲线r值≥0.99967;此方法具有操作简单,回收率较高,重复性好等特点,同时检测所用时间短,适合对饲料样品进行大批量检测。     

高效液相色谱法检测饲料中替米考星

替米考星对猪蓝耳病有一定的抑制与预防作用,因此常被添加到饲料中使用。它属于抗生素类药品,像大多数抗生素一样,长期在饲料中添加,会残留在被饲喂动物的肌肉组织中,引起心动过速和收缩力减弱。动物性产品中的残留会对人类造成过敏反应、毒性反应,长期食用还会造成人类肠道菌群失调,产生细菌耐药性。所以对饲料中替米考星的监测目的是保障人类的饮食卫生与安全。文章以高效液相色谱法检测饲料中的替米考星,经乙腈-磷酸盐缓冲溶液将饲料中的替米考星提取出来,再通过C18固相萃取柱净化,收集洗脱液,氮气吹干,经流动相溶液复溶,再注入高效液相色谱仪检测。紫外检测器290nm波长处检测其吸光度,同等条件下绘制工作曲线,替米考星含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比,试样与工作曲线比较定量。经试验,用流动相将替米考星标准品分别配制成浓度为1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL的系列标准,相关系数r≥0.99995,添加量为10μg/g、50μg/g、100μg/g、200μg/g、400μg/g时,平均回收率在78.9%～93.8%之间,变异系数分别为3.9～6.6%,替米考星的最低检测浓度为10mg/kg。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测饲料中4种硝基咪唑类药物

建立了同时检测饲料中洛硝哒唑、甲硝唑、二甲硝唑、替硝唑4种硝基咪唑类药物的超高效液相色谱-串联质谱法。样品经乙酸乙酯提取,Oasis MCX柱净化,以0.1%甲酸水-乙腈溶液为流动相梯度洗脱进行液相色谱-串联质谱检测。在10、50、100μg/kg的添加浓度下,饲料中各药物的回收率为70.3%～96.0%,相对标准偏差为4.2%～8.7%。检测限为3μg/kg,定量限为10μg/kg。     

高效液相色谱法检测饲料中呋喃唑酮的含量

由于呋喃唑酮具有治疗痢疾和肠炎的功效,并对霍乱和伤寒等疾病也有很好的预防作用,致使在饲料中常期添加使用,甚至于超剂量使用,呋喃唑酮在饲料中的不正当使用,致使呋喃唑酮会残留在动物的内脏及肌肉组织中,从而进一步危害人体健康。高效液相色谱法对饲料中的违禁药物呋喃唑酮进行检测,并对检测中应注意的问题加以讨论,此方法具有操作相对简单,所用时间短,具有良好的线性范围,且具有重复性好,变异系数低等优点;经试验:标准曲线r值≥0.99957,变异系数(CV值)≤0.9%,检测回收率≥92.53%,回收率标准偏差≤1.19%。     

硝基呋喃类药物的残留检测（上）

本文从液相色谱-紫外法、液相色谱-质谱串连法分别叙述了对硝基呋喃类四种药物的多残留检测,提出免疫分析法为其多残留检测的发展方向,并指出对于硝基呋喃类药物残留检测时注意衍生化的条件和净化时注意事项.     

超高效液相色谱法检测饲料中氟喹诺酮类药物的方法研究

恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星属于化学合成抗菌素类药物,在动物的饲料中添加会减少动物感染肠道类疾病的概率,但这类药物会残留在动物的肌肉组织中,人食用后给人体的健康带来不利影响,对生长发育中的儿童尤其不利,细菌耐药和不良反应也相继发生,主要有过敏、溢血、肾衰等。此外,还有诱发精神病及癫痫患者发病和增加致胎儿畸形的风险。文章以超高效液相色谱-荧光法检测饲料中的恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星类违禁药物进行探讨,试样用磷酸盐缓冲溶液提取,C18萃取柱净化,流动相洗脱后,用超高效液相色谱-荧光检测器测定,激发波长280nm,发射波长450nm处测定其吸光度,同条件下测定恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星药物标准品相对应的峰面积响应值,恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比,试样与标准品比较定量。经试验:此方法具有操作简单,回收率稳定,检测时间短等优点;标准品峰面积响应值稳定,此方法在环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星浓度范围在0.1~0.5μg/m L时,能够达到较好线性系数,符合检测时的相关要求;恩诺沙星相关系数r≥0.99996,环丙沙星相关系数r≥0.99987,沙拉沙星相关系数r≥0.99982。恩诺沙星回收率为:83.5%~96.5%,批内变异系数≤4.2%,批间变异系数≤7.5%;环丙沙星的回收率为:74.9%~95.5%,批内变异系数≤5.1%,批间变异系数≤7.7%;沙拉沙星回收率为:80.1%~95.0%,批内变异系数≤4.5%,批间变异系数≤6.5%。     

高效液相色谱法检测饲料中的玉米赤霉烯酮

本文在试验时将试验样品经提取液提取,用磷酸盐缓冲溶液稀释,用免疫亲和柱（IAC）进行净化;净化后经甲醇洗脱,洗脱液氮气吹干后经流动相溶液复溶,最后用反相高效液相色谱仪-荧光检测器进行测定;荧光检测器激发波长274nm处,发射波长440nm处检测吸光度,同等条件下绘制工作曲线,玉米赤霉烯酮含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比,试样与工作曲线比较定量。经试验：样品最低检测限可达到0.01mg/kg,标准曲线相关系数r值≥0.999969,标准品变异系数（CV）≤1.67%,回收率≥91.0%,回收率标准偏差≤0.47%,重复性试验变异系数（CV）≤0.59%。     

食品中硝基呋喃类药物残留检测方法的研究进展

硝基呋喃类药物作为一类广谱性抗生素,广泛应用于食用性动物疾病的预防与控制中。然而不法分子对此类药物的长期滥用,易使动物体内产生耐药菌株,进而导致抗生素的作用大大降低,同时,食品中药物残留还对人体有“三致”作用（致癌、致畸、致突变作用）。作者对食品中硝基呋喃类抗生素代谢物残留的危害及其检测方法进行了调查,食品中硝基呋喃类药物残留的检测方法主要包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、液相色谱串联质谱法、酶联免疫分析法、胶体金免疫分析法和荧光免疫分析法,作者概述了这些方法的研究现状,并对今后的研究方向提出建议,以期为以后的方法学研究提供参考。     

高效液相色谱法检测饲料中左炔诺孕酮的探讨

本文以高效液相色谱法对饲料中的左炔诺孕酮进行检测,饲料中左炔诺孕酮用纯乙腈提取,C18柱净化,纯乙腈洗脱、吹干后用1mL乙腈定容,反相高效液相色谱法测定,外标法定量.经测试:配制6个不同浓度的左炔诺孕酮标准系列工作溶液,分别为0.2、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0μg/mL,线性回归方程为:y=71.86356+55.29605x,r=0.9998;以配合饲料、浓缩料为基础进行空白添加实验,每种料中左炔诺孕酮的添加3个浓度水平,分别为为1.0、10.0、20.0mg/kg,平均回收率范围为81.5％～99.7％;日内变异系数范围为2.2％～9.2％,日间变异系数范围为3.5％～11.0％;检测限为0.1mg/kg;定量限为0.3mg/kg.应用高效液相色谱法测定饲料中的左炔诺孕酮,该方法色谱条件易于掌握,操作步骤简单易学,精密度和准确度完全符合分析要求,是一种快速准确、适用广泛的测定方法.     

液相色谱法检测饲料中的己烯雌酚

利用高效液相色谱法（HPLC）检测饲料中己烯雌酚的含量．试样中的己烯雌酚经20％甲醇溶液提取．过HLB固相萃取净化柱小柱净化．再于高效液相色谱仪测定．以己烯雌酚标准工作溶液的浓度为横坐标．峰面积值为纵坐标绘制标准曲线。此方法具有操作简单、灵敏度高、时间短、准确性好等优点,检测回收率为81.4％～94．8％．回收率标准偏差（RSD）≤1．48％,标准曲线相关系数（r值）≥0．999946,变异系数（CV值）≤0．98％。     

高效液相色谱法检测饲料中喹烯酮的探讨

由于喹烯酮在饲料中的不正当使用,致使喹烯酮会残留在动物的内脏及肌肉组织中,从而进一步危害人体健康。本文以高效液相色谱法对饲料中的违禁药物喹烯酮进行检测,并对检测中应注意的问题加以讨论,此方法具有操作相对简单、所用时间短、良好的线性范围,且重复性好,变异系数低等优点;经试验：标准曲线r值≥0.999882,变异系数（CV值）≤0.85%,检测回收率≥91.56%,回收率标准偏差≤1.40%。     

动物性食品中硝基咪唑类药物残留检测方法 --高效液相色谱法

农业部于 2 0 0 3年 1月 2 2日发布了 2 3 6号公告 ,发布 1 2个动物性食品中兽药残留检测方法。方法之二 :动物性食品硝基咪唑类药物残留检测方法———高效液相色谱法。动物性食品硝基咪唑类药物残留检测方法———高效液相色谱法1　范围本标准规定了动物性食品中甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑单个或混合物残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于鸡的肌肉和肝脏组织中甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑单个或混合物残留量检测。2　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件 ,其随后…     

液相色谱-串联质谱测定饲料中7种硝基咪唑类药物

采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定了饲料中甲硝唑(MNZ)、地美硝唑(DMZ)、洛硝唑(RNZ)、替硝唑(TNZ)、奥硝唑(ONZ)、异丙硝唑(IPZ)和塞克硝唑(SCZ)等7种硝基咪唑类药物。样品用乙酸乙酯提取,正己烷-磷酸溶液反萃取,MCX柱净化,以0.1%乙酸水溶液和乙腈作流动相进行梯度洗脱,电喷雾电离源正离子(ESI+)多反应监测(MRM)模式下检测。方法的检测限和定量限分别为0.03 mg/kg和0.1 mg/kg。添加浓度为0.1、1 mg/kg和10 mg/kg时的平均回收率为72.9%~98.8%,变异系数为4.9%~12.1%。