影响鸡球虫未孢子化卵囊及孢子化卵囊活性因素的探讨

影响鸡球虫未孢子化卵囊及孢子化卵囊活性因素的探讨李玉兰①张龙现②宁长申②陈洪科①杨建功鉴于鸡球虫卵囊的孢子化过程在外界完成,那么外界条件如温度、湿度、光照等不可避免地影响卵囊的成熟过程,但是有关这方面的研究在国内尚缺乏系统性,因此作者进行了下列试验,...     

中草药对兔球虫卵囊孢子化的影响

为了解中草药对球虫卵囊孢子化的影响,将未孢子化斯氏艾美尔球虫卵囊分别在质量浓度为0.25g/mol、0.50g/mol、1.00g/mol的蒲公英、青蒿、白头翁、秦皮药物中进行孢子化,于第4、6、8天观察球虫卵囊的孢子化情况。结果表明,所用中草药对球虫卵囊的孢子化率有一定的抑制作用,白头翁的抑制效果最好,其中以青蒿的抑制效果最差。     

2种中药提取液对兔球虫卵囊孢子化的影响

为了研究青蒿、秦皮这2种中草药不同质量浓度溶液对兔球虫卵囊孢子化的影响,笔者采用饱和食盐水漂浮法分离兔球虫卵囊,再将未孢子化的兔球虫卵囊分别置于不同质量浓度(0.25 g/m L、0.50 g/m L、1.00 g/m L)的青蒿及秦皮中药提取液中,28℃恒温连续培养5 d。每24 h在显微镜下观察兔球虫卵囊的孢子形成情况,计算兔球虫卵囊孢子化率。试验结果表明,2种药物对球虫卵囊孢子化均有抑制效果,但在相同时间、相同浓度时秦皮的抑制作用高于青蒿,且随着药物浓度的增加,对球虫卵囊的孢子化抑制效果也增强。5 d后抑制效果最好的是1.00 g/m L的秦皮,孢子化率为62%;抑制效果最差的是0.25 g/m L的青蒿,孢子化率为85%。     

猪囊等孢球虫孢子化与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质组学分析

通过比较猪囊等孢球虫孢子化卵囊与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质,以期从蛋白质组学角度研究其发育机制,并为此类球虫的发育机制及该病的免疫预防或化学防治找到新的“关键”分子奠定基础。首先建立哺乳仔猪的猪囊等孢球虫感染模型,然后运用iTRAQ技术,结合LC-MS/MS分析差异表达蛋白质,并采用荧光定量PCR验证iTRAQ数据。结果共鉴定出174个蛋白,差异表达蛋白40个,其中38个蛋白上调表达,2个蛋白下调表达,差异蛋白主要涉及代谢、抗生素的生物合成、次生代谢产物的生物合成和糖酵解/糖异生过程等通路。研究结果为阐明猪囊等孢球虫孢子化发育机制以及发现新的生物标志物提供参考。     

粪便保存条件、时间对鸡球虫卯囊活力的影响实验

为探讨在不同温度条件下粪便保存不同时间对球虫卵囊成熟力的影响,本实验将含有球虫卵囊的粪便在．20℃、4℃、20℃、28℃分别保存0h、24h、48h、72h,通过观察卵囊的孢子化率确定最佳保存条件。结果表明：相同保存温度条件下,保存0h、24h、48h、72h的E．tenella早熟耐药株卵囊的孢子化率依次降低。-20℃和28℃时孢子化率均未达到80％;在4℃时粪便保存24h的孢子化率达到80％以上,保存48h及以上时孢子化率极显著（P〈0．01）低于保存24h的孢子化率;在20℃时的孢子化率均达到80％以上。     

球虫消毒剂的筛选及氨水对艾美耳球虫卵囊抑杀条件的优化

为了筛选有效的球虫消毒剂,本研究将柔嫩艾美耳球虫卵囊分别与16种常用消毒剂和1种高效抗球虫药物溶液（250 mg/L妥曲珠利溶液）混合作用2 h然后在2.5%重铬酸钾溶液中孢子化培养,或混合作用4 h后接种14日龄雏鸡,根据卵囊孢子化率、孢子化抑制率、每克粪便卵囊数量（oocysts per gram of feces,OPG）、病变计分和血便情况评价消毒剂和抗球虫药物抑杀球虫卵囊效果。结果显示,8%氨水对未孢子化卵囊和孢子化卵囊均表现为100%的抑杀效果;250 mg/L妥曲珠利、3%甲醛、4%苯酚、0.5%过氧乙酸、5% NaOH+10% NaCl和5% NaOH对球虫卵囊活性具有一定的抑制作用,孢子化抑制率超过10%,但是对孢子化卵囊抑杀作用不明显;而剩余10种常用消毒剂对球虫卵囊没有明显的抑杀作用。氨水抑杀球虫卵囊条件优化的试验结果显示,1%~8%氨水与未孢子化卵囊作用1 h以上,均可100%抑杀球虫卵囊活性。粪便干扰试验结果显示,粪便不影响2%和4%氨水对球虫卵囊的抑杀效果。本研究结果说明常用消毒剂和抗球虫药物不能有效杀灭球虫卵囊的活性,而氨水是一种高效球虫消毒剂。本研究结果可为开发新型高效球虫消毒剂和球虫病控制提供参考。     

一氧化氮对球虫(E.tenella)卵囊孢子生殖的抑制特性

本研究利用NO供体以及几种抗氧化剂和NO清除剂来分析外源性NO对E.tenella卵囊孢子生殖的抑制特性.试验结果表明:S-亚硝基硫醇类NO供体(SNAP和GSNO)对卵囊的抑制作用具有明显的剂量-效应荚系,8 mmol/L的SNAP和GSNO均可完全抑制新鲜卵囊的孢子生殖;KCN对卵囊的抑制呈现为剂量-效应关系,但NaN3没有抑制作用.维生素C、甘露醇和水杨酸钠等抗氧化物质以及FeSO4和DTT均不能消除GSNO对卵囊孢子生殖的抑制作用.K2Cr2O7和KMnO4均会明显抑制GSNO对卵囊的作用.NO清除剂血红蛋白(Hb)能够消除NO供体对卵囊的抑制作用,并呈现剂量-效应关系.     

判断消毒剂对鸡球虫孢子化卵囊抑杀效果的新方法——脱囊抑制试验

判断消毒剂抑杀鸡球虫孢子化卵囊的效果,一般要通过鸡体试验,即观察经消毒剂作用过的卵囊对健康鸡的致病力,以病变值、卵囊值、抗球虫指数等判定效果［１］。鸡体试验操作繁琐,试验时间长,且不能确定药物抑杀的百分率。我们参考文献［２,３］介绍的脱囊技术,总结出...     

温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响

为探讨温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响,试验以7%氨水作为对照组,设置1:50、1:100、1:150的球虫消杀剂溶液组,同时设置生理盐水对照组.各处理液分别在4℃和20℃下与柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊在体外相互作用6、12和24h,然后用2.5%重铬酸钾溶液培养处理后的球虫卵囊,观察其孢子化率.结果表明:1:50、1:100、1:150球虫消杀剂在4℃分别处理6、12和24h的卵囊孢子化率均极显著(P<0.01)高于20℃下的对应处理组.球虫消杀剂在20℃下有更好的抑制球虫卵囊孢子化的作用.     

阳光照射对球虫卵囊孢子化率的影响

为了解阳光照射对球虫卵囊孢子化率的影响,将未孢子化卵囊分别在阳光下照射2小时、4小时、6小时后,放在27～28℃恒温箱中培养,于第3天和第5天进行显微镜观察计数球虫卵囊孢子化率。试验结果表明,阳光照射对球虫卵囊的孢子化率有着明显抑制作用,随着光照时间的延长,球虫卵囊的孢子化率呈下降趋势。说明鸡球虫未孢子化卵囊对高温干燥的环境抵抗力差,阳光照射3～4小时,孢子化率明显下降12.67%￣26.00%。     

柔嫩艾美耳球虫YL株抗药性研究

用柔嫩艾美耳球虫杨凌株 ( YL t)对 1 4日龄雏鸡进行感染 ,检测了该虫株对 4种常用抗球虫药 (马杜拉霉素、地克珠利、克球粉和氯苯胍 )的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标 ,进行综合评定 ,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性 4个等级。结果表明 ,该虫株对马杜拉霉素有轻度抗药性 ,对地克株利有完全抗药性 ,对克球粉和氯苯胍无抗药性。     

外源性一氧化氮对鸡柔嫩艾美尔球虫的作用

用酸化亚硝酸钠作为一氧化氮(NO)供体处理新收取的柔嫩艾美尔球虫未孢子化和已孢子化卵囊,来探讨外源性NO对球虫卵囊的抑杀作用。另外通过内服亚硝基谷胱甘肽(GSNO)试验来观察外源性NO对球虫病的防治作用。结果表明,酸化亚硝酸钠溶液(pH=1)对球虫卵囊的孢子生殖具有明显的抑制作用,20mmol/L酸化亚硝酸钠溶液对卵囊孢子生殖的抑制率可达100%;但不经酸化的亚硝酸钠溶液和相同pH的盐酸溶液对卵囊的孢子生殖没有明显影响。经20mmol/L以上浓度酸化亚硝酸钠处理的孢子化卵囊也失去了对雏鸡的致病力,但直接内服GSNO溶液则没有明显的抗球虫作用。这提示外源性NO对鸡柔嫩艾美尔球虫未孢子化和孢子化卵囊均有抑杀作用,但直接内服没有明显的抗球虫病作用。     

柔嫩艾美耳球虫杂交株对亲本株的免疫保护性研究

为探讨柔嫩艾美耳球虫杂交株对亲本株的免疫保护性,本研究用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)杂交株及其亲本广州株、长春株、黑龙江株分别对AA肉鸡进行免疫和攻虫,通过OPG计数、粪便计分、盲肠病变计分、增重测定和保护率等指标评价免疫保护效果。结果表明E.tenella杂交株对其亲本广州株、长春株、黑龙江株的感染具有较强的免疫保护效果,保护率分别为83.9%、79.1%和81.2%;杂交株免疫肉鸡的盲肠病变计分和粪便计分显著低于广州株、长春株和黑龙江株(p0.05)。杂交株免疫后的肉鸡再用亲本株攻虫,采血进行CD4+T、CD8+T细胞检测,结果杂交株能引起两种T细胞数量增加,表明CD4+T、CD8+T细胞在球虫免疫中起着重要作用。     

Effects of clopidol on sporulation and infectivity of Eimeria tenella oocysts

Feed additive anticoccidials currently used in Japan were examined for possible effects on oocyst sporulation of Eimeria tenella. Monensin, salinomycin, lasalocid, amprolium plus ethpabate, amporolium plus ethopabate plus sulfaquinoxaline, clopidol, or nicarbazin were given to chickens continuously via the feed at the recommended use level or one-half of that level. Oocysts discharged in feces 7-8 days post inoculation (PI) were collected and aerated for sporulation. Low sporulation rate was noted, when clopidol at 62.5 mg kg-1 was given from 4 to 7 days PI. These oocysts were as infective as oocysts from controls, based on weight gain, feed efficiency, gross lesion score of cecae, and oocyst count 7 days PI. The results of the study indicated that the second schizogony and gametogony are vulnerable to clopidol, as evidenced by oocyst sporulation, but infectivity of these sporulated oocysts was not affected.     

柔嫩艾美耳球虫交叉抗药性试验

以雏鸡为试验对象,以抗球虫指数(ACI)为判断指标,检测5 mg/kg马杜霉素,70 mg/kg盐霉素,1 mg/kg 地克珠利对抗盐霉素株、抗地克珠利株和实验室保存的敏感株的控制效果。结果表明,马杜霉素对3 个虫株都有很好的抑杀效果,地克珠利也可有效地控制抗盐霉素株,同时,盐霉素也可有效地控制抗地克珠利株,说明盐霉素和地克珠利2种药物之间没有交叉抗药性。     

柔嫩艾美耳球虫病毒的鉴定

鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）的一种单细胞寄生性原虫引起的严重危害养禽业发展的重要疾病之一,遍及世界各地。感染鸡的艾美耳属球虫中,国外已报道在巨型艾美耳球虫（E.maxima）,堆型艾美耳球虫（E.acervu-lina）,毒害艾美耳球虫（E.necatrix）和布氏艾美耳球虫（E.brunetti）中发现了病毒粒子或病毒RNA。但是作为危害最严重的柔嫩艾美耳球虫是否有病毒感染,国内外迄今尚无报道。本研究首次在柔嫩艾美耳球虫中发现病毒并对其进行了鉴定。通过核酸分析、RNA依赖的RNA聚合酶（RDRP）活性和电镜形态观察对病毒进行鉴定。核酸酶的敏感性试验结果表明在柔嫩艾美耳球虫总核酸电泳图谱上观察到的大小分别为1.4、2.4和3.6kb的3条病毒带均不能被DNA酶（100mg/L）降解,但可被RNA酶（1.0mg/L）降解,表明这些核酸为RNA。另外,这些核酸不能被高盐浓度（0.3mol/L NaCl）RNase A（10mg/L）降解,但可被低盐浓度（0.015mol/L NaCl）RNase A（10mg/L）降解,并且采用α-32P标记的UTP掺入法测得该病毒样核酸具有RNA依赖RNA聚合酶（RDRP）活性,表明这些核酸为双链RNA（dsRNA）。利用蔗糖梯度离心和透射电镜技术对柔嫩艾美耳球虫病毒进行了分离和鉴定。电镜负染观察到柔嫩艾美耳球虫病毒粒子外观呈球形,二十面体,无囊膜,直径38nm。     

人工感染柔嫩艾美耳球虫对雏鸡盲肠正常菌群的影响

在对雏鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫后6、8、13、20天,分别对感染雏与未感染雏盲肠内容物中梭杆菌、真杆菌、消化球菌、乳酸杆菌、类杆菌、肠球菌、葡萄球菌和肠杆菌等8种主要正常菌群进行定性、定量分析。结果发现在球虫感染第20天,感染组有益菌如乳酸杆菌的数量低于对照组,差异极显著(P<0.01),有害菌如梭杆菌、葡萄球菌数量感染组高于对照组,其中梭杆菌差异显著(P<0.05),葡萄球菌差异极显著(P<0.01)。     

硝唑尼特混悬液对鸡柔嫩艾美尔球虫病治疗效果研究

采用人工接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊的方法复制鸡球虫病模型,检测发病率、死亡率、存活率、增重量等指标,研究硝唑尼特混悬液对鸡球虫病的临床治疗效果.结果显示,高、中、低剂量的硝唑尼特抗球虫指数分别为163.6、168.3、137.9;硝唑尼特混悬液与癸氧喹酯对照组相比差异显著(P＜0.05),与妥曲珠利对照组相比差异不显著(P＞0.05);硝唑尼特混悬液高剂量组和中剂量组差异不显著(P＞0.05),抗球虫指数为中效,低剂量组的抗球虫指数为低效.试验证明,硝唑尼特混悬液对鸡柔嫩艾美耳球虫病具有一定的治疗效果,有望开发为新的抗球虫药物.