用于PCR检测对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)的一种快速提取DNA方法

使用采样液ＳＥＭＰ－Ｔｒｉｓ保存人工感染ＨＨＮＢＶ（ＷＳＳＶ的一个分离株）的中国对虾组织,然后分别用酚抽提法、玻璃乳（Ｇｌａｓｓ Ｍｉｌｋ）回收法、硝酸纤维素膜结合法和煮沸－乙醇沉淀法提取ＤＮＡ。应用ＨＨＮＢＶ引物对提取的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,使用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行鉴定和检测。通过比较表明,煮沸－乙醇沉淀法是一种最快速、简便的从采样液ＳＥＭＰ－Ｔｒｉｓ保存的病虾组织中制备ＰＣＲ模板的方法     

对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒单克隆抗体的研制

用经密度梯度离心纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ—９３７）注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其免疫后的脾细胞与ｓｐ２／０骨髓瘤细胞进行融合。经筛选与克隆，获得７株抗ＨＨＮＢＶ的单克隆杂交瘤细胞株。其中Ｆ９株的染色体数为８７，ＥＬＩＳＡ测定培养上清中单抗滴度为１∶８，腹水为１∶１０００。患有杆状病毒的皮下及造血组织坏死症的对虾组织切片的单抗酶联免疫染色，表明Ｆ９株单抗只与ＨＨＮＢＶ病灶发生特异性结合，与对虾组织结构不发生特异性反应。将其用于现场样品的检测研究表明，该抗体适于用来进行对虾暴发性流行病的病原检测。     

皮下及造血组织坏死杆状病毒对中国对虾亲虾的人工感染

皮下及造血组织坏死杆状病毒对中国对虾亲虾的人工感染宋晓玲，黄倢，王崇明，于佳，陈碧鹃，杨丛海（黄海水产研究所，青岛２６６０７１）关键词中国对虾，亲虾，皮下及造血组织坏死杆状病毒，人工感染，温度效应ＡＲＴＩＦＩＣＩＡＬＩＮＦＥＣＴＩＯＮＯＦＢＲＯＯＤＳ...     

对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒单克隆抗体的ELISA快速检测

对虾病毒性暴发病对我国对虾养殖业的危害十分严重,其病原为皮下及造血组织坏死杆状病毒(ｈｙｐｏｄｅｒｍａｌａｎｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｎｅｃｒｏｓｉｓｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＨＨＮＢＶ)[1]或称为对虾白斑综合症病毒(ｗｈｉｔｅｓｐｏｔｓｙｎｄｒｏｍｅｂａ?..     

中国对虾杆状病毒PCR扩增产物的DNA序列测定及分析

采用台湾报道的白点综合征相关杆状病毒的一对特异引物,对中国对虾的杆状病毒进行ＰＣＲ扩增,获得了预期的１４４７ｂｐ的扩增产物,将ＰＣＲ产物用ＱＩＡＥＸＩＩ纯化,直接进行序列测定。部分序列测定及分析结果表明,中国对虾的杆状病毒的部分ＤＮＡ序列与台湾ＷＳＢＶ的相关序列的同源性为９８．７％,经计算机分析该段基因序列有６个ＯＲＦ。该ＰＣＲ引物可以用中国对虾杆状病毒及其中相关病毒的检测与比较研究。     

海捕中国对虾杆状病毒的检测

以海捕中国对虾为材料,利用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术和核酸探针技术,对从中国对虾杆状病毒核酸随机文库中筛选的４个片段（大小分别为８００,１１００,１５００,２５００ｂｐ）用地高辛标记作为探针,进行斑点杂交,检测对虾杆状病毒。结果表明海捕中国对虾的鳃、中肠、肝胰腺、卵巢等组织检测为阳性,肌肉组织为阴性。实验表明中国对虾村状病毒存在垂直传播的可能性。     

利用核酸探针技术检测斑节对虾杆状病毒的初步试验报告

通过对各地送检样品进行检测,发现苗期带毒类型,与中国对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒具有同源性,故采用核酸探针技术检测苗期带毒苗是有效的。该技术为我省对虾养殖业的早期诊断及对虾的检疫提供一条快捷有效的途径。     

首例斑节对虾越冬亲虾发生杆状病毒的皮下及造血组织坏死症研究

湛江长洪对虾苗种实验场的斑节对虾转入越冬池后３～１０ｄ内发生暴发性死亡，症状与北方地区杆状病毒的皮下及造血组织坏死症一致。病理学研究表明，所有发病虾样的皮下组织、造血组织、结缔组织、肝胰腺血窦、淋巴器官等细胞核均存在严重的ＨＨＮＢＶ病灶，只有２０％的发病对虾肝胰腺中观察到轻微感染的ＭＢＶ包涵体。ＨＨＮＢＶ单抗的酶联免疫染色，可对ＨＨＮＢＶ的病灶产生特异性着色，对虾组织结构和ＭＢＶ包涵体均不着色。在山东培育三代并养殖１６个月的斑节对虾中也观察到与湛江发病的越冬亲虾相同的情况。以上说明，近年来在广东一带ＨＨＮＢＶ是值得重视的病原，其危害可能重于ＭＢＶ。对于发生过对虾暴发性流行病的群体来说，不宜用来作为亲虾。     

PCR法制备地高辛标记DNA探针斑点杂交检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)

利用非放射性标记物地高辛(DIG),通过PCR方法制备了对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)DNA探针,探针长度705bp,标记产量为20ng／μL。通过核酸探针斑点杂交检测方法对此探针特异性及灵敏度进行验证,结果表明,该探针具有较高的灵敏度和较强的特异性,检测IHHNV DNA的检出灵敏度为24．8pg,可检出26．6ng患病对虾组织DNA中的IHHNV,与250．4ng健康虾组织DNA、202．5ng健康虾匀浆液,白斑综合症病毒(WSSV)DNA和肝胰腺细小病毒(HPV)DNA均不发生交叉反应。本方法可应用于健康亲虾、苗种的培育和无特定病原(SPF)对虾种群的选育及IHHNV流行病学调查,并具有较高的应用价值。     

对虾暴发性流行病病原对中国对虾幼体及仔虾的人工感染研究

用对虾暴发性流行病病原（ＨＨＮＢＶ）作为人工感染实验的毒种来源,对中国对虾幼体及仔虾进行了人工感染研究,结果表明ＨＨＮＢＶ通过水体浸浴不能感染健康的中国对虾卵,幼体及仔虾;但可通过投喂感染健康的中国对虾仔虾,使其发病死亡,死亡的进程随着体长的增加而缩短。     

中国对虾人工受精技术的研究

首次探讨了中国对虾人工受精的方法。干法、湿法、半湿法和滴管法都可获得一定比例的受精卵,其中滴管法的受精效果最佳,最高受精率为77.8％。受精卵经过培养,能够进行正常的卵裂和胚胎发育。通过对这几种方法受精效果的分析和比较,认为,在精卵未丧失受精能力的前提下,尽可能地使精卵充分混合,才能得到较高的受精率。还对这四种方法的人工受精和自然受精对受精率的影响进行了比较和分析。     

中国对虾胃内主要基础饵料检出率及其与对虾生长的关系

１９９３年在牟平宁海虾场养池通过定期分析对虾胃含物，发现在虾池生物种类较多的情况下，对虾最先大量摄食猫水蚤，到６月下旬，则主要摄食一种小型多毛类短鳃伪稚虫 。到７月中旬，基础饵料在虾胃中急剧减少，若投饵不足，将有高比例的空胃虾 。     

中国对虾杆状病毒垂直传播途径的初步探讨

中国对虾杆状病毒垂直传播途径的研究对切断病毒的传播途径,培育健康的对虾种质资源,具有重要的理论和实践意义。本文利用电镜技术,对中国对虾亲虾的卵巢,卵细胞和无节幼体,溲状幼体,糠虾,仔虾,幼成虾进行病毒检测,结果发现卵巢和卵细胞中有似病毒粒子,无节幼体,糠虾,仔虾,幼成虾有杆状病毒感染,并初步探讨了中国对虾杆状病毒垂直传播的可能性。     

中国对虾产卵前后卵巢的形态和结构变化

采用解剖和组织切片等方法研究了中国对虾产卵前后其卵巢的结构变化,排卵以及卵子遇海水后的激活情况。对虾卵巢可分为头前叶,侧叶和由腹部端向后延伸至尾节并于末端愈合的腹叶。     

维生素B_(12)对中国对虾仔虾生长与存活的影响

通过在配合饵料中添加不同剂量维生素B_(12)的方法,研究维生素B_(12)对中国对虾仔虾的影响。结果表明,适量的维生素B_(12)可明显地促进仔虾的生长,并可提高仔虾的存活率。     

中国对虾卵子激活过程的形态学研究

报道了对中国对虾卵子激活反应的形态学研究。中国对虾卵子皮层中有由卵黄膜下陷形成的与卵表垂直的皮层囊,内有棒状结构称棒状周边体,其内物质为凝胶前体。对虾卵子的激活并不需要精子的发动,而是在卵子与海水接触后即开始进行。在卵子激活过程中,棒状周边体向外放出形成花冠状的凝胶层,然后从基部开始逐渐消失并向远端扩展,最后完全消失,同时卵子进行成熟分裂放出第一、第二极体,并举起受精膜,完成激活反应。还对中国对虾卵子激活的作用进行了讨论。     

鹰爪虾与中国对虾雌虾纳精囊的形态结构

使用激光扫描共聚焦显微镜对鹰爪虾与中国对虾雌虾纳精囊的形态结构进行研究。结果表明,鹰爪虾与中国对虾都具有封闭式纳精囊,鹰爪虾纳精囊表面被前两片甲壳板所覆盖,两板中间为一开口,交配后被胶体物质堵塞,纳精囊中部为单一的囊腔,囊腔向后部两侧延伸形成两个袋状的囊,为贮存精子囊的部位,中国对虾的精囊内为单一的囊腔,外面覆盖有两片圆型,左右对称的甲壳质薄片,囊腔内部由前向后伸出三个锥状的甲壳质突起,交配的雌虾     

中国对虾蜕皮与附肢刚毛发生关系的研究

中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）的蜕皮周期具有独特的、可预报的变化之特性。利用这一特性可确定中国对虾的蜕皮分为４个阶段：（１）蜕皮后期（阶段Ａ、Ｂ）：刚蜕皮之后；（２）不蜕皮期（阶段Ｃ１－３）：组织生长和食物贮藏期；（３）蜕皮前期（阶段Ｄ０－３）：为下次蜕皮准备有效的形态和生理变化；（４）蜕皮期（阶段Ｅ）：旧表皮脱落期。