白阿魏侧耳菌丝体生长条件的优化

白阿魏侧耳(Pleurotus nebrodensis)是一种特有的食药两用珍稀真菌,具有调节人体生理平衡,增强人体免疫功能的作用。本文以白阿魏侧耳为材料,研究了不同的温度、pH值、碳源、氮源和通气条件对其菌丝生长影响。结果表明菌丝生长的适宜生长温度范围为22℃～30℃,最适温度是25℃;适宜生长pH值为5.0～8.0,最适pH值是7.5;最适碳源为蔗糖;最适氮源为蛋白胨;充足的氧气有利于菌丝生长。     

龙眼SRAP反应体系的建立和优化

为获得最佳的龙眼SRAP反应体系,采用分步优化的方法对影响龙眼SRAP-PCR反应的模板DNA用量、Me2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量等进行了研究.确立了适合龙眼SRAP分析的反应体系,即体系总体积25 μl,包含1×PCR Buffer,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs 0.5 mmol/L,引物0.3 μmol/L,模板DNA 10 ng,TaqDNA聚合酶1.5 U.结果表明,该体系能很好地满足龙眼基因组SRAP扩增的要求,SRAP标记应用于龙眼遗传研究是可行的.     

春兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化

[目的]为进一步从分子水平上研究春兰种群的遗传多样性奠定基础。[方法]以春兰基因组DNA为模板,通过单因子试验研究ISSR反应体系中主要成分对扩增结果的影响,以寻找适合春兰ISSR分析的反应体系。[结果]春兰的ISSR反应体系较适宜的扩增条件为:25lμPCR反应体积中,15.78μl双蒸水,2.5μl 1×CR buffer,1.1 UTaqDNA聚合酶,100 ng基因组DNA,2.0 mmol/L MgCl2,150μmol/LdNTPs,2μmol/L引物。最佳扩增程序为:94℃预变性5 min,然后进行40个循环;94℃变性45 s,复性温度比各引物的TM值略低1~2℃,45 s,72℃延伸75 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存。[结论]该优化系统的建立为进行春兰鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序。     

菟丝子RAPD反应体系的建立和优化

以南方菟丝子基因组DNA为试材,采用单因素递进筛选方法对菟丝子的RAPD反应体系进行了优化。结果表明,在25μL总反应体积中,最佳浓度配比为：模板DNA 20 ng,MgC l23.0 mmoL/L,引物10μmoL/L,dNTP 400μmoL/L,TaqDNA聚合酶1个单位（U）,10×反应缓冲液2.5μL。扩增程序为：94℃变性3 m in,再进入循环;94℃变性1 m in,40℃退火1m in,72℃延伸1 m in,共40个循环;72℃最终延伸10 m in,于4℃保存。     

龙眼ISSR反应体系的建立和优化

对影响龙眼ISSR-PCR扩增反应的各个参数进行优化,建立适合龙眼的ISSR反应体系:PCR反应体积为20μl,其中模板DNA 25ng,引物0.2μmol/L,dNTP 100μmol/L,Taq DNA聚合酶0.5U,MgCl2 2.5mmol/L,10×PCR缓冲液2.0μl;扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性1min,退火温度1min,72℃延伸90s,40个循环;72℃延伸7min。     

丝瓜SRAP-PCR体系建立与优化

以丝瓜基因组DNA为模板,采用正交试验设计,对SRAP(sequence related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)反应体系中的4种关键因素(dNTPs、Taq酶、引物、模板)进行优化,建立了适合于丝瓜基因组SRAP分子标记的扩增体系:反应总体积10μ1,其中含Taq酶1.O u、模板DNA50.00ng、dNTPs 0.3 mmol/L、引物0.30μtmol/L.该体系能很好地满足丝瓜基因组SRAP标记的要求,可应用于丝瓜的分子生物学研究.     

阿魏侧耳与白灵侧耳的菌丝体生长和出菇特性

对2个白灵侧耳和2个阿魏侧耳菌株,进行拮抗试验、菌丝体生长观察和出菇试验.结果表明:两种侧耳的菌丝形态、子实体形态和对温度的反应有很大的差异.白灵侧耳的一级种、二级种均比阿魏侧耳菌株提前3～5天长满,栽培菌袋也是如此.拮抗试验两者间产生不生长区带.两种菌丝在低温下(15～20℃)试管内都易分化原基.阿魏侧耳由于播种期不同菇体的颜色和出菇所需的时间变化很大.白灵侧耳随着秋季播种期推后出菇时间延迟,菇形无变化,两者每袋产量差异不显著.     

肉兔AFLP分析体系的建立和优化

以法国伊普吕肉兔的6个品系、新西兰、加利福尼亚兔共8个种群为试材,建立了肉兔扩增片段长度多态性（A玎P）分析体系,对其分析过程中DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染效果进行了确立。由72种引物组合中筛选出了15种引物组合,建立了肉兔的AFLP指纹图谱。条带清晰可辨。扩增信号强,无背景干扰。     

火龙果ISSR优化体系的建立

为建立稳定的火龙果ISSR-PCR反应体系,采用单因素与正交设计试验相结合的方法,对ISSR反应体系中的主要因素进行了优化筛选。结果表明,20μL ISSR反应体系中各主要成分的最适浓度分别为10×Buffer(含Mg2+)2.0μL,DNA 20.0ng、0.30mmol.L-1 dNTP、引物0.35μmol.L-1、Taq DNA聚合酶为1.5U,引物(AC)8T的最佳退火温度为54.0℃。利用优化得到的体系对6份火龙果材料进行检验,结果表明优化后的体系适合火龙果的ISSR-PCR反应。     

椰子SSR反应体系的建立和优化

为摸索适宜椰子的SSR反应体系,分析了PCR反应体系中的Mg2 浓度、引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度对扩增结果的影响,建立了适合椰子的SSR反应体系。研究结果表明:在20μL反应体系中,Mg2 、引物和dNTP的最适浓度分别为2.5 mmol/L、0.3μmol/L、0.2 mmol/L;TaqDNA聚合酶的最佳使用量为1 U,模板DNA应加入50 ng,引物最佳退火温度比Tm值较小者低2~3℃。在参数优化的基础上,应用标记分析该反应体系对24个海南不同地区高种椰子样品进行SSR分析,不同样品间DNA谱带多态性丰富,本研究建立的分析体系将为今后椰子资源的SSR分析奠定良好的研究基础。     

平菇基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

应用SDS与β-SH乙醇结合的方法对平菇菌丝体、原基、菇蕾和成熟子实体4种材料的基因组DNA进行了提取,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,20 μL反应体系中,模板加入量为6～10 ng,引物加入量10 pmol,dNTPs(各2.5 mmol)加入量为1.5～2 μL,Taq酶加入量为0.5U,退火温度设置在略低于引物Tm值的范围.     

平菇液体菌种培养条件的优化研究

以培养温度、起始pH、最佳装液量、最佳培养时间为指标,采用4因素3水平正交试验,最终优选出的平菇液体菌种最适宜培养条件为温度24℃、起始pH 6.5、装液量240 L、培养时间3 d。发酵罐最佳配方为：玉米面2%、麸皮1.2%、红糖1%、磷酸二氢钾0.01%、硫酸镁0.005%、酵母膏0.25%。     

平菇栽培环境条件及病虫害防治

总结了平菇栽培环境条件,包括温度、湿度、空气、光线、酸碱度,并介绍了平菇栽培中的主要生理性病害、杂菌、害虫的防治措施及老菇房处理措施,以期为平菇高产高效栽培提供参考。     

平菇RAPD—PCR反应体系优化研究

以平菇黑丰268为试材,对RAPD—PCR反应体系的各项影响因素进行了优化,建立了平菇RAPD—PCR反应体系。结果表明,平菇RAPD—PCR最优体系为：20μl PCR反应体系中,Mg^2＋浓度为1．4mmol／L,模板DNA为50ng,引物浓度为0．6—0．8μmol／L,dNTPs浓度为250μmol／L,Taq酶为1．2U,10×Buffer2．0μl。     

平菇原生质体制备条件的研究

从综合酶种类、酶浓度、菌龄、酶解温度、酶解时间及稳渗剂等方面,探讨平菇原生质体制备的条件。     

一株野生平菇的鉴定及营养生长条件研究

利用ITS方法和进化树构建对1株自分离的野生侧耳属真菌进行了分析鉴定,通过单因素试验研究了影响该真菌菌丝生长的环境和营养条件.结果表明:经鉴定,该侧耳属真菌为平菇,宁强平菇菌株与其他平菇菌株亲缘关系远,自分离和选育的镇巴平菇和宁强平菇亲缘关系较远.该平菇菌丝生长的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为蛋白胨,生长的最佳pH在6.0～6.5,最适温度25℃,最佳碳氮比10:1.     

花生SRAP反应体系的建立与优化

[目的]为研究花生居群遗传多样性奠定基础。[方法]以汕油162和sunolicn 95R为模板对花生进行SRAP扩增,研究模板DNA浓度、Mg2+浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶的用量对SRAP扩增效果的影响,探索花生SRAP反应的最佳条件。[结果]在一定范围内,模板DNA含量和TaqDNA聚合酶的用量对花生SRAP扩增结果的影响较小。当Mg2+浓度为2.5 mmol/L时,扩增效果最佳。当Mg2+浓度逐渐降低时,扩增条带逐渐变弱。引物浓度为0.5 mmol/L时能够扩增出清晰、重复性好的条带。花生SRAP反应的最佳条件为:模板DNA含量为100 ng,Mg2+浓度为2.5 mmol/L,引物浓度为0.5 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量为1 U。[结论]与AFL P技术相比,该研究中所建立的花生SRAP反应体系更为简便和可靠。     

白灵菇胞外纤维素酶适宜作用条件的研究

[目的]研究白灵菇胞外纤维素酶的最适作用条件。[方法]利用纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖将3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的氨基化合物,利用分光光度计,在540nm波长下测定。[结果]白灵菇深层发酵产生的滤纸酶在反应时间为1h、温度55℃,pH值为5.0时酶活性较高;Cx酶在反应时间0.5h,温度45℃、pH值为4.5时比较适宜。[结论]该研究为进一步揭示白灵菇胞外酶的生化特性和遗传育种提供了依据。     

平菇AD28液体发酵培养的环境条件优化研究

采用摇瓶培养的方法,从营养源和发酵条件两方面对平菇AD28液体发酵的环境条件进行优化筛选试验。结果表明,液体发酵培养平菇AD28最适碳源为蔗糖,氮源为酵母粉,无机盐为KH2PO4和MgSO4。较适宜的培养条件:为初始pH值6.0~7.0,500 ml摇瓶装液量200 ml,接种量10%,接种后静置培养24 h后振荡培养,摇床转速为180 r/min,培养温度为25℃,发酵终点以120 h为宜。     

白灵菇深层发酵条件的优化

为了优化白灵菇深层发酵的条件,以菌丝生物量为指标,对碳源、氮源、初始pH、接种量、装液量进行单因素试验,结果表明160 r.min-125℃培养条件下,白灵菇最佳液体培养基配方为玉米淀粉4%、米糠5%、KH2PO40.3%、MgSO40.1%、VB110 mg.L-1,最佳装液量为70 mL(250 mL三角瓶),最佳接种量为20%,初始pH为7～8。正交试验结果表明,影响白灵菇液体培养的主次因素依次为接种量、碳源、氮源、初始pH和装液量。