空肠弯曲杆菌多酶脉冲场电泳基因分型研究

为提高脉冲场电泳(PFGE)技术对空场弯曲杆菌的分型效果,利用6种限制性内切酶对33株空肠弯曲杆菌进行了基因分型研究,结果发现,BamHⅠ是单酶中分型效果最好的一种限制性内切酶,结合KpnⅠ和SacII,可以提高PFGE在空肠弯曲杆菌基因分型中的效果.     

利用PCR技术检测鸡肉产品中的空肠弯曲杆菌

根据空肠弯曲杆菌旋转酶基因（gyrAgene）的保守序列,设计1对引物,建立了快速检测鸡肉中空肠弯曲杆菌的PCR方法。采用该方法和生化试验对送检的100份鸡肉样品进行检测,结果表明：PCR方法能特异性地扩增出空肠弯曲杆菌192bp核苷酸片段,其它结肠弯曲杆菌、肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、副溶血性弧菌、产气荚膜梭菌、绿脓假单胞菌等均不能获得阳性扩增结果。检测限度为8cfu／mL。鸡肉肉水、增菌液和纯培养菌落的PCR鉴定结果,阳性率分别为16％、24％和20％,生化鉴定检出率为20％。     

孔雀暴发空肠弯曲杆菌的诊治报告

孔雀弯曲杆菌病是由弯曲杆菌感染所引起的雏孔雀和成年孔雀的一种细菌性传染病.本病一般呈慢性经过,急性病例报道较少.2004年6月,郯城县某特种饲养专业户饲养的200羽30日龄左右雏蓝孔雀暴发了主要以腹水、肝脏肿大为特征的病例,据统计发病率为26.7%,死亡率9.8%.经临床观察、实验室诊断,最后确诊为空肠弯曲杆菌感染,并采取中、西医结合防治措施控制病情,现将诊断与治疗情况报告如下.     

猪空肠弯曲杆菌感染状况的地域差异性研究

对采自上海市五家生猪屠宰场（复新、裕农、五丰、中兰和爱森）的猪肝脏、盲肠样品的空肠弯曲杆菌进行了检测,这些屠宰场的猪分别来自河南、山东、江苏、安徽、浙江及上海等地区,从猪肝脏样品检测空肠弯曲杆菌感染阳性率来看,上海嘉定、南汇、奉贤,浙江嘉善和山东青岛显著低于其它地区,而江苏张家港和大丰感染阳性率较高;从盲肠内容物检测空肠弯曲杆菌感染阳性率来看,上海金山、嘉定、奉贤和浙江嘉善显著低于其他省市地区。由此可见,生猪的产地对其空肠弯曲杆菌的带菌状况有着较大的影响。     

猪链球菌2型PCR-ELISA检测方法的建立与优化

根据已发表的猪链球菌2型的cps2j基因序列,设计合成上游标记生物素的1对引物和1条标记地高辛的特异性探针,建立了该菌的PCR-ELISA检测方法。方法利用PCR仪作为杂交场所,并对几个主要条件参数进行优化,结果显示在鲑鱼精DNA浓度1.6mg·mL-1、变性温度为94℃、变性时间为1min、探针浓度为0.5umol·mL-1、杂交温度55℃、杂交时间1min、一抗作用时间45min、二抗作用时间40min时检测方法敏感性最好,特异性最强。通过对17个阴性样本检测,测得平均值为0.057,方差为0.047,计算得临界值为0.198。     

临床型空肠弯曲杆菌生物膜体外模型建立及相关特性研究

空肠弯曲杆菌是一种在世界范围内普遍存在的人畜共患病病原,生存条件严苛.研究发现,该菌在一定条件下可以形成一种能够抵抗外界环境不良影响生物膜,这也是该菌能够在恶劣环境中存活并产生耐药性的重要原因.文章选取临床分离空肠弯曲杆菌为研究对象,建立其生物膜体外模型,通过PCR、扫描电镜等一系列方法对空肠弯曲杆菌生物膜进行鉴定.正交试验法对培养基、温度以及空气条件三种因素对空肠弯曲杆菌生物膜形成影响进行研究.结果表明,体外生物膜形成最佳条件为MHB培养基、37℃和常规空气条件.     

宁德地区鸡场空肠弯曲杆菌调查与耐药性分析

为了解宁德地区鸡场中空肠弯曲杆菌的流行状况及耐药特征,于2018年9月在宁德地区部分鸡场随机采集100份鸡粪便样品,进行空肠弯曲杆菌的分离鉴定、多位点序列分型,随后采用微量肉汤稀释法检测分离菌株对9种抗生素的敏感性。结果显示,100份样品中共分离得到空肠弯曲杆菌23株,总体分离率为23.0%;23株空肠弯曲杆菌被分为14个序列型,其中优势序列型为ST354,同时鉴定出多个新的序列型;药敏检测结果显示,23株空肠弯曲杆菌对泰利霉素、阿奇霉素和克林霉素具有敏感性,对其他抗生素均产生不同程度的耐药,其中对萘啶酸、四环素和环丙沙星的耐药率分别高达91.3%、91.3%及87.0%;23株空肠弯曲杆菌均表现出至少1种耐药表型,且78.3%的菌株表现多重耐药性。以上结果反映出宁德地区鸡场空肠弯曲杆菌复杂的流行状况及严重的耐药性,相关研究结果为宁德地区空肠弯曲杆菌的流行监测及养殖场用药提供参考依据。     

犬源空肠弯曲杆菌的分离鉴定及药敏试验

空肠弯曲杆菌是一种分布十分广泛的人畜共患病原菌,能随粪便排出体外.本研究随机采集了病犬的血便8 份,进行该病原菌的分离、鉴定,结果分离到3株,检出率为37.5%.药敏试验显示该菌对头孢哌酮、头孢曲松、 庆大霉素、洛美沙星、氟哌酸敏感,对阿莫西林、头孢唑啉氨苄西林中等敏感,对复方新诺明、林可霉素等耐药.     

环纹奥斯特线虫PCR-ELISA快速检测方法的建立

【目的】建立高效、快速、灵敏、特异、准确的环纹奥斯特线虫检测方法。【方法】根据GenBank已发表的奥斯特线虫ITS-2的基因序列,对该上下游引物的5′端分别标记地高辛和生物素,按照PCR-ELISA的操作步骤对所用链霉亲和素的包被浓度、BSA封闭液的封闭浓度、PCR产物的作用时间、酶标二抗的工作稀释浓度以及作用时间、显色时间等进行优化,进而确定反应的最佳条件;以环纹奥斯特线虫、东方毛圆线虫、捻转血矛线虫、羊仰口线虫、甘肃食道口线虫的DNA为模板,在最佳反应条件下进行PCR-ELISA检测其特异性;批内和批间重复性试验检测其稳定性。【结果】建立的环纹奥斯特线虫PCR-ELISA快速检测方法的敏感性比常规PCR高10倍,和其他线虫无交叉反应,特异性强,变异系数小于10%,稳定性好。【结论】建立的高效、快速、特异、安全的Ostertagia circumcincta间隔区ITS-2检测方法,可以为进一步研制用于Ostertagia circumcincta的流行病学调查、诊断试剂提供技术支撑。     

临床型空肠弯曲杆菌生物膜体外模型建立及相关特性研究

空肠弯曲杆菌是一种在世界范围内普遍存在的人畜共患病病原,生存条件严苛。研究发现,该菌在一定条件下可以形成一种能够抵抗外界环境不良影响生物膜,这也是该菌能够在恶劣环境中存活并产生耐药性的重要原因。文章选取临床分离空肠弯曲杆菌为研究对象,建立其生物膜体外模型,通过PCR、扫描电镜等一系列方法对空肠弯曲杆菌生物膜进行鉴定。正交试验法对培养基、温度以及空气条件三种因素对空肠弯曲杆菌生物膜形成影响进行研究。结果表明,体外生物膜形成最佳条件为MHB培养基、37℃和常规空气条件。     

应用DNA环介导恒温扩增技术快速检测空肠弯曲菌

【目的】空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病致病菌,主要经被污染的水源、乳制品、生禽肉进行传播,建立快速、准确的诊断方法是防控空肠弯曲菌感染的重要措施。【方法】本文引入一种新型的核酸检测技术--DNA环介导恒温扩增 (loop-mediated isothermal amplification, LAMP),以空肠弯曲菌ORF-C序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌LAMP快速检测方法。【结果】利用本LAMP方法对21种病原菌进行检测,仅空肠弯曲菌为阳性结果,说明该方法具有高度的特异性。该LAMP方法对空肠弯曲菌纯培养菌的检测灵敏度达6CFU/反应管,对污染材料中空肠弯曲菌的检测灵敏度为9CFU/反应管。【结论】本研究建立的空肠弯曲菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。      

斑点叉尾(鲴)疱疹病毒PCR-ELISA检测方法的建立

针对斑点叉尾鲴疱疹病毒(CAV)的ORF6基因设计引物和探针,PCR产物在扩增过程中标记地高辛,探针5'端用生物素标记,建立了CCV的敏感、快速、环保的PCR-ELISA检测方法.对反应条件进行了优化,并评估了该方法的特异性和敏感性.结果表明:该方法可特异性检测CCV DNA,与各对照均无交叉反应,具有高度特异性;该方法对CCV DNA的检测阈值为5 fg,敏感性是常规PCR检测方法的10倍.用此方法对人工感染样品进行检测,能够检测到感染组织中的CCV DNA.该方法能够定性和半定量检测CCV DNA,可用于斑点叉尾(鲴)疱疹病毒的检测、斑点叉尾(鲒)暴发性流行病的诊断.     

空肠弯曲菌flaA基因序列及功能预测分析

[目的]对空肠弯曲菌空肠弯曲菌flaA基因的序列及功能进行预测分析。[方法]分析了多个空肠弯曲菌flaA核酸及氨基酸序列组成和序列差异性;预测分析了flaA基因密码子使用偏好性、蛋白结构和功能域、Fla A与相关功能蛋白的互作情况。[结果]不同菌株的flaA基因序列存在差异性,且差异主要存在于序列的中间区域。不同空肠弯曲菌菌株的同一基因在密码子选择上存在差异。Fla A与多个蛋白存在不同形式的相互作用。[结论]该研究可为空肠弯曲菌flaA基因序列分析和功能研究应用提供基础和依据。     

温度和培养基对空肠弯曲菌冻融耐受性的影响

比较了１５株不同动物来源的空肠弯曲菌的冻融耐受性，结果表明，不同动物来源的菌株间冻融耐受性差异极显著（Ｐ＜０．０１），但与其来源动物不相关．并分析了—１０℃～３７℃、—２５℃～３７℃两种冻融温度和ＦＭＰＧ、Ｐ—基、ＭＳＧ、布氏半固体４种培养基对该菌冻融耐受性的影响，认为温度与培养基间存在极显著的互作现象（Ｐ＜０．０１），４种培养基对该菌耐受性的影响差异极显著，其中以ＦＭＰＧ和Ｐ—基对该菌冻融耐受性的增强效果最佳（６６．２％和６３．９％），ＭＳＧ的效果中等（５２．５％），布氏半固体最差（３１．２％）。在—１０℃～３７℃下，以Ｐ—基最优（６２．７％）．在—２５℃～３７℃下，以ＦＭＰＧ最优（７０．２％）．对ＭＳＧ而言，—１０℃～３７℃下（５９．６％）优于—２５℃～３７℃温度下（４５．３％）。     

弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用

以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。     

蛋鸡和鲜蛋空肠弯曲菌带菌状况的研究

对420只蛋鸡和200枚鲜蛋进行了空肠弯曲菌检查。结果表明,蛋鸡平均带菌率为66.2％,在43～46用龄时带菌率最低(34.0％),26～28周龄时带菌率最高(92.0％),19～20周龄时带菌率居中(45.3％),差异极显著(P<0.01)。在200枚鲜蛋中未检出空肠弯曲菌。对15只空肠弯曲菌阳性蛋鸡进行该菌在体内分布的研究表明,十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠和泄殖腔为空肠弯曲菌的主要栖居场所,在咽喉、腺胃、卵巢和输卵管内也有该菌检出,而在嗉囊中未检出该菌。同时,对蛋清抑制空肠弯曲菌的平板试验显示,蛋清没有抑菌作用。本文并对空肠弯曲菌在鸡体的垂直传播途径进行了讨论,认为空肠弯曲菌不经鲜蛋而垂直传播于仔鸡。     

空肠弯杆菌研究现状

空肠弯杆菌是一种人兽共同感染的病原菌,也是导致腹泻最常见的病菌,主要症状是发热和急性肠炎。主要从病原的生物学特征、肠毒素的研究、人畜带菌率及流行病学的研究现状进行综合讨论。     

禽肉弯曲菌污染分析及冷藏条件下失活动力学特征

为了解空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)和结肠弯曲菌(Campylobacter coli)在浙江省肉鸡产业链中的污染状况,及其冷藏过程中的失活特征。研究采用多重PCR方法对肉鸡养殖、屠宰和销售环节中分别采集的肛拭子、屠宰场环境和鸡肉等样品进行检测,平板计数法对人工污染鸡肉进行活菌数检测,用于失活特征分析。结果显示,采集的样品中,C. jejuni和C. coli的检出率分别为45.3%(182/402)和4.9%(20/402);其中,养殖环节中的检出率分别为81.2%(65/80)和0,屠宰环节中的检出率分别为30.5%(48/157)和5.1%(8/157),销售环节中的检出率分别为41.8%(69/165)和7.3%(12/165)。在6℃冷藏条件下,鸡肉中的C. jejuni和C. coli失活曲线具有相似的特征,在30 d贮藏期内,lg cfu分别下降了1.98和2.19;其中,0~14 d细菌数量下降速度较快,14~30 d细菌数量下降较为平缓。Log-logistic模型相比于Weibull模型对2种细菌的失活曲线有较好的拟合性。上述研究表明,肉鸡养殖、屠宰和销售环节中均存在着一定程度的空肠弯曲菌和结肠弯曲菌污染,其中,销售环节中检出率高于屠宰环节;在6 ℃冷藏条件下,Log-logistic方程作为2种菌的一级预测生长模型具有较好的拟合性。     

经济动物的空肠弯曲菌带菌调查和细菌分离培养研究

本文对伊沙褐蛋鸡、乌骨鸡、锦鸡、蓝马鸡及银黑狐等动物的空肠弯曲菌带菌率进行了调查,其结果分别为66.19％、13.33％、20％、10％和6.19％。同对对微需氧培养方法和培养时间、TTC琼脂平板、蛋鸡采样时机、样品运送以及增菌培养等一系列影响检出率的因素进行了研究。结果认为该菌微需氧培养时间以48小时为宜;TTC琼脂平板不宜做该菌的初次分离培养;产蛋前采样要比产蛋后采样的检出率高,差异极显著(P<0.01);样品运送时间、Cary-Blair运送培养基以及增菌培养等对检出率影响不显著(P>0.05),但同一样品的重复分离培养,明显提高了该菌的检出率。