木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯

[目的]为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供必要的技术支持。[方法]由高产几丁质酶的木霉菌株YHS-1液体振荡培养得到木霉几丁质酶粗酶液,分别测定了木霉菌株YHS-1在不同时间、不同温度下的几丁质酶活值,优化木霉产酶条件。并研究了几丁寡糖的制备及提纯方法。[结果]供试木霉最佳产酶温度为35℃,最佳产酶时间为4 d,此时酶活值为55 U。几丁质酶粗酶液通过(NH4)2SO4分级沉淀、阴离子交换柱层析、SDS-PAGE提纯后可以达到层析纯,出现单一并且峰值很高的层析峰,电泳确认2条带,分别为几丁质外切酶和几丁质内切酶。几丁寡糖用初提纯的几丁质酶与过量的胶态几丁质反应得到粗溶液,再经过蛋白质沉淀和冷冻离心后得到纯化。[结论]建立了木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯方法,为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供了必要的技术支持。     

黄绿木霉菌菌株产几丁质酶发酵条件的研究

[目的]研究黄绿木霉菌（Trichoderma aureoviride sp.）产几丁质酶的最佳发酵条件,为几丁质酶工业提供新酶源。[方法]采用正交试验设计,以DNS法测定酶解后糖含量变化为指标,对发酵条件进行优化。[结果]在以2%胶体几丁质为碳源、2%蛋白胨为氮源、摇床转速为170 r/min时,黄绿木霉菌产几丁质酶的最佳发酵条件组合：培养基的初始pH为5,接种量为8%,瓶装量为20 ml,在28℃下培养6 d。[结论]试验确定了黄绿木霉菌产几丁质酶最佳条件,为其在工业生产中的应用奠定了基础。     

产几丁质酶木霉生防菌株的生化测定

以烟草赤星病的CA原真菌链格孢（Alternaria alternata）为实验菌株，通过对峙平板拮抗实验和胶体几丁质平板透明圈实验测定木霉菌株（Trichoderma harziaum）THS-1对病原真菌的拮抗作用，结合DNS法进行定量检测木霉菌株发酵产生几丁质酶的活性。上述方法的结合可以筛选出产几丁质酶高效木霉生防菌株。     

淡紫拟青霉产几丁质酶发酵条件的优化

[目的]优化淡紫拟青霉产几丁质酶的发酵条件。[方法]通过单图素试验和正交试验研究了淡紫拟青霉菌产几丁质酶的最适发酵条件。[结果]淡紫拟青霉菌在装液量80ml／250ml、接种量12％、初始pH6．0,培养潺度28℃及180r/min的条件下培养4d,发酵液中的几丁质酶活性达到最高,为O．115U／ml.[结论]为几丁质酶的进一步研究开发提供了理论依据。     

哈茨木霉H-13液体发酵产几丁质酶的条件

文中以产几丁质酶的哈茨木霉H-13为实验菌株,在相同基本培养基上,采用每次同一浓度不同碳源,同一碳源不同氮源浓度;相同浓度碳源和氮源,不同pH、温度对木霉产几丁质酶能力的影响,筛选出产几丁质酶的最佳因子,提高木霉产几丁质酶发酵的效果,促进该项发酵产品的产业化。     

几丁质诱导球孢白僵菌产酶及杀虫作用研究

利用胶态几丁质诱导培养基液体发酵球孢白僵菌Bz4菌株,通过比色法测定发酵液中寡糖、几丁质酶的变化情况,并应用浸渍法测定其产生的孢子悬液对粘虫的致死能力,明确白僵菌Bz4菌株的应用价值。结果表明:球孢白僵菌Bz4菌株在供试的不同胶态几丁质浓度液体培养基中,均以培养5d时产生的氨基寡糖量最高,而培养6d时几丁质酶活力最大。利用几丁质培养基中制得的孢子悬液对粘虫幼虫具有较强的致死作用,致死中浓度约为1.04×10~5个·mL~(-1),其致死中时间为6~7d。     

发酵条件对木霉菌株T23的菌丝生长及几丁质酶活性的影响

为使木霉生防制剂实现工业化生产,本试验对木霉菌株T23的最适菌丝生长和最佳产几丁质酶的发酵条件进行了研究。试验结果得出T23的最佳发酵条件以PDB为培养基,在250mL三角瓶中50mL装瓶量,接种量为6%,起始pH值为5,温度25℃离心机转速180r.min-1,培养4d,发酵液中菌丝产量和几丁质酶活分别达到10.64g.L-1和421.3U.mL-1。     

β-1,3-葡聚糖酶产生菌的筛选及其产酶条件

为了制备β-1,3-葡聚糖酶,从土样中筛选出一株产β-1,3-葡聚糖酶活力较高的菌株LE02,经形态学观察,初步鉴定为木霉菌．木霉LE02在以2％的酵母粉为主的液体产酶培养基（起始pH7．0）中,于32℃,150r／min摇瓶培养60h达到产酶高峰,酶活力可达71．09U／mL．     

哈茨木霉高产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究

通过氮离子注入法诱变哈茨木霉(Trichoderma harzianum)野生菌,再以透明圈法对平板培养菌进行筛选,用DNS法测定液体培养菌的酶活,从中筛选出1株产几丁质酶能力高的哈茨木霉菌株H-13,并通过单因素试验和正交试验优化该目标菌株的发酵条件.单因素试验结果表明,添加1.0%蛋白胨时产酶量最高,1.0%胶体几丁质对菌体产几丁质酶的诱导性最强,初始pH 5.5、培养96 h时产酶量较高.正交试验表明,H-13以1.0%蛋白胨为氮源、0.5%胶体几丁质为碳源,在初始pH 5.0的培养基中培养96 h时,发酵液中的几丁质酶活可达到731.69 U?mL-1,比同样条件下的野生菌株酶活力提高1倍.     

木霉生防耐药因子的诱导及其生化特性研究

为了研究以含药(施佳乐)培养基筛选和诱导生防木霉菌株T-21产生耐药性生防蛋白因子———几丁质酶的效果。利用含药(施佳乐)培养基筛选诱导生防木霉菌株T-21产生几丁质酶,通过DEAE 32纤维素柱层析法进行分离纯化,用SDS-PAGE测定其分子量,并分析温度和pH值对酶活力的影响以及耐药酶对灰霉菌的抑制作用。生防木霉菌株T-21对化学农药施佳乐具有一定的抗性,浓度达1 000μg/ml时生长及产孢情况良好。通过分离纯化的几丁质酶,其分子量为45 kD,其最适反应温度为50℃,最适pH值为5.0,对灰霉菌有明显抑制作用。生防木霉菌株T-21产生的几丁质酶,可与化学杀菌剂混合使用,以增强田间的防治效果、减少化学农药的用量,进而减少化学农药对农作物的污染及残留。