鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

[目的]研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺。[方法]采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离三种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测其纯度。[结果]层析纯化后 SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76%;卵转铁蛋白抑菌率为48.84%。[结论]该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白,工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产。     

鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺.采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离3种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其纯度.结果显示,层析纯化后SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2 235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76％;卵转铁蛋白抑菌率为48.84％.该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产.     

鸡蛋清中溶菌酶的分离提取

采用二次硫酸铵沉淀和离子交换层析透过法分离溶菌酶,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS\|PAGE）检测其纯度,研究鸡蛋清中溶菌酶的分离提取工艺。鸡蛋清原液用Tris\|HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置6 h,经50%硫酸铵沉淀后收集上清,再经80%硫酸铵收集沉淀后溶于pH 90的Tris\|HCl后经Q\|Sepharose FF阴离子交换层析直接在透过液中一步就可分离得到SDS\|PAGE电泳纯的溶菌酶,酶比活由14413 U·mg-1提高到2 235 U·mg-1,酶活提高超过15倍,回收率为1576%。通过硫酸铵两级沉淀后只需收集Q\|Sepharose FF阴离子交换层析的透过液即可分离得到溶菌酶,同时还可一次性制备其他中性和酸性蛋白,简化了工艺,降低了生产成本。     

盐析法快速分离鸡蛋清卵白蛋白

鸡蛋清原液用pH值9.0的Tris-HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置至少6h,采用30％～ 80％不同饱和度的硫酸铵分离卵白蛋白,采用Bradford法测定盐析后蛋白含量,SDS-PAGE检测其纯度,结果表明,60％饱和度的硫酸铵分离鸡蛋清卵白蛋白效果较好.     

毕赤酵母工程菌原果胶酶的分离纯化

采用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等方法,对毕赤酵母工程菌发酵液中的原果胶酶进行了分离纯化,测定了其分子质量,并确定了离子交换层析法的最佳离子交换条件。结果表明,硫酸铵的饱和度为70%时,可以使原果胶酶的回收率达到71.9%,比活力为1 096.35 U/m g;经Sephadex G 75凝胶过滤,原果胶酶回收率达到57.6%,酶的比活力提高到3 762.40 U/m g;最佳离子交换条件为:0~0.5 m o l/L N aC l(缓冲体系为N oA c-HA c,pH 5.8)溶液线性洗脱、Sepharose F ast F low离子交换层析分离,在该条件下酶的比活力提高到9 743.20 U/m g,纯度为粗酶液的18.91倍,达到了电泳级;SDS-PAGE电泳结果表明,其分子质量为43.17 ku。     

鸡肌球蛋白质的提取方法优化研究

本研究对肌球蛋白质的提取方法进行了优化,并利用SDS-PAGE对其进行鉴定.结果表明,肌球蛋白质的提取率在1%左右,增加肌动球蛋白质的沉淀次数有利于提高肌球蛋白质的纯度,最高纯度约100%;硫酸铵分级沉淀中硫酸铵饱和度采用35%~48%时,肌球蛋白质的提取纯度较高.     

DFRKN-1碱性磷酸酶的纯化研究

以根结线虫天敌1号分离物为提取碱性磷酸酶的材料,菌体经液氮研磨破碎后,用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀分离,透析获得酶的粗提取液.再经过DEAE-52离子交换和SephadexG-150分子筛两步层析得到纯化倍数为27.17、比活力达10 514U/mg的碱性磷酸酶.     

女贞果实过氧化物酶的纯化及热稳定性研究

为探讨过氧化物酶在女贞果实发育中的作用,经过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100、DEAE-纤维素离子交换层析分离,从女贞果实中分离提纯过氧化物酶(POD),纯化倍数为48倍,回收率为13.3%。该酶的比活力为1 167.15 U/mg蛋白,最适pH为6.5,对H2O2的Km值为3.85 mmol/L,对愈创木酚的Km值为6.2 mmol/L,最适温度为40℃,热稳定性较好,55℃以下不易失活。其活性受到MnSO4明显抑制。     

草鱼肠道胰蛋白酶(GT-A)的纯化及其部分理化性质初探

为了充分探讨草鱼内脏的利用途径并深入了解草鱼消化生理学,将草鱼肠道用冰丙酮脱脂,用磷酸盐缓冲溶液提取,然后经过硫酸铵分级沉淀,再经过离子交换层析、凝胶过滤层析等纯化,分离得到一种碱性蛋白酶,并对其部分理化性质进行了检测。结果表明,该酶是一种胰蛋白酶(GT-A),其相对分子质量为30.75 ku;其最适温度为40℃,最适pH为8.0,在pH 6.0~10.0保持稳定,在65℃加热20 min其活性丧失95%。表明草鱼肠道中含有在低温下能很好发挥水解作用的胰蛋白酶。     

低温β-半乳糖苷酶的分离纯化

[目的]分离纯化低温β-半乳糖苷酶。[方法]采用硫酸铵沉淀、凝胶色谱和离子交换色谱对低温菌株Rahnella aquatilis sp.14-1在摇瓶条件下的所产低温β-半乳糖苷酶进行了纯化,并对提纯的酶进行了酶学性质的研究。[结果]摇瓶发酵液经过超声波破碎细胞得到粗酶液体,用硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-25凝胶层析和DEAE-cellulose离子交换色谱分离纯化得到低温β-半乳糖苷酶,用SDSPAGE检测显示电泳单一区带,纯化的酶分子量为60 kD。[结论]研究可为低温β-半乳糖苷酶的开发应用提供参考依据。     

鲶鱼体表黏液IgM的分离纯化及其抑菌活性研究

依次采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析法从鲶鱼体表黏液中分离纯化IgM,并对其抑菌活性进行了检测.通过试验可以得出,凝胶层析的最佳分离条件为:0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液、洗脱速度为0.3 mL/min.鲶鱼体表黏液中提取的IgM对大肠杆菌抑菌作用最强,其次是枯草芽孢杆菌,对藤黄微球菌抑菌效果最不明显.在低温贮存时温度控制在0～4℃,有助于保持其抑菌活性,但随着时间的延长,抑菌活性也会逐渐减弱.     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

用柱层析法检测中国龙虾主要变应原的研究

为分离、纯化和鉴定中国龙虾的主要变应原,采用硫酸铵沉淀法和等电点沉淀法对变应原粗浸液进行初分,在蛋白核酸检测仪检测控制下,用DEAE-52离子交换层析柱进行阶段洗脱和葡聚糖凝胶G-100柱层析,斑点ELISA确定其免疫活性.结果表明:中国龙虾变应原蛋白的硫酸铵沉淀范围在35％～60％之间,pH等于4.7、4.5时的等电点沉淀蛋白质有明显的变应原活性;离子交换层析中具变应原活性蛋白质峰含分子质量为15000、20 700、34 000、60 000、83 200 u的蛋白质;葡聚糖凝胶G-100层析后具变应原活性蛋白峰SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示只有34000 u相对分子质量的蛋白条带,纯度为91.5％.本试验分离、纯化鉴定出中国龙虾相对分子质量为34000 u的主要变应原,对于变应原的标准化、提高食物变态反应性疾病诊断和治疗水平具重要意义.     

茶树多酚氧化酶同工酶的分离纯化

以龙井43号茶树鲜叶为材料,通过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对茶树多酚氧化酶同工酶进行分离纯化,最终分离出1个单一同工酶(PPO V),该同工酶亚基大小约为80ku。     

西瓜枯萎病生防菌XG-1拮抗蛋白的分离纯化(英文)

[目的]分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株XG-1的抗西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp niveum FON)的拮抗蛋白。[方法]通过硫酸铵分级沉淀获得粗蛋白,采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱和Sephacryl S-100凝胶柱层析进行分离纯化,对具抗西瓜枯萎病菌的蛋白纯进行MALDI-TOF-MS结构分析。[结果]该拮抗蛋白与来源于枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的鞭毛蛋白(gi|14278900)同源性较高,蛋白分值为248,覆盖率为63%,推测该拮抗蛋白可能是菌株XG-1的一种鞭毛蛋白,分子量约为30.6kD。[结论]该研究为阐明生防菌XG-1的作用机理提供理论依据,为西瓜枯萎病的防治提供重要的参考。     

2种阴离子交换柱对α-葡萄糖苷酶的分离纯化效果

【目的】比较Q-Sepharose Fast Flow和DE-52 2种阴离子交换柱对1株脂环酸芽孢杆菌Alicycloba-cillus contaminans发酵产生的α-葡萄糖苷酶的分离纯化效果,为α-葡萄糖苷酶的规模化生产提供技术支持。【方法】采用硫酸铵分级沉淀法对发酵液中的蛋白质进行沉淀,以分离纯化后的蛋白质含量和酶活为指标,对2种阴离子交换柱的分离纯化效果进行评价。【结果】经过Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱分离得到的α-葡萄糖苷酶有1个酶活吸收峰,最大酶活为6.99×103 U,在这个吸收峰内蛋白质的含量稳定在26.25μg/mL左右;经过DE-52阴离子交换层析柱分离,α-葡萄糖苷酶的酶活范围较大,最大酶活为5.56×103 U,在酶活吸收峰内,蛋白质含量为21.25～232.5μg/mL,变化范围较大。【结论】Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱对α-葡萄糖苷酶的分离效果优于DE-52层析柱。     

人参水溶性蛋白的纯化工艺研究

为研究人参中几种水溶性蛋白的提取纯化工艺,采用中性缓冲液抽提和硫酸铵分级沉淀法提取人参总蛋白,应用超滤、亲和层析、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法进行分离、纯化,得到5种水溶性人参蛋白。经SDS-PAGE电泳和高效凝胶过滤色谱分析,其分子量分别为65.8,65.5,24.7,15.1,7.6 kD。研究结果表明,本试验所确定的人参水溶性蛋白纯化工艺路线简便、可行。     

产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化

提取精氨酸脱亚胺酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀法初步分离精氨酸脱亚胺酶,然后通过DEAESephadex A 50柱色谱层析和Sephadex G-100柱色谱层析进一步分离纯化精氨酸脱亚胺酶,并利用SDS-PAGE电泳法来鉴定其纯度,最终达到纯化产碱假单胞菌来源的精氨酸脱亚胺酶(ADI)的目的。结果表明:分离纯化过程中,粗酶液的总酶活为424.43 U,比酶活为0.42 U·mg~(-1);盐析透析酶液的总酶活是222.10 U,比酶活为2.05 U·mg~(-1);离子交换分析活性部位的总酶活为105.83 U,比酶活是5.61 U·mg~(-1);凝胶渗透分析活性部位的总酶活为17.94 U,比酶活为11.80 U·mg~(-1)。纯化得到了电泳纯级别的ADI,其相对纯度为96%。因此,本研究方法可以得到较高纯度和酶活的精氨酸脱亚胺酶。     

紫花芸豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化

[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝胶过滤法测定其表观分子量约为59kD。SDS电泳结果显示它有3个亚基,分子量分别为34、16、15kD。等电聚焦法测定其等电点为5．25。动力学的方法检测PVTT与胰蛋白酶发生不可逆抑制作用。[结论]离子交换层析和凝胶过滤层析法能快速地分离纯化紫花芸豆中的胰蛋白酶抑制剂。     

梅花鹿鹿茸蛋白聚糖的提取与分离

探讨梅花鹿（Cervus nippon）鲜鹿茸中蛋白聚糖的提取与分离方法，为深入研究和开发利用鹿茸提供了理论基础。采用Tris-HCl缓冲液匀浆提取梅花鹿鲜鹿茸，将粗提液上DEAE Sepharose FF离子交换柱，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分离组分。结果表明提取液中总蛋白聚糖含量为6．69mg／g；DEAE Sepharose FF离子交换层析收集到三个蛋白聚糖组分I、Ⅱ、Ⅲ，其蛋白聚糖含量分别占总蛋白聚糖含量的45．25％、25．15％、18．26％；聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝和甲苯胺蓝染色均着色，蛋白聚糖I核心蛋白分子量大约为40kD，甲苯胺蓝染色显示3条单一宽带。DEAE Sepharose FF阴离子交换层析能用于梅花鹿鲜鹿茸中蛋白聚糖的分离，且此法快速简便。