类固醇激素对牛输卵管上皮细胞分泌的调节及其分泌物对小鼠胚…

模拟发情期（０～６ｄ）母牛外周血浆雌激素和孕酮变化水平，在添加相应水平１７β雌二醇和孕酮的ＴＣＭ－１９９液中，培养间情期牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ），５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＢＯＥＣ分泌物，发现上皮细胞受类固醇激素作用分泌的２类蛋白质分子量与自然发情期（０～６ｄ）分泌的特异蛋白相似。证明类固醇激素可以调节和启动间情期ＢＯＥＣ的分泌活动，当雌二醇浓度高达１ｍｇ／Ｌ时，即使不加孕酮，ＢＯＥＣ仍能分泌这     

牛输卵管上皮对小鼠胚胎发育的影响

模拟发情期（0～6 d）母牛外周血雌激素和孕酮浓度的变化，添加17β-雌二醇和孕酮至TCM-199中，体外培养间情期牛输卵管上皮细胞（BOECs），同时观察了BOECs分泌蛋白（BOEP）、发情期母牛输卵管冲洗蛋白（BOP）和小牛输卵管冲洗蛋白（COP）对小鼠胚胎发育的影响。结果表明：①类固醇激素可以调节和启动体外培养的间情期牛输卵管上皮细胞的分泌活动；②BOEP比BOP和COP能极显著地促进胚胎的分裂和发育（Ｐ<0.001）；③与对照组（未添加外源蛋白质，只添加胎牛血清）相比，BOEP的囊胚形成率极显著低于对照组（Ｐ<0.01），可能是缺乏某些分子量低于10 kD蛋白因子的协同作用，同时30～56kD分泌蛋白的存在，也可能参与了抑制和阻碍胚胎分裂和发育的过程。     

类固醇激素对牛输卵管上皮细胞特异性糖蛋白基因表达作用的研究

模拟发情期母牛体内类固醇激素水平，在培养乏情期母牛输卵管上皮细胞的体系中添加雌二醇(E2)、孕酮(P)和血小板激活因子(platelet activating factor，PAF)，以诱导细胞的分泌作用。借助Northern的斑点杂交技术分析输卵管上皮特异性糖蛋白(OGP)基因RNA水平，研究激素及生长因子对体外培养的乏情期母牛输卵管上皮细胞分泌OGP的影响。结果显示：E2、P和PAF可以促进乏情期母牛输卵管上皮细胞OGP基因的表达。     

外源激素对间情期毕格犬发情及妊娠的影响

给６只间情期雌性毕格犬注射外源激素雌酮（Ｅ１）、孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）、人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和雌二醇（Ｅ２），结果有５只犬发情，３只受孕，产仔１４只。发情前期、发情期与自然发情犬无明显差别。发情犬血浆ＬＨ高峰出现在阴门见有血样分泌物后（１１．６±１．６）ｄ；在ＬＨ高峰期血浆孕酮（Ｐ４）明显升高，其后１２ｄ，Ｐ４含量达峰值；８０％阴道上皮细胞角化后（６．４０±０．６８）ｄ出现ＬＨ峰     

牛体外受精胚胎一步脱防冻剂冷冻方法的研究

为了研究适合于牛体外受精胚胎的一步除防冻剂的冷冻方法，特进行两个试验。试验１分别用１．５Ｍ甘油＋０．２５Ｍ蔗糖、１．５Ｍ乙二醇和１．５Ｍ丙二醇作防冻剂冷冻体外受精后第７天，已发育至囊胚阶段的牛胚胎。使胚胎降温至－７℃后，植冰，然后以０．３℃／分的速率降温至－３０℃，立即将胚胎投入液氮中冷冻保存。在３７℃水中解冻胚胎后，使其直接在含１５％胎犊血清（ＦＣＳ）的磷酸缓冲液（ＰＢＳ）中脱去防冻剂。经体外培养７２ｈ后，３组胚胎的孵化率分别为７７．２７％（１０２／１３２）、７３．２４％（１０４／１４２）、４７．９０％（５７／１１９），第１、２组的孵化率极显著高于第３组（Ｐ＜０．０１），说明用１．５Ｍ丙二醇溶液冷冻的胚胎，在解冻后不宜直接在ＰＢＳ中脱防冻剂。试验２比较用不同浓度（１．０Ｍ０１．５Ｍ，２．０Ｍ）的乙二醇和不同投液氮温度（－２５℃，－３０℃，－３５℃）冷冻胚胎的效果。结果表明乙二醇浓度和投液氮温度对胚胎孵化率均无显著影响（Ｐ＞０．０５），各组胚胎的孵化率变动于７４．４４％－８５．４８％之间。     

有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有     

^60CO—γ射线辐照和高压熏蒸对SPF鸡饲料营养成分的影响

采用３．０Ｍｒａｄ＾６０ＣＯ－γ射线辐照和高压熏（１２１℃，２０ｍｉｎ）ＳＰＦ鸡饲料，并对处理后中料营养成分于试验后７天进行分析，辐照后７天粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为１．１、４．４、２．３、５．３、５．０、６．７、１０．０、０、０、０、。辐射后ＶＢ６、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为９．７、１１．５     

口蹄疫病毒适应于细胞培养的研究

将不同型（Ｏ，ＡｓｉａＩ）系（免系和鼠系）和不同代次的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）适应于ＢＨＫ２１细胞培养物。兔化Ｏ型毒传至第１５代即产生明显的细胞病变（ＣＰＥ）ＴＣＩＤ５０可达７．０～７．６；兔化ＡｓｉａＩ需传２０代以上才能产生ＣＰＥ．ＴＣＩＤ５０为６．０～６．５。     

动物食欲调节的中枢信号通路

下丘脑是动物食欲调节的中枢，外周食欲信号在下丘脑中经食欲调节网络整合，产生饱感或饥饿。其中，以 ５′－磷酸腺苷激活的蛋白激酶（ＡＭＰＫ）调控位点上的 ＡＭＰＫ-ＡＣＣ-ＣＰＴ１和 ＵＣＰ２-ＦＯＸＯ１-ｐＣＲＥＢ信号通路以及雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）调控位点上的 ＰＩ３Ｋ-Ａｋｔ-ｍＴＯＲ和 ｍＴＯＲ-４ＥＢＰ１／ｐ７０Ｓ６Ｋ-ＮＰＹ／ＡｇＲＰ信号通路尤为重要。ＡＭＰＫ和 ｍＴＯＲ在 ＡＭＰＫ-ＴＳＣ ｍＴＯＲ通路、固醇类调节因子绑定蛋白（ＳＲＥＢＰ）基因表达和吞噬启动激酶（Ｕｌｋ１）活性通路上存在互作。外周营养和能量信号传输到下丘脑后，经过这些网络的传输和分析，作用于下丘脑中的食欲相关肽，最终调控动物的采食行为。     

锌对离体boPBMC的增殖和分泌Ig的促进作用

应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＥＬＩＳＡ测定了锌和其它微量元素对离体ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌免疫球蛋白（Ｉｇ）的影响。结果表明，０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ的锌能促进ｂｏＰＢＭＣ增殖（Ｐ〈０．０５）和分泌Ｉｇ（ＩｇＧ１，Ｐ〈０．０５：ＩｇＭ，Ｐ〈０．０１）；其它微量元素，诸如镍，铜，铁，镉等均无这种作用。此外锌对培养２ｄ后的细胞不表现出促进作用的结果表明，锌主要作用于免疫细胞被活化的初始阶段，提高了细胞的增殖和分     

两种方法对牛体外受精及体外发育的影响

本研究包括２个试验。试验１，采用由多种大分子物质组成的生物试剂Ｐｅｒｃｏｌ做成离心梯度，离心处理精液获得较高活率的精子。将其用于卵母细胞的体外受精，在使用４５μＬ大小的受精滴及２×１０６个／ｍＬ的最终受精精子浓度时，加入２０个或４０个卵母细胞，二者均获得较高的分裂率（％）８９．０±５．０、８８．１±３．８及囊胚率（％）５１．０±７．０、４６．３±１６．７。试验２，为了更接近胚胎在母牛体内发育的实际状态（动态），采用一种新的方法即将摇床振动培养引入牛早期胚胎的体外发育阶段，以期提高胚胎发育质量。结果表明，在早期胚胎基数及环境因素完全一致的前提下，振动培养组的囊胚发育率（％）及囊胚卵化率（％）分别为６１．１±１２．２、８２．６±６．８，而常规的静置培养组为６７．４±６．３、８８．０±７．４，方差计算表明二者无显著差异（Ｐ＞０．０５）。     

Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响

本研究的目的是探讨Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响.体外成熟的水牛卵母细胞经体外受精或离子霉素孤雌激活后.分别在舍0,0.5,5,50和500 μg/L Ghrelin的培养液中进行体外培养,观察各组胚胎的卵裂率和囊胚率.结果显示,在培养液中添加不同浓度的Ghrelin对体外受精和孤雌激活胚胎的卵裂率均无显著影响(P>0.05),但添加500 μg/L的Ghrelin显著提高体外受精胚胎的囊胚发育率(33.5% vs 13.7%,P<0.05),50 μg/L或500 μg/L的Ghrelin均显著提高孤雌激活胚胎的囊胚发育率(32.4%和34.6% vs 14.5%,P<0.05).结果表明,培养液中添加Ghrelin对胚胎的早期卵裂没有影响,但可促进水牛体外受精和孤雌激活胚胎囊胚的形成.     

体外培养条件对延边黄牛受精卵体外发育的影响

从延边黄牛卵巢中采集未成熟的卵母细胞进行体外成熟培养、体外受精及受精卵体外培养。结果表明 :1将卵子用 2种不同的培养液进行体外成熟培养和受精卵体外培养 ,TCM199组的卵裂率 (5 6 .3% )极显著高于 D- PBS组(33.6 % ) (P<0 .0 1) ;TCM199组的囊胚发育率和孵化率 (15 .1%、13.7% )虽高于 D- PBS组 (10 .5 %、8.7% ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。2以 TCM199作为基础培养液 ,分别用含激素培养液和不含激素培养液进行成熟培养和受精卵体外培养 ,添加激素组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (81.2 %、17.5 %、15 .3% )高于没有添加激素的对照组 (75 .8%、12 .1%、10 .5 % ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。 3体外受精卵与单层颗粒细胞共培养组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (78.0 %、11.5 %、9.9% )显著高于非共培养组 (6 8.1%、5 .4 %、3.6 % ) (P<0 .0 5 )。     

Effects of ghrelin on in vitro development of porcine in vitro fertilized and parthenogenetic embryos

The objective of the present study was to investigate the effect of addition of ghrelin to in vitro culture medium on preimplantation development of porcine in vitro fertilized and parthenogenetic embryos. In Experiment 1, we sought to compare the in vitro developmental competence of IVF and parthenogenetic embryos. No significant (P<0.05) differences were detected for cleavage rate or blastocyst rate between the in vitro fertilization (IVF)- and parthenogenetic activation-derived embryos. In Experiment 2, parthenogenetic embryos were cultured in Porcine Zygote Medium-3 containing various concentrations of ghrelin. The blastocyst rate was remarkably (P<0.05) increased when 5 ng/ml (PA-5) and 500 ng/ml (PA-500) of ghrelin was added to in vitro culture medium compared with the other groups. Total cell number per blastocyst was slightly promoted in the ghrelin treatment groups compared with the controls. However, the ratio of inner cell mass (ICM) cell number/total cell number was significantly reduced in the PA-50 group compared with the controls (P<0.05). In Experiment 3, we cultured in vitro fertilized embryos in Porcine Zygote Medium-3 supplemented with ghrelin at different dosages. The rate of blastocyst formation was markedly (P<0.05) elevated when 500 ng/ml ghrelin was added to culture medium (IVF-500) compared with the controls. Increased total cell numbers (P<0.05) were observed when in vitro fertilized embryos were cultured in IVF-50 and IVF-500 compared with the controls. However, the ratio of ICM cell number/total cell number was decreased in the ghrelin treatment groups compared with the controls (P<0.05). Taken together, the results suggest that ghrelin can enhance blastocyst formation of porcine in vitro fertilized and parthenogenetic embryos while exerting a negative effect on the structural integrity of the blastocysts.     

Effects of oxygen tension in the gas atmosphere during in vitro maturation, in vitro fertilization and in vitro culture on the efficiency of in vitro production of mouse embryos

Effects of oxygen (O2) tension in the gas atmosphere during in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF) and in vitro culture (IVC) on the efficiency of in vitro production of mouse embryos were examined. Mouse oocytes recovered from large antral follicles were subjected to IVM in Waymouth medium for 15, 16 and 17 hr under 5 or 20% O2 and then subjected to IVF and IVC under 5 or 20% O2 tension. Lowering the O2 tension in the gas atmosphere for IVM from 20 to 5% improved the cleavage rate after IVF when the oocytes were subjected to IVM for 15 hr; however, no improvement in the cleavage rate was observed when the culture period for IVM was extended to 16 and 17 hr. Lowering the O2 tension to 5% for IVM and IVC improved the development of the cleaved oocytes to the blastocyst stage, regardless of the culture period for IVM. However, the O2 tension for IVF had no remarkable effect on the subsequent embryonic development. These results demonstrate that 5% O2 is superior to 20% O2 for IVM and IVC, and suggest that 20% O2 for IVM may delay oocyte maturation and/or the acquisition of fertilizability and impair the developmental competence of oocytes.     

柠檬苦素对小鼠卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响

【目的】研究柠檬苦素(limonin,Lim)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)及后续体外受精(IVF)胚胎发育潜能的影响,旨在为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】在小鼠体外成熟培养液中添加不同浓度的Lim(0、10、20、50 μmol/L),成熟培养12 h后统计小鼠卵母细胞第一极体(PBI)排出率,筛选体外成熟培养液中添加Lim的最适浓度;在体外成熟培养液中添加最适浓度的Lim,以0 μmol/L Lim为对照组,成熟培养12 h,通过免疫荧光染色检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)以及线粒体膜电位(MMP)水平;通过实时荧光定量PCR检测卵母细胞抗氧化及凋亡相关基因的mRNA表达水平。将最适Lim组及对照组卵母细胞体外成熟24 h后进行体外受精,于体外受精24 h和3.5 d分别统计胚胎卵裂率和囊胚率,并用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342染色分别检测囊胚总细胞数及囊胚内凋亡细胞比率。【结果】与0 μmol/L Lim组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞PBI排出率显著升高(P＜0.05),后续试验均用20 μmol/L Lim进行处理。与对照组组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞内ROS水平显著降低(P＜0.05),GSH、MMP水平均显著增加(P＜0.05),抗氧化相关基因(GPx3、CAT和Prdx3)、抗凋亡相关基因(Bcl-2、Bcl-xl)表达水平均显著上调(P＜0.05),促凋亡相关基因(Caspase-3)表达水平显著下调(P＜0.05);体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数均显著增加(P＜0.05),囊胚内细胞凋亡比率显著下降(P＜0.05)。【结论】在体外成熟培养液中添加20 μmol/L Lim可以通过抑制氧化应激和细胞凋亡、增加MMP水平提高小鼠卵母细胞质量,从而提高体外受精胚胎的发育潜力。     

猪卵巢卵母细胞体外成熟体系研究进展

猪卵母细胞体外成熟培养中存在的问题是如何进一步提高卵母细胞的采集效率、急待解决的问题是成熟率不高和成熟质量差的问题。综合论述了猪体外受精技术所包含的猪卵母细胞体外成熟(IVM)培养和受精卵的体外培养两项密切相关的技术与方法，以及完善现有的成熟体系及成熟过程。     

硝唑尼特对利什曼原虫的体外药效试验

为观察硝唑尼特在不同浓度、不同作用时间对离体杜氏利什曼原虫的药效作用,以6个不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200μg/mL)的硝唑尼特分别作用体外培养的杜氏利什曼原虫前鞭毛体48h和72h。结果显示,随着浓度和作用时间的增加,药物对虫体的抑制率升高,显微镜下可见虫体变形,核和动基体不完整,细胞质内有空泡,鞭毛脱落,即硝唑尼特对杜氏利什曼原虫有较好的抑杀作用。     

体外评定酸化剂作用效果的方法探讨

文章主要论述了体外法评定酸化剂作用效果的指标和评定方法。