影响胚胎冷冻效果因素分析

大多数哺乳动物胚胎保存的基本方法为：先将胚胎放人防冻液中平衡一段时间：装管后,以1 min0．3～0．5℃的速度降至植冰温度,平衡一段时间,植冰后再平衡一段时间,然后以1 min 0．3℃的降温速率降温至-35℃,平衡10min后投入液氮中保存。     

影响哺乳动物胚胎冷冻效果的因素分析

影响哺乳动物胚胎冷冻保存的因素很多。本文在总结近１０年来有关胚胎冷冻方面资料的基础上，就胚胎冷冻保护剂，冷冻方法、解冻方法，冷冻保护剂的稀释以及胚胎发育时期等对胚胎冷冻效果的影响进行了探讨。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术不仅为动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流提供了简单的手段，而且还是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年，英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功，此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。至今，牛、绵羊、山羊、马、兔子、猫、羚羊、狒狒、狨猴、猴和人等的胚胎冷冻保存也获成功。然而，在     

哺乳动物胚胎冷冻方法研究进展

自上世纪70年代小鼠胚胎冷冻获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序,缩短冷冻时间等方面进行了深入研究,试图寻找一种可用于生产的冷冻方法.文章对目前广泛采用的三种哺乳动物胚胎冷冻方法的研究进展及应用情况进行了综述,为今后开展哺乳动物胚胎冷冻工作提供参考.     

牛胚胎冷冻保存的研究进展

目前,牛的胚胎冷冻保存巳成为一种较成熟的常规技术,广泛应用于牛的繁殖科研与生产。本文回顾了牛胚冷冻保存技术的发展概况,对牛胚胎的常规冷冻技术、直接冷冻法及玻璃化冷冻技术的进展作了简要论述。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻研究进展

近40年来,利用冷冻保存技术将哺乳动物胚胎长期保存起来,建立"胚胎库"是保护物种资源和拯救濒危动物的有效手段,同时也是加快家畜品种改良、建立动物基因库和实施胚胎移植产业化的重要组成部分,也可以为克隆、转基因等现代生物技术提供丰富的试验材料,使胚胎的供给不受时间和空间的限制。胚胎冷冻保存技术在人类辅助生殖方面也具有广阔的应用前景。本文主要介绍了玻璃化冷冻过程中胚胎冷冻主体承载工具特点和应用,并展望未来哺乳动物胚胎冷冻发展的方向。     

简单而有效的哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法

简单而有效的哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法王海彦朱士恩译１前言如果胚胎可以有效地进行冷冻保存，那么这项技术将可应用在多种哺乳动物如家畜、实验动物、野生动物以及人。然而，在胚胎冷冻和解冻过程中都存在好多会使胚胎受到损伤的因素。如：抗冻保护剂的毒性；冷冻损伤...     

哺乳动物胚胎冷冻技术的研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植、动物克隆以及动物资源保护.此技术的应用需保证胚胎在冷冻-解冻后具有较高的成活率.自从1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序,缩短冷冻时间,方面进行了深入的研究.本文就胚胎冷冻的原理、保护剂、冷冻方法以及解冻方法等方面进行了综述.     

哺乳动物胚胎冷冻技术的研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植、动物克隆以及动物资源保护。此技术的应用需保证胚胎在冷冻—解冻后具有较高的成活率。自从1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序、缩短冷冻时间等方面进行了深入的研究。文章就胚胎冷冻的原理、保护剂、冷冻方法以及解冻方法等方面进行了综述。     

哺乳动物胚胎冷冻原理及研究进展

哺乳动物胚胎冷冻研究始于 5 0年代 ,先后在小鼠、大鼠、兔、马、牛、绵羊、山羊等动物胚胎上获得成功。目前该方面的研究进展很快 ,部分家畜的冷冻胚胎已逐步走向商品化应用。本文比较全面的综述了哺乳动物胚胎冷冻的原理、方法过程和冷冻胚胎的解冻及解冻后保护剂脱除。     

不同冷冻方法对牛体外受精胚胎冷冻效果的影响

通过采用程序降温法(试验1:分步法10%甘油;试验2:直接法1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖)和玻璃化法(试验3:20%甘油+0.3M蔗糖+0.3M木糖+3%聚乙二醇+20%乙二醇)对牛体外受精胚胎进行冷冻保存及解冻后进行孵化培养试验,用囊胚孵化率对各方法进行了比较。结果表明,10%甘油组、1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖组及玻璃化组胚胎存活率分别为85%、82.5%、90%;囊胚孵化率分别为50%、55%和80%(P<0.05)。体外受精胚用玻璃化法保存显著优于程序降温法,可获得较高的胚胎存活率(90%)和囊胚孵化率(80%)。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法

哺乳动物胚胎冷冻技术自建立以来,已进行了一些重大改进。其主要进展有: 1.缩短冷冻时间:提高慢速(0.3℃/分钟)降温操作的中止温度,至到较高的零下温度(-30～-40℃)或者快速降温,降到一定低温便保持此温度一段时间(两步冷冻法)。这样做虽然时间缩短了,但胚胎仍含有水分,这些水分在胚胎投入液氮的急剧降温过程中,便形成小冰晶或者不太稳定的玻璃态。因此,需快速解冻,以防止升温过程中形成有损于胚胎的冰晶。 2.缩短解冻后脱除低温保护剂时间:用非渗透剂(蔗糖)一步稀释,以避免保护剂脱出后胚胎发生渗透性膨胀。 3.玻璃化冷冻法(Vitrification):这是前不久研究出的一种新冷冻方法。其设计根据是,保护剂的稀释液在急剧降温到很低温度时,能被浓缩,而不会形成冰晶。作者已试验成功用两种浓度的低温保护剂,作为胚胎内液(10％甘油和20％丙二醇混合液)和外液(25％甘油和25％丙二醇混合液),且均能达到玻璃化。用此法冷冻的小鼠和牛的晚期桑葚胚已移植成功并产仔。     

影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素

试验对影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素进行探讨，以找出理想的玻璃化冷冻方法。在测试的５种玻璃化溶液中，含３５％乙二醇（ＥＧ）和１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的溶液（ＶＳ１）对胚胎的毒性最小。用ＶＳ１冷冻桑椹胚和囊胚的理想程序是：在室温下使胚胎分别在２０％ＥＧ和３５％ＥＧ中平衡２、３分钟后，移入ＶＳ１中，０．５分钟内（囊胚也可在２分钟后）投入液氮中冷冻。桑椹胚的存活率为９１．７％（３３／３６），囊胚的存活率为９７．１％（３３／３４）～９７．３％（３６／３７）。８～１６细胞胚胎的理想冷冻程序为：在室温下使胚胎在２０％ＥＧ、３５％ＥＧ中平衡２、３分钟，移入４℃的３７％ＥＧ＋１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中平衡２分或１０分钟后冷冻，胚胎存活率分别为１００％（３７／３７）、８６．１％（３１／３６）。     

影响山羊胚胎冷冻效果因素的研究

分别用浓度为1.5 mol/L的乙二醇(EG),1.5 mol/L 1,2-丙二醇(PROH)和1.5 mol/L甘油为冷冻保护液对山羊胚胎进行常规冷冻保存,结果三者对山羊胚胎的冷冻保护效果无显著差异,其中以1.5 mol/L EG的冷冻保护效果为佳。以EFS40为玻璃化液对山羊胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻,其结果与常规冷冻间差异不显著,表明常规冷冻法、玻璃化细管法和OPS法均可用于山羊胚胎的冷冻保存。采用25℃和37℃水浴对常规冷冻和玻璃化冷冻后的山羊胚胎进行解冻,从解冻后的发育效果看,二者间无显著差异,但37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃。还比较了玻璃化液EFS40中添加FCS和BSA后与不添加其他成分的EFS40对胚胎冷冻保护效果的影响,结果表明添加BSA的EFS40的冷冻保护效果显著地高于不添加其他成分的EFS40,但与添加FCS的EFS40间不存在统计学上的差异。     

影响猪胚胎玻璃化冷冻的若干因素

以广西巴马小型猪为供体,采用超数排卵技术,采集5～6日龄的胚胎(囊胚/桑椹胚),比较2种冷冻方法、胚胎承载工具、透明带处理和冷冻胚胎移植受体对猪胚胎冷冻效果的影响.结果表明,2种冷冻方法的冷冻效果没有显著差异;GMP法能显著提高冷冻胚胎存活率(83.8%vs 77.6%,P＜0.05)和囊胚细胞数(47.5 vs 53.1,P＜0.05);以0.5%链蛋白酶10 s处理透明带,虽然对猪胚胎存活率没有显著影响,但能显著提高囊胚细胞数(60.1vs 46.6,P＜0.01);以地方猪种(枫泾母猪)为冷冻胚胎移植受体能显著提高妊娠率和胚胎效率(P＜0.01).     

牛、羊胚胎冷冻方法探讨

胚胎的低温保存已被广泛地应用到家畜胚胎移植中,应用价值已经在大量的胚胎冷冻和移植工作中体现出来。无论对于商业化应用和生物学研究、胚胎专业化生产都在研究和利用胚胎低温保存技术,因为该技术能降低胚胎移植的成本,减少遗传漂变和一些与家畜细胞存活息息相关的疾病的发生。因此替代种畜进出口,为实现遗传资源的全球化共享提供了便利条件。对于大多数哺乳动物细胞来说,     

影响核移植克隆胚胎效率的因素分析

影响核移植克隆胚胎效率的因素分析刘林，安民（北京农业大学动物科技学院１０００９４）一、前言＊采用核移植技术扩增遗传上优秀的哺乳动物胚＊胎，对于提高动物生产力具有巨大潜力。近年来哺乳动＊物核移植技术取得了很大进展。已经获得了包括大家＊畜在内的多种动物的...     

Ops法玻璃化冷冻兔胚胎的实验

拉细开口型细管(Open Pulled Straw,OPS)法玻璃化冷冻是近年来国内外所采用的最快速的冷冻方法。此法具有成本低、易于操作、快速、所需设备简单等特点。有望成为在生产中值得推广的一种胚胎超低温冷冻保存方法。1材料与方法1.1试验动物本试验选择江苏省农科院种兔场的健康、体成熟的中国大白兔50只,其中公兔10只,母兔40只,体重为2~3kg/只,年龄为0.5~1岁作为试验兔。1.2超排方法与同期发情处理用FSH对25只母兔进行超排,肌注2次/d,间隔12h,连续3d,剂量递减,每只供体兔FSH总剂量为40I U,在最后一次注射FSH后12h,供体兔与15只受体兔同时…     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术对于动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流具有重要意义,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年,英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功。此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。然而,在胚胎冷冻和解冻过程中都存在许多会使胚胎受到损伤的因素,如:抗冻保护剂的毒性,冷冻损伤,细胞内冰晶的形成,破裂损伤,渗透压引起的膨胀。因此,使用不同的冷冻和解冻法应避免或减少胚胎受到损伤,以提高胚胎解冻后的存活率。1抗冻保护剂和冷冻溶液在哺乳…