不同品系西方蜜蜂基因组DNA多态性图谱构建及杂交分析

本研究应用随机引物K（5'-CGGCCCCTGT-3'）对不同品系西蜂的基因组DNA扩增，获得了能区分不同品系西蜂的多态性DNA图谱，从多态性图谱中选取一个共同片段K1680bp，标记成探针，探针K1680bp与不同品系西蜂的基因组DNA匀有杂交，从而证明片段K1680bp是西蜂蜂种的共性，为西蜂的鉴定提供了直接依据。     

地高辛标记DNA分子中W316bp特异片段成探针的研究

以W（5‘-CGGCCCCGGT-3‘）为随机引物通过RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA)-PCR扩增技术从高产王浆西峰的不同三品系（浙农大、平湖和萧山等意峰）的DNA分子中获得的共同特异W316bp(bp,base pair)片段，用非放射性标记物地高辛（digoxigenin,DIG)使用随机引物标记法制备成DIG－W316bp探针。结果：此探针可与高产王浆西蜂的DNA基因组及扩增产物分别进行斑点杂交、Southern杂交以此鉴定高产王浆西蜂。     

黑环蜂和黄环蜂各品系基因组DNA的多态性分析

应用随机引物 (W ,5 CGGCCCCGGT 3 ;K ,5 CGGCCCCTGT 3 ;P ,5 ACCCAGGTTG 3 )分别对黑环蜂 3个品系和黄环蜂 4个品系的DNA基因组进行PCR扩增 ,结果获得不同数量的条带和相对分子质量不同的多态DNA图谱 ,从而为区分黑环蜂 (卡尼鄂拉蜂、珲春黑蜂、东北黑蜂 )和黄环蜂 (黄环系蜂、老美意蜂、浙农大意蜂、平湖意蜂 )及其品系间的不同遗传性状奠定了分子生物学分类的基础     

W316bp探针鉴定高、低产王浆西蜂DNA分子特异标记的研究

W316bp(bp,base pair）是不同三品系高产王浆西蜂（浙农大、平湖及萧山等意蜂）以随机引物W（5'－CGGCCCGGT－3'）通过RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA)-PCR扩增获得的一个共同的特异DNA片段，然后将此片段用地高辛配基标记成探针，再高、低产浆西蜂的基因组DNA及PCR扩增产物分别进行斑点杂交及Southern杂交。结果W316bp探针只与高产王浆知的PCR扩增产物及其基因组DNA杂交，而不与低产浆西蜂的PCR扩增产物及其基因组DNA杂交。     

高产王浆西蜂的DNA特异标记—W316bp片段的研究

以11种随机引物（P1，P2，P3。P4，P5，P6，P7，P8，P9，,K，W）对不同产浆量的四品系西蜂（低产浆：喀尼阿兰蜂：高产浆：浙农大，平湖及萧山等意蜂）的基因组DNA进行RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA)-PCR遗传分析，结果：从W引物在高产蜂王浆的浙农大，平湖，萧山等意蜂三品系的基因组DNA的扩增产物中找到了与高产浆优良性状相关的DNA特异标记－－W316bp(bp,base pair，碱基对）片段。     

近交系大鼠DNA指纹图与微卫星DNA比较分析

为了建立一种对近交系大鼠遗传物质进行精确可靠、快速简便的监测方法，利用DNA指纹技术对国内6个品系8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性的分析，并与PCR扩增微卫星DNA技术进行了比较。其结束显示：(1)不同品系之间DNA指纹图差异较大，同一群体不同个体间DNA指纹图带的相似系数和共有带率除SHR（哈)和WKY(哈)小于0．7外，其他均大于0．9。不同地区同一SHR间和WKY间DNA指纹图也存在差异，相同DNA不同次制作的DNA指纹图谱基本一致。(2)不同品系个体间微卫星DNA具有显著多态性；同一群体不同个体之间除SHR(哈)的SMST位点和WKY(哈)的AGT位点出现一定的差异外，其他均没有差异。DNA指纹图能更精确可靠地反映出动物个体间的遗传背景，而微卫星DNA遗传监测方法比较简便快捷。     

应用单引物PCR指纹技术分析Vc-獭兔的分子遗传结构

采用1条小卫星引物M13(5’GAGGGTGGCGGTTCT3’)和2条微卫星引物(GTG)5、(GACA)4，对Vc—Ⅰ系、Vc—Ⅱ系獭兔、日本大耳白兔(JWR)和青紫蓝(QZL)4个品系各8只，总计32个个体的遗传结构进行了DNA指纹分析。结果，3条引物的扩增产物都呈现良好的多态性和稳定性；对每个品系混合DNA池进行分析，计算出了4个品系间及32个个体间的共有带率及遗传距离指数，通过聚类分析，得出各品系间和个体间欧式遗传距离，并绘制出4个品系间及各品系32个个体问的亲缘关系树状聚类图，从而初步建立了4个品系兔的SPAR指纹图谱。     

用寡核苷酸探针对近交系小鼠DNA指纹图谱的分析

应用DNA指纹技术，用非放射性标记的寡核苷酸探针(GGAT)。对3个清洁级近交小鼠品系C57、DBA／2、BALB／c进行检测，分析其DNA指纹图谱。结果显示，不同品系近交系小鼠的DNA指纹图谱有明显差异，而品系内小鼠之间的DNA指纹图谱基本一致。证明DNA指纹技术能够较好地检测出近交系小鼠的基因纯合性，反映其遗传质量，可以应用于对近交系小鼠的遗传质量监测。     

西方蜜蜂不同蜂种及其正反交组合采胶力研究

“浙农大 1号”意蜂 (简称Ea)分别与喀尼鄂拉蜂 (简称K)、卡尔巴阡蜂 (简称C)、高加索蜂 (简称G)、乌克兰蜂 (简称W )、东北黑蜂 (简称D)进行正反杂交组配。在山东荆条场地 ,考察这 6个西方蜜蜂蜂种及 10个正反杂交组合的 15 0个试验蜂群的蜂胶生产性能 ,分析杂交一代的杂种优势。结果表明 :Ea是六个纯种中蜂胶产量最高的蜂种 ,Ea×C是所有纯种和杂交组合中蜂胶产量最高的蜂种 ,是培育蜂胶高产杂交组合的首选蜂种 ,其他 9个杂交组合均未表现出杂种优势     

肉鸡品种对胴体性状和肉质的影响

本研究将清远麻鸡的两个纯系(A和B)与快速生长型AA肉鸡(C)杂交,在3个月的生长时间中测定了杂交品对肉鸡胴体性状、肌肉成分及氨基酸组成的影响.结果:杂交品系肉鸡的体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌和腹脂重量均显著高于纯种品系(P<0.05).杂交品系肉鸡的肌纤维密度和剪切力较纯种品系显著提高了6.94％和7.98...     

三品系西方蜜蜂基因组DNA多态性分析研究（二）

采用９种随机引物（Ｋ,５’－ＣＧＧＣＣＣＣＴＧＴ－３’;５’－ＣＡＧＣＧＧＴＡＣＣ－３’;５’－ＡＣＣＡＧＧＴＴＧＧ－３’,５’－ＧＴＣＧＧＡＡＴＴＣ－３’;５’－ＣＧＧＣＣＣＣＧＧＴ－３’;Ｘ,５’－ＧＴＡＧＴＣＡＣＡＣ－３’;Ｙ,５’－ＣＴＧＣＡＧＧＡＣＡ－３’;Ｚ,５’－ＣＧＧＣＣＣＧＧＴＡ－３’）和ＰＣＲ技术扩增不同产蜜量的三品系西峰（喀尼阿兰、平湖、美意的ＤＮＡ基因组。结果Ｋ引物在高产蜜     

鸡柔嫩艾美耳球虫不同抗药性虫株的种内多态性研究

应用RAPD技术进行柔嫩艾美耳球虫4个单一抗药性虫株与1个敏感株的基因组DNA多态性分析，发现4个抗药性虫株及敏感株之间的相似值均大于99%；OPAO3引物对抗盐霉素株扩增出一条约500bp的特异条带，OPH02引物对抗克球粉株和抗盐霉素株均扩增出了约1kb的第三条主带，这些特异条带的出现很可能与球虫抗药性基因有关，有可能用于抗药性虫株的诊断与鉴定。     

以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术筛选意大利蜜蜂重要农艺性状遗传标记

为了获得意大利蜜蜂重要农艺性状的分子遗传标记 ,本研究以 30种RAPD随机引物对平湖浆蜂、美意、澳意、苏意等 4个在产浆、采蜜和抗病性上存在较大差异的意蜂品系的基因组DNA进行RAPD_PCR扩增筛选。试验结果显示 ,随机引物W 1 8(5′_CGGACGGCGG_3′)和W2 3(5′_GTACCGCCCG_3′)的扩增图谱呈多态性。其中 ,在引物W 1 8所扩增出的 9条片断中 ,2 35 2bp和 36 4bp条带为美意所特有 ,表明可将之用于鉴别美意 ;2 0 92bp条带仅出现于蜂蜜高产的美意和澳意中 ,意味着该条带为一个蜂蜜高产性状的遗传标记 ;而 6 32bp条带在王浆高产品系平湖浆蜂中出现的频率 (0 91 )显著高于 (P <0 0 1 )美意(0 0 4 )、澳意 (0 0 2 )和苏意 (0 0 0 ) ,说明 6 32bp条带可能为王浆高产性状的一个遗传标记。在W2 3引物扩增条带中 ,6 5 1bp条带为澳意所特有 ,可用于澳意鉴别     

DNA分子标记检测家蚕苏菊、明虎品种和纯度的研究

利用单粒卵微量DNA抽提法,从江苏省家蚕主要品种苏菊、明虎及其一代杂交种蚕卵快速提取出基因组DNA,用筛选出的 RAPD随机引物S77稳定扩增出苏菊、明虎的DNA特异性片段RS和RM,克隆和测序后大小分别为1694bp和1303bp,使用Blastn程序在NCBI 数据库检索发现,Rs的nt30-429与一个家蚕WGS(whole genome shotgun sequence)(dbj|BAAB01119085．1,contis504766)的nt472-874有92％的同源性,其中存在11个空缺位点(Gaps);RM的nt1070-1301与另一个家蚕WGS(dbj|BAAB01141578．1,contig554782)的nt262-31有91％的碱基相同,其中存在2个Gaps。进一步根据RS和RM序列合成SCAR标记引物PS-1(FP:5’ttccccccagtacgcaataac3’,RP:5’ ttccccccagacgtcacgtact3’)和PM-1(FP:5’ttcccccagtgatggaatttacg3’,RP:5’ttccccccagtccaatgttaca3’),能够准确、快速地鉴别所标记的苏菊、明虎及其F1蚕品种。     

Female-specific DNA sequences in geese

1. The OPAE random primers (Operon Technologies, Inc., CA) were used for random amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting in Chinese, White Roman and Landaise geese. One of these primers, OPAE-06, produced a 938-bp sex-specific fragment in all females and in no males of Chinese geese only. 2. A novel female-specific DNA sequence in Chinese goose was cloned and sequenced. Two primers, CGSex-F and CGSex-R, were designed in order to amplify a 912-bp sex-specific polymerase chain reaction (PCR) fragment on genomic DNA from female geese. 3. It was shown that a simple and effective PCR-based sexing technique could be used in the three goose breeds studied. 4. Nucleotide sequencing of the sex-specific fragments in White Roman and Landaise geese was performed and sequence differences were observed among these three breeds.     

太空搭载‘热研2号’柱花草后代RAPD多态性分析

以返回式卫星搭载的‘热研2号’柱花草(Stylosanthes guianensis (Aubl.) Sw.)种子为材料,经过5年地面种植和选择,获得26个变异株系。利用RAPD分子标记技术对26个变异株系和2个对照‘热研2号’与‘热研5号’柱花草进行遗传多样性研究。从50个随机引物中筛选出11个,共扩增出77条带,其中53条为多态性带,占68.8%,平均每个引物扩增出多态性带4.8条;采用Nei72方法计算出不同材料间的遗传距离,其变化范围为0.056~0.509;利用NTSYS软件进行非加权组法(UPGMA)聚类分析,建立‘热研2号’柱花草太空育种后代材料间的分子系统树状图;并以相似系数0.77为标准,将28份材料分为5类。     

优良浆意蜂DNA分子特异标记(W316bp)的鉴定研究

第一部分分离提取三品系意蜂 (浙农大、萧山、平湖 )的DNA ,使用紫外分光光度计 ,波长 2 6 0nm鉴定DNA纯度 ;第二部分以W (5′ -CGGCCCCGGT - 3′)为随机引物进行PCR ,扩增 ,电泳 ,获得DNA多态性图谱 ;第三部分比较三品系意蜂工蜂与雄蜂的DNA多态性图谱。结果凡是三品系意蜂的工蜂均出现一高产浆特异标记W316pb条带 ,但三品系意蜂的雄蜂均无W316bp条带。则进一步鉴定了W316bp是高产浆意工蜂DNA分子的特异标记     

黑龙江省野生桑树种质资源的遗传多样性分析

采用RAPD分子标记技术,对黑龙江省境内收集的24份野生桑树种质资源进行遗传多样性分析,揭示其遗传分化关系,以利于对耐寒、抗旱类型野生桑树种质资源保存与应用价值的准确鉴定和评估。从20个RAPD随机引物中筛选出4个有效引物,对24份野生桑树种质材料的基因组DNA进行扩增,共获得275条带,其中多态性带273条,多态性比率为99.3%,单引物对每份种质材料扩增获得的条带数在2～5条之间。24份野生桑树种质材料的遗传距离在0.047～1.000之间,其中,杜蒙2号和杜蒙3号,宁安1号和宁安3号两组种质材料的相似性最大,杜蒙3号和宁安3号的相似性最小。24份野生桑树种质材料的亲缘关系与其地域分布基本吻合。     

Comparison of the Value of Pulsed-field Gel Electrophoresis,Random Amplified Polymorphic DNA and Amplified rDNA Restriction Analysis for Subtyping Taylorella equigenitalis

Eight strains of Taylorella equigenitalis were identified by a polymerase chain reaction using a primer pair specific to the 16S rDNA of T equigenitalis. These eight strains were chosen because they had previously been shown to represent eight distinct genotypes by pulsed-field gel electrophoresis analysis after separate digestion of the genomic DNA with ApaI or NotI. The eight strains could be classified into six or seven types by random amplified polymorphic DNA analysis using different kinds of primers. Amplified rDNA restriction analysis after separate digestion with five restriction enzymes, including AluI and MboI, of the 1,500 bp fragments of rDNA amplified by polymerase chain reaction did not discriminate the genomic variations among the eight strains of T equigenitalis. Thus, pulsed-field gel electrophoresis was shown to discriminate these eight organisms better than random amplified polymorphic DNA analysis, while amplified rDNA restriction analysis was found to be unsuitable for subtyping T equigenitalis.     

不同地区栗蚕(Dictyoploca japonica)的RAPD分析

利用RAPD技术对10个地区的栗蚕(Dictyoploca japonica)基因组DNA进行多态性分析,以期查明我国栗蚕种质资源的分布及种群间的亲缘关系。运用11个引物进行扩增,共扩增出123条清晰稳定的条带,其中有96个位点具有多态性,多态性位点比率为78.05%。遗传距离(D)在0.178 9～0.414 6之间。通过聚类分析,7个东北地区的栗蚕聚在一起,重庆巫溪和广西南宁地区的栗蚕聚在一起,湖北恩施地区的栗蚕自成一类。研究结果表明,RAPD标记具有简便、快速的优点,可用于栗蚕的鉴定和遗传分析。