克隆猪和转基因猪技术达到国际领先水平

中国农业大学"体细胞克隆猪和转基因体细胞克隆猪技术平台的建立与应用"项目经教育部鉴定认为.此项目设计合理、技术先进、数据详实、证据充分、结果可靠,克隆猪和转基因克隆猪技术平台建设和研究工作处于国际先进水平,而转人溶菌酶基因和肌肉生长抑制素MSTN基因敲除克隆猪研究已经达到国际领先水平.     

科技前沿

南京农业大学首例徒手克隆猪诞生9月15日晚上10时45分,一胎8头体细胞克隆小猪诞生,这是南京农业大学首例利用徒手克隆核移植技术生产的克隆猪。这也标志着南农利用徒手克隆技术生产克隆猪技术取得重大突破。此次徒手克隆猪制备试验,由南京农业大学动科院遗传育种研究室联合安徽农业大学动科院张运海副教授课题组及大鹏养猪合作社共同合作开展。安徽农大提供核移植用供体细胞,     

华南农业大学成功培育成粤首例体细胞克隆猪

2008年5月15日,广东省第1头体细胞克隆猪在广东温氏食品集团有限公司水台原种猪场出生,这是我省首例体细胞克隆猪。华南农业大学、广东省农业厅和广东省农业科学院的专家见证了该头克隆猪的到来。该项研究是华南农业大学派驻温氏集团研究院的吴珍芳教授的课题组在中国农业大学李宁院士的支持下完成的。该课题组此次成功移植了4头受体母猪,经过115 d的怀孕期,首胎受孕母猪即生产了5头克隆小猪,均健康活泼。另1头克隆受体母猪将在1周后分娩。     

江苏：首例徒手克隆猪诞生

一胎8头体细胞克隆小猪近日在南京农业大学诞生,这是江苏省首例利用徒手克隆核移植技术生产的克隆猪。     

猪体细胞克隆技术研究进展

克隆不仅可以保护濒危动物,而且与干细胞工程技术结合应用于克隆性治疗,具有重大的科学意义和应用价值。体细胞克隆猪因其在人类器官移植方面具有巨大的应用潜力,已成为当今研究的热点,但是体细胞核移植技术仍存在许多问题,其中最主要的是体细胞核移植的环节多,克隆效率低。对体细胞克隆猪的关键环节,即供核细胞、卵母细胞、显微操作、克隆胚的激活、培养及移植技术进行了简要综述。     

我国学者培育出可同时表达4种荧光蛋白的克隆猪

据悉,在中科院广州生物医药与健康研究院成功培育出了一种特殊的转基因克隆猪,这种克隆猪在特定波长的激发光下可分别发出红、黄、绿、青4种荧光,这是国际上首次获得能够同时表达4种荧光蛋白的转基因克隆猪。研究组通过电穿孔的方法分别将红色、黄色荧光蛋白、绿色以及青色荧光蛋白的4种基因同时转入长白猪胎儿成纤维细胞,然后进行体细胞克...     

猪体细胞克隆研究进展

综述了用核移植方法生产体细胞克隆猪的技术关键和难点及应用情况,并对提高猪体细胞核移植效率的策略进行了分析。     

小型猪体细胞克隆试验

[目的]建立体细胞克隆小型猪的技术平台并了解克隆效率。[方法]运用体细胞核移植技术,以小型猪胎儿成纤维细胞作为核移植供体细胞,以体外成熟卵母细胞作为核移植受体细胞进行体细胞克隆猪生产,并利用STR序列对所出生的克隆猪进行个体识别。[结果]将重构胚胎移植到5头代孕母猪体内,其中一头代孕母猪成功产下2头克隆小型猪。经过个体识别试验证实克隆小型猪来自供核细胞,与代孕母猪无直接亲缘关系。[结论]克隆小型猪的成功出生表明所建立的技术平台适于小型猪的克隆。     

科技简讯

山东莱阳养猪项目列入国家星火计划；我国首只体细胞克隆猪诞生；黑龙江一农民发明降胆固醇鸡饲料；我国科学家发现调控猪肉肥瘦机理[编者按]     

黑龙江省改革开放三十年十大科技事件成果人物评选揭晓

<正>由黑龙江省科技厅联合省委宣传部、省教育厅、省科协共同举办的黑龙江改革开放三十年十大科技事件、成果、人物评选活动于2009年1月12日揭晓。活动共评选出十大科技事件、十大科技成果和十位杰出科技人物,在这三项评选中,我校均榜上有名。一是科技事件:2002年2月国家乳业工程技术研究中心落户我省;二是科技成果:成体体细胞克隆猪及首例绿色荧光蛋白"转基因"克隆猪;三是杰出科技人物:大豆专家王金陵教授。     

成年克隆猪与正常繁殖猪心脏的比较蛋白质组学研究

【目的】探讨体细胞核移植(即克隆)操作对克隆猪心脏发育的影响。【方法】分别对3头正常繁殖猪和3头成年克隆猪的心脏进行解剖学观察和组织切片分析。提取心脏蛋白样品,利用基于双向电泳-质谱体系的比较蛋白质组学技术对心脏蛋白进行分析。【结果】解剖学观察和组织切片分析证实,克隆猪心脏发育异常;与正常繁殖猪相比,克隆猪心脏蛋白共有6种差异表达蛋白,分别为组织蛋白酶-D、骨骼肌型α-肌动蛋白、心肌肌球蛋白重链、热休克蛋白-27、Telethonin和骨骼肌型α-肌动蛋白,其中前5种蛋白表达上调,后1种蛋白表达下调。【结论】一些重要的心脏蛋白表达异常可能导致了克隆猪的心脏发育缺陷,比较蛋白质组学手段可以作为探索体细胞核移植机制的重要方法。     

Vc对猪体细胞克隆胚胎体外及体内发育的影响

[目的]提高克隆猪的大批量生产效率,优化体外与体内培养体系。[方法]将所获得的猪体细胞克隆胚胎用含不同Vc浓度的培养液培养,比较体外囊胚发育力和囊胚细胞数,筛选出合适的培养浓度,然后用此浓度培养后的胚胎进行体内手术移植,统计克隆猪的分娩率和产仔情况。[结果]克隆胚胎在激活后用40μg/m L Vc处理22 h,体外培养未显著增加囊胚率,但显著提高了囊胚细胞数。体内移植结果显示,添加Vc未提高妊娠率,但增加了窝均总仔数,克隆效率差异显著。[结论]Vc处理有利于增强体细胞克隆胚的体内和体外发育能力。     

利用体细胞核移植技术生产优秀种公猪

为探讨体细胞核移植技术用于种公猪的实际生产,复制优秀种公猪的可行性,精选优秀种公猪作为供体,取其耳组织成纤维细胞作核供体,体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎,胚胎体外培养后进行移植。试验先后移植了3 437枚1～4细胞期克隆胚胎到18头受体母猪的输卵管内,28d经B超检测,有16头受体母猪妊娠(88.89%),11头妊娠足月(68.75%)分娩产下53头仔猪,体细胞克隆猪的生产效率为2.80%(出生仔猪/移植胚胎)。早期生长性状测定结果显示,0和7d时克隆猪的体质量和体尺与普通公猪无显著差异(P>0.05)。利用体细胞核移植技术生产克隆种公猪,可以延伸种公猪的利用时间和空间,放大优秀种猪的利用价值。     

国内首例绿色荧光蛋白"转基因"克隆猪问世

曾培育出我国首例成体体细胞。克隆”东北民猪的东北农业大学教授刘忠华带领的课题组，2006年12月22日又成功培育出国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪，这是世界上继美国、韩国．日本之后第4例绿色荧光蛋白转基因猪。     

绿色荧光蛋白“转基因”猪问世

曾培育出我国首例成体体细胞“克隆”东北民猪的东北农业大学教授刘忠华带领的课题组，于2006年12月22日又成功培育出国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪，这是世界上继美国、韩国、日本之后第四例绿色荧光蛋白转基因猪。     

体细胞克隆猪繁殖性能及后代生长性能评估

本文旨在探讨克隆种猪与供体猪在繁殖和遗传性能的关系,评估体细胞克隆公猪在保存优良基因和商品猪生产中的应用。克隆皮杜公猪,检测其精液质量相关指标,比较克隆公猪、供体公猪与配母猪的窝产总仔、活仔数等指标,并对两者后代进行生长性能测定。结果表明,与供体猪相比,克隆猪及后代在各项检测指标中均无显著差异,说明克隆猪具有正常的繁殖性能,且保留了供体优秀的遗传性能,可以作为优秀种公猪进行生产应用。     

PCSK9基因D374Y突变体转基因猪的制备与分析

【目的】前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/Kexin type 9,PCSK9)基因是人类高胆固醇血症(autosomal dominant hypercholesterolemia,ADH)的主效基因之一,其获得型突变与人类家族性高胆固醇血症有直接的关系。PCSK9-D374Y突变体对低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)的降解能力比野生型蛋白强十倍,增加了患高胆固醇血症的风险,从而加速动脉粥样硬化的进程。猪心血管系统和血脂代谢方面与人类非常相近,成为研究动脉粥样硬化疾病的理想模型之一。然而自然发病的猪缺乏,且诱导病征发生缓慢。因此拟利用体细胞克隆技术制备PCSK9获得型突变体转基因猪,以模拟动脉血管的病理学变化,加速发病进程,为动脉粥样硬化的研究提供理想的动物模型。【方法】研究使用人PCSK9基因D374Y突变体载体,用电转染的方法将其整合到五指山小型猪近交系胎儿成纤维细胞中,并通过体细胞核移植技术获得了人PCSK9基因D374Y突变体转基因猪个体。通过Southern-blot、实时荧光定量PCR、Western-blot等方法,分别从DNA、RNA、蛋白的水平检测了人PCSK9基因在转基因猪肝脏中的整合表达情况。同时,通过组织化学染色与H.E.染色的方法对转基因猪进行了组织学检测。【结果】转基因阳性细胞集落在药筛的第3天开始出现,至第7天形成较大的单克隆点,且PCR检测结果显示扩增产物可以拼接为完整片段,说明外源片段在基因组中具有完整性;将筛选得到的阳性细胞作为体细胞克隆的供体细胞,通过体细胞核移植技术获得了转基因猪个体。PCR及Southern-blot检测结果显示,D374Y-PCSK9基因可以完整的插入猪的基因组中,且有串联重复现象;RT-PCR和QPCR检测结果表明,人PCSK9基因能在猪肝脏内正常转录且不影响猪内源性PCSK9基因的转录,且在其它内脏器官,如心、脾、肺、肾也能检测人PCSK9基因的表达,而猪内源性PCSK9基因在这些组织中表达量很低;Western-blot检测结果与RNA水平的检测类似。这些结果说明人D374Y-PCSK9基因成功整合到猪基因猪中,且能够正常转录与翻译。通过组织化学染色发现,与野生型猪肝脏相比,克隆猪肝脏中LDLR蛋白水平极显著低于野生型。另外,对克隆猪进行H.E.染色后发现其肝脏组织有明显的病理学变化,该结果说明,LDLR水平的急剧下降有可能是导致肝脏病变的原因。【结论】成功获得了人PCSK9基因D374Y突变体的克隆猪;与野生型猪肝脏相比,克隆猪肝脏中LDLR水平显著降低,并且克隆猪肝脏发生了明显病变。     

克隆猪隐睾症雌雄激素及其受体基因表达的研究

利用化学发光免疫技术测定了3头隐睾克隆猪和3头正常猪不同阶段(2—6月龄)的睾酮(T)和雌二醇(E_2)激素的水平;运用相对荧光定量PCR技术检测AR和ER基因在睾丸组织中的mRNA表达量。结果表明:正常猪血清T和E_2浓度从2月龄到6月龄呈上升趋势,隐睾克隆猪血清E_2浓度变化趋势与对照组相似,T变化趋势为先缓慢升高然后降低,5月龄达到最高[(1.98±1.06)ng/mL],且各阶段血清浓度均显著低于正常猪;ER基因在克隆猪睾丸中表达量高于对照组,但差异不显著,AR基因表达量则反之,且差异显著。血清T的低水平和睾丸AR基因mRNA低表达均可能是引起克隆猪发生隐睾的因素。     

双峰驼黄体细胞的分离与培养

为了探索双峰驼黄体细胞的percoll液分离及体外培养方法,观察黄体细胞的生物学特性,采用胶原酶消化法从双峰驼黄体组织中分离并获得妊娠期双峰驼黄体细胞,通过形态学观察确定了大小黄体细胞的生长特性.结果表明:胶原酶消化可获得数量较多,生长状态良好的双峰驼黄体细胞,而小黄体细胞的数量远远多于大黄体细胞,其形态学和生物学特性具有典型类固醇分泌细胞的特征.试验建立的体外双峰驼黄体细胞原代培养的方法,所获细胞生物学特征稳定,纯度较高,适用于体外试验研究.     

资讯

<正>云南:世界首只近交系克隆猪出生近日一只以高代近交系猪作为供体培育的克隆猪,在云南农业大学顺利出生。这只近交系克隆猪的供体来自于世界首个大型哺乳类实验动物近交系——版纳微型猪近交系,是一头连续20代在猪母子或同一窝公母猪之