实验小鼠粪便中致病性病原微生物检测与耐药性分析

为了分析实验小鼠粪便中致病性病原微生物分布与耐药性,本试验从某市的实验小鼠养殖基地采集粪便样品120份,采用常规的细菌鉴定方法、致病性试验、K-B药敏纸片法对采集的粪便样品进行细菌分离鉴定、致病性及耐药性进行检测与分析.结果显示,从120份样品中分离了25株致病性大肠杆菌、24株致病性沙门菌、20株致病性志贺菌;分离的24株致病性沙门菌对氨苄西林、阿莫西林、青霉素等10种药物的耐药率在50.0%以上,对其他药物耐药率在16.7%～37.5%之间;分离的20株致病性志贺菌对氨苄西林、阿莫西林、青霉素等10种药物耐药率在65.0%以上,对其他药物的耐药率在10.0%～35.0%之间;分离的25株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、青霉素等9种药物耐药率在60.0%以上,对其他药物耐药率在12.0%～48.0%之间。说明了实验小鼠粪便中分离的大肠杆菌、沙门菌、志贺菌具有很强的致病性,且存在严重的耐药性。     

重庆市荣昌区动物源沙门菌的检测与耐药性分析

为了了解重庆市荣昌区畜禽源沙门菌的流行特征和耐药情况,从荣昌区的一家规模化生猪养殖场和一家肉鹅养殖场分别采集动物粪便样品80份和30份,样品经过前增菌、选择性增菌、平板划线接种、挑取可疑菌落革兰氏染色并扩增沙门菌特异性基因invA,从而鉴定沙门菌分离株。对沙门菌分离株进行血清型分型和药物敏感性试验。试验结果显示,110份样品中共分离到8株沙门菌,其中猪源沙门菌6株,鹅源沙门菌2株。沙门菌血清型鉴定表明,8株沙门菌中有5株为鼠伤寒沙门菌,1株为乙型副伤寒沙门菌,1株为圣保罗沙门菌,1株沙门菌尚不能判断。药敏试验表明,沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的耐药现象最为严重,其次为酰胺醇类、青霉素类和氨基糖苷类。8株沙门菌分离株菌均为多重耐药菌株,尤其需要注意的是,分别有1株鹅源和猪源沙门菌对16种和17种抗菌药物产生耐药,多重耐药现象严重。     

山东地区鸡源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶和磷霉素耐药基因的流行性研究

为了解山东地区鸡源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和磷霉素耐药基因的流行性,测定了336株鸡源大肠杆菌(蛋鸡源153株,肉鸡源183株)对14种抗菌药物的敏感性,并检测了菌株中的ESBLs和磷霉素耐药基因。结果显示,336株菌对四环素类药物耐药率高于78.6%;对头孢菌素类、氟喹诺酮类和磷霉素的耐药率分别达38.4%～44.9%,26.8%～50.0%和28.7%。336株菌中,123株携带CTX-M型ESBLs,携带率最高的为bla_(CTX-M-9G )(24.1%),其次为bla_(CTX-M-1G)(15.5%),其中3.3%菌株同时携带bla_(CTX-M-9G)和bla_(CTX-M-1G);fosA3检出率为21.7%,未检出其他磷霉素耐药基因和ESBLs基因。此外,肉鸡源大肠杆菌中fosA3与ESBLs的检出率均显著高于蛋鸡源大肠杆菌(P0.01),且fosA3与ESBLs密切相关。本研究为山东地区鸡大肠杆菌病治疗的临床用药提供科学依据。     

胶东地区肉鸡大肠杆菌耐药性研究

试验通过CLSI推荐的K-B药敏纸片法,对胶东地区分离的肉鸡大肠杆菌进行耐药性研究。结果显示:169株肉鸡大肠杆菌分离株对17种抗菌药物均有不同程度的耐药性,对四环素、多西环素、阿莫西林耐药的菌株数量较多,耐药率分别为94.08%、94.08%、92.90%;对多黏菌素B耐药菌株数量最少,耐药率仅为0.59%;耐药率低于30%的有4种,依次为磷霉素、大观霉素、丁胺卡那霉素、多黏菌素B;其余10种药物耐药率在36.09%~79.89%。169株大肠杆菌中仅有一株大肠杆菌表现单一耐药性,其余168株分离菌均对抗菌药物表现出多重耐药,耐药范围在3~15种,其中对9~13种抗菌药物具有多重耐药性的分离菌共106株,占全部分离菌的62.72%。     

三黄种鸡场孵化死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解死亡鸡胚中沙门菌的感染状况,从河南省4家三黄种鸡场自带孵化场采集死胚样品,进行沙门菌分离、血清型鉴定,并用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测。结果:从356份死胚样品共分离到173株沙门菌,包括5种血清型:鸡白痢沙门菌(162株)、布利丹沙门菌(5株)、塞罗沙门菌(4株)、肠炎沙门菌(1株)、菲尔摩雷沙门菌(1株)。不同来源死胚中沙门菌的分离率和耐药情况差异显著;173株沙门菌对磺胺异噁唑(82.1%)、氨苄西林(74.0%)、四环素(49.1%)、土霉素(48.6%)耐药情况较严重,且43.4%(75/173)的菌株表现为多重耐药;对其他抗生素耐药情况较轻,耐药率在11%以下;对头孢他啶、美罗培南、亚胺培南、多黏菌素E、氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星敏感。PCR共扩增到13种耐药基因,且耐药基因的检出情况与耐药表型的符合率在72%以上,其中ESBLs类、氨基糖苷类、头孢菌素类的符合率为100%。结论:三黄鸡鸡胚感染的沙门菌血清型复杂、多重耐药严重,且耐药基因普遍存在于耐药菌株中。     

辽宁猪源大肠埃希菌的分离鉴定与药敏试验

为了调查辽宁省不同地区猪源大肠杆菌病的流行和耐药情况,无菌采集临床疑似大肠杆菌病病死猪或患病猪病料65份,经细菌分离培养及生化试验,共分离到65株大肠埃希菌,分离率为100%。对分离到的菌株进行药物敏感试验及超广谱β内酰胺酶(ESBLs)筛选和确证试验,结果显示,辽宁地区分离株均表现出不同程度的耐药,耐药菌株占98.46%,其中对四环素、青霉素及氨苄西林的耐药率分别为93.33%、81.54%和80.00%;对甲氧苄啶、磺胺异恶唑、氯霉素、恩诺沙星耐药性较高,分别为74.29%、74.29%、69.23%和68.57%;对米诺霉素及多粘菌素B较为敏感,耐药率仅为10%和9.23%;分离株多药耐药率较高,达92.31%。ESBLs确证试验结果发现,辽宁省分离株中29.23%的菌株能产生ESBLs。说明辽宁地区猪大肠埃希菌流行情况较为广泛,耐药情况较为严重。     

克氏原鳌虾产ESBLs大肠杆菌的分离鉴定与耐药研究

为了解克氏原螯虾产ESBLs大肠杆菌的耐药流行情况,采集来自山东、江苏、浙江、湖北和辽宁五省共计198份活体克氏原螯虾肠道样品,采用头孢噻肟抗性选择性培养基培养、PCR方法和BD PhoenixTM-100全自动微生物鉴定/药敏系统筛选、鉴定产ESBLs大肠杆菌并检测其药物敏感性。结果显示,从198份克氏原螯虾样品中共分离获得107株产ESBLs大肠杆菌,分离率为54.0%。所有分离菌株对青霉素类、一代头孢和部分三代头孢菌素均耐药;对四环素类、氟喹诺酮类、氯霉素类和磺胺类药物的耐药率均在60%以上(65株);对氨基糖苷类药物耐药率较低;多重耐药(R≥3类)菌株所占比例为86.7%(96/107),且以5类(30%,31/107)和6类耐药(28%,30/107)为主。通过试验初步获得了克氏原螯虾产ESBLs大肠杆菌耐药水平的基础数据,为克氏原螯虾细菌耐药性防控和水产品公共卫生监测奠定基础。     

广东省部分地区禽源和猪源沙门菌血清型与耐药性及Ⅰ类整合子分析

为了解广东省禽场和猪场沙门菌的血清型和耐药性情况,本研究2015年从广东省多个养殖场共采集样品126份,分离出沙门菌24株,分离率为19.04%。采用Kauffmann-White法、Kirby-Bauer法和PCR方法对分离株进行了血清型鉴定、药敏试验和Ⅰ类整合子检测。血清型鉴定结果显示,24株沙门菌共鉴定出4种血清型,分别是鼠伤寒沙门菌(14株)、印第安纳沙门菌(8株)、科瓦利斯沙门菌(1株)和阿尔巴尼沙门菌(1株)。药敏试验结果显示,分离株对四环素(83.33%)、氨苄西林(70.83%)、磺胺异恶唑(70.83%)、萘啶酸(66.67%)、复方新诺明(58.33%)、卡那霉素(54.17%)、阿米卡星(54.17%)、庆大霉素(50.00%)的耐药率较高,有54.17%(13/24)的菌株对8种及8种以上抗菌药物耐药。Ⅰ类整合子检测结果显示,Ⅰ类整合酶阳性率为29.17%(7/24),整合酶阳性菌株中仅有1株扩增到携带耐药基因aadA2的基因盒。上述结果表明,广东省禽场和猪场沙门菌分离率较高,耐药情况严重,菌株的耐药性与其血清型和Ⅰ类整合子的携带有一定的相关性。     

一株猪源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析

2018年3月,经革兰氏染色、药物敏感性试验和分子生物学试验,从河南某猪场发生仔猪腹泻的病料中,分离培养得到一株ESBLs大肠杆菌。药敏试验结果显示,该菌株对氨基糖甙类药物阿米卡星敏感,对其他喹诺酮类、四环素类、磺胺类、氯霉素类、青霉素类、头孢菌素类均耐药。扩增其CTX-M、TEM、SHV、OXA等4种常见的ESBLs耐药基因,只有TEM基因阳性,应加强产酶耐药菌的监测,以有效防治该类疾病的发生。     

鸡源弯曲菌的分离鉴定和耐药性检测

为了解弯曲菌在肉鸡养殖场中的流行和耐药情况,于2018年12月至2019年6月从广东省某肉鸡养殖场随机采集泄殖腔拭子140份,进行弯曲菌的分离鉴定、药敏试验和耐药基因的检测。结果共分离到75株弯曲菌,分离率为53.6%,其中结肠弯曲菌的分离率为30%,空肠弯曲菌的分离率为23.6%,结肠弯曲菌为优势弯曲菌。药敏试验显示,分离菌株对萘啶酸的耐药性最高(88.0%)。庆大霉素和红霉素作为治疗弯曲菌感染的一线药物其耐药率分别为68.0%和73.3%。75株弯曲菌对12种抗生素产生了47种耐药模式,多重耐药率达到了92.0%。耐药基因检测发现,四环素类耐药基因tet(O)检出率高达62.7%。研究表明,广东省肉鸡养殖场中弯曲菌的污染率较高,耐药情况严重,耐药谱复杂多样,多重耐药率较高,对公共卫生具有潜在威胁,需要加强监测与深入研究。     

2株犬源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解泰安市部分地区宠物源沙门菌的感染情况、耐药表型与产超广谱β内酰胺酶（Extended-SpectrumΒ-Lactamases,ESBLs）等耐药基因的携带情况。在泰安市3家宠物医院采集84份犬、猫的肛拭子样品进行沙门菌的分离培养,分别使用微生物质谱鉴定和PCR方法鉴定沙门菌;使用血清凝集试验对分离株进行沙门菌的血清型鉴定;同时检测分离株对14种抗生素的敏感性;采用双纸片协同法对沙门菌进行产ESBLs初筛和确证实验,并检测了4类常用抗生素的18种耐药基因。本研究共分离到2株来自健康犬的沙门菌,且均为肠炎沙门菌,犬源沙门菌的分离率为3.45%(2/58)。2株沙门菌均只对红霉素具有耐药性。其中1株菌检测到β-内酰胺类中的blaCTX-M基因,氨基糖苷类中的aaC4基因,喹诺酮类中的aac (6’)-Ib-cr,qnrA,oqxA基因。本研究从84份犬、猫样品中分离到2株肠炎沙门菌,看似表观健康的犬,存在沙门菌感染情况,提示需要重视宠物来源人兽共患病原菌所带来的的潜在风险。     

某父母代肉种鸡群泄殖腔拭子与环境样本中细菌分离鉴定及耐药性分析

为了解山东某规模化父母代肉种鸡场中鸡群及鸡舍环境中细菌的种类和流行情况,采用细菌分离培养与微生物质谱鉴定对56份鸡只泄殖腔拭子及15份环境样品进行细菌分离鉴定,同时对10份泄殖腔拭子的增菌液进行耐药表型分析,通过血清分型方法进一步明确分离到的大肠杆菌血清型。结果显示,从71份样品中共分离鉴定到10种共85株细菌,主要优势菌为大肠杆菌（49/85,57.65%）,49株大肠杆菌中有5株进一步鉴定为肠道致病性大肠杆菌,其余44株为非肠道致病性大肠杆菌。发现10份鸡只泄殖腔拭子的增菌液对11中常用抗菌药物呈现不同程度的耐药情况,其中对复方新诺明、四环素、氨苄西林等5类抗菌药物均高度耐药（10/10,100%）,对加替沙星、头孢西丁、氧氟沙星、阿莫西林和链霉素的耐药性在50%～90%。结果显示,该规模化肉鸡养殖场中鸡群和环境存在细菌种类具有多样性,这可能是导致鸡群耐药情况严重的原因之一,本研究证实,泄殖腔拭子及环境样本可用于评估养殖场是否合理用药,对鸡群健康养殖及细菌病综合防治具有重要意义。     

一株肉鸡源大肠杆菌的分离鉴定与致病性分析

为了解规模化肉鸡养殖场致病性大肠杆菌的耐药性与致病性,并为规模化养殖场提供大肠杆菌病的防治参考。从山西省某规模化肉鸡养殖场采集病死鸡病料,进行大肠杆菌的分离培养、生化鉴定、药敏试验、致病性试验。结果表明:分离到1株血清型为O2的致病性大肠杆菌,分离菌对头孢类、喹诺酮类等8种药物耐药,对妥布霉素、阿米卡星高敏,对强力霉素、氧氟沙星中敏。结论:分离株肉鸡源大肠杆菌具有多重耐药性和较强的致病性,季节交替要加强鸡场饲养管理。     

鸡源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

为探明泰州地区鸡源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,对13株分离自泰州地区的鸡源大肠杆菌进行ESBLs检测,并采用微量肉汤稀释法测定不同药物对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的最小抑菌浓度(MIC).结果显示,13株分离菌中有5株被确定为产ESBLs菌株,阳性率为38.5%.产ESBLs菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性极其严重,耐药率明显高于非产ESBLs菌,二者对氨苄西林的耐药率分别为100%和62.5%,对头孢噻呋的耐药率分别为100%和12.5%,对头孢曲松的耐药率分别为80%和20%,产ESBLs菌对其他抗菌药物的耐药率也明显高于非产ESBLs菌.氨苄西林与舒巴坦(2:1)联用与单用氨苄西林相比,对产ESBLs菌的MIC值降低至单用氨苄西林时的1/16~1/8,但对非产ESBLs菌的MIC值没有明显变化.氨苄西林与阿米卡星(1:1)联用与单用两者中的任何一种相比,对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的MIC值均降低至单药时的1/16~1/2.结果表明,临床可选择β-内酰胺酶类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂的混合制剂来治疗产ESBLs鸡大肠杆菌的感染,也可尝试将不同种类、不同作用机理药物联合应用来治疗鸡大肠杆菌感染,尤其是耐药性鸡大肠杆菌感染.     

我国5省区部分猪、鸡源产ESBLs沙门菌的耐药差异及MLST流行特征

为了解不同地区猪鸡源沙门菌的流行分布和耐药特征，采用PCR法、药敏纸片法、微量肉汤稀释法及Bionumerics和SPSS软件等，对来自我国安徽、浙江、山东、新疆、江苏5省区的沙门菌进行血清型鉴定、ESBLs表型和基因型检测、药物敏感性试验以及数据处理。结果显示，85株沙门菌共鉴定出15种血清型；分离出25株(29.4%)产ESBLs菌株，猪源产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactam, ESBLs)沙门菌检出率(4.7%)远低于鸡源(54.8%)(P<0.01);产ESBLs沙门菌对7种抗菌药的耐药率显著高于非产ESBLs的菌株(P<0.01);85株沙门菌中基因型检测结果为：TEM型44.7%(38/85),CTX-M型12.9%(11/85),OXA型10.6%(9/85),SHV型9.4%(8/85),有基因型共存现象；产ESBLs沙门菌中有19株携带4种耐药基因，相关性达到76%;各省分离菌株对氨苄西林、庆大霉素、大观霉素、头孢噻呋、四环素、头孢他啶的耐药率有极显著差异(P<0.01),对恩诺沙星的耐药率有显著差异(P<0....     

新疆部分地区肉牛源沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

了解新疆部分地区表观健康肉牛沙门菌带菌状况及分离株的耐药性,为沙门菌的防控及合理用药提供科学依据。采用传统培养基培养、生化鉴定与PCR相结合的方法对新疆部分地区肉牛养殖场采集的753份肛拭子进行沙门菌的分离鉴定,并采用微量肉汤稀释法对分离株进行药敏试验。结果显示,共分离到沙门菌阳性菌株63株,总污染率为8.37%(63/753);63株沙门菌分离株对10种抗菌药物表现出不同程度的耐药性,对甲氧苄啶、氯霉素、四环素、磺胺异恶唑、链霉素、氨苄西林、阿莫西林、诺氟沙星、环丙沙星、氟苯尼考的耐药率依次为97.4%、95.7%、74.7%、61.5%、54.2%、29.9%、45.5%、16.6%、14%和11.2%。结果表明,新疆部分地区表观健康肉牛存在一定程度的沙门菌污染,沙门菌分离株耐药状况较为严重。     

腹泻仔猪肠道沙门氏菌耐药性研究

为了解贵州省规模化养殖场腹泻仔猪肠道沙门菌耐药表型与耐药基因型相关性,本试验采集了贵州省7个规模化养猪场的腹泻仔猪肠道样本进行沙门菌分离鉴定,并对分离的沙门菌用药敏纸片法进行耐药表型分析,利用PCR方法对分离菌进行耐药基因扩增。结果显示:共分离鉴定沙门菌21株;药敏试验表明所鉴定的沙门菌对抗菌药物的耐药率从高到低依次是卡那霉素、磺胺异口恶唑和诺氟沙星等,且均为多重耐药株,耐药种类达8种以上;耐药基因与耐药表型分析结果显示分离的沙门菌β-内酰胺类耐药基因与耐药表型符合率高达100%,喹诺酮耐药基因与耐药表型符合率为62.5%,氨基糖苷耐药基因符合率为73.3%,磺胺类耐药基因符合率81.8%。研究结果对合理使用药物控制仔猪沙门菌感染提供了理论依据。     

禽源肠炎沙门菌的分离鉴定及耐药性与致病性分析

【目的】为合理防控肠炎沙门菌感染,本试验针对四川4个地区禽源肠炎沙门菌的感染情况开展研究。【方法】通过细菌分离培养、生化试验及分子学方法进行细菌分离鉴定;进一步通过K-B法检测分离菌对14种抗菌药物的敏感性,并对分离菌进行耐药基因、毒力基因及致病性研究。【结果】细菌分离培养结果显示,分离菌符合沙门菌的培养特性,镜检为革兰氏阴性短杆菌,生化鉴定结果均符合沙门菌生化特性。沙门菌特异性毒力靶标基因invA和肠炎沙门菌特异性毒力靶标基因sdfI PCR扩增结果显示,获得大小分别为571和304 bp的目的条带,与预期大小相符,确认分离到10株肠炎沙门菌,总分离率为2.8%(10/361)。药敏试验结果显示,分离菌对氨基糖苷类、磺胺类、多肽类抗菌药耐药率较高;氨基糖苷类药物中,对庆大霉素和链霉素的耐药率分别为50%(5/10)和70%(7/10);磺胺类药物中,对复方新诺明和磺胺异噁唑的耐药率分别为40%(4/10)和100%(10/10);多肽类药物中,对多黏菌素B耐药率达90%(9/10);分离菌对喹诺酮类药物均表现敏感,对头孢类、β-内酰胺类和四环素类较敏感。分离菌普遍存在多重耐药现象,1...     

肉鸡产业链中沙门菌流行情况及其耐药性

为了了解食源性病原沙门菌在肉鸡产业链中的流行情况及其耐药性现状。本研究从上海某肉鸡屠宰加工企业分别采集待宰肉鸡、屠宰胴体和市售鸡肉样品388、200、127份,并参照GB/T4789.4-2010和PCR法进行沙门菌的分离鉴定。结果显示,共获得沙门菌73株。待宰肉鸡、屠宰胴体和市售鸡肉分别获得沙门菌9、48和16株,分离率依次为2.32%、17.5%和8.66%。采用微量肉汤稀释法测定分离菌株对12种抗菌药物的敏感性。药敏结果显示,所有菌株至少耐两种药物。其中对复方新诺明和多西环素的耐药率最高,分别为100%和95.89%;头孢唑啉、阿莫西林/克拉维酸、氯霉素、氨苄西林、萘啶酸的耐药率也均超过了40%,而对头孢噻呋、头孢曲松、庆大霉素、美罗培南的耐药率相对较低。结果表明,该地区肉鸡源沙门菌的耐药情况较严重,亟需加强养禽业抗菌药物的合理应用;同时沙门菌流行情况也对改进肉鸡屠宰加工工艺,降低沙门菌的污染提出了要求。     

河北省保定地区雏鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性检测

为了有效防控雏鸡白痢沙门菌病,试验自保定某蛋种鸡场疑似为鸡沙门菌病雏鸡采取肝脏病料进行细菌的分离培养、生化鉴定、鸡白痢沙门菌多价血清学鉴定及沙门菌inv A基因PCR鉴定,并对分离菌进行致病性检测及对7种抗菌药物的耐药性检测。结果表明,10株分离菌的形态特征、生化特性、血清学鉴定结果符合鸡白痢沙门菌的特征,说明从病死雏鸡组织中分离出的细菌为鸡白痢沙门菌。沙门菌inv A基因PCR扩增出373 bp目的片段,进一步证实分离菌为鸡沙门菌。用分离菌株接种雏鸡,其死亡率高达90%,表明该菌株有很高的致病性。10株分离菌株对阿莫西林和青霉素耐药率达100%,对阿齐霉素的耐药率达90%,而对阿米卡星、头孢唑林和庆大霉素耐药性较弱、对氧氟沙星较为敏感。3耐菌株多重耐药比例为42.86%,4耐菌株多重耐药比例为57.14%,5耐菌株多重耐药比例为71.43%,说明雏鸡沙门菌分离株对所试抗菌药物均表现出不同程度的耐药性,且表现出多重耐药现象。本试验为鸡白痢沙门菌病的防治提供参考。