海南吊罗山原始林区抗香蕉枯萎病土壤放线菌的分离及田间防治效果试验

为了从热带原始雨林土壤中筛选得到抗香蕉枯萎病的高效生防放线菌。采用平板对峙培养,盆栽防效和田间防效试验等方法,从海南吊罗山原始林区土壤样品分离的385株放线菌中筛选出了16株对香蕉枯萎病菌具有拮抗活性的放线菌,其中DL-28和DL-24菌株具强抑菌活性。盆栽防治试验结果表明：接种100天后,菌株DL-28和DL-24对香蕉枯萎病的平均防治效果分别达83.65%和76.51%。田间防治试验结果表明;香蕉定植7个月后,菌株DL-28和DL-24对香蕉枯萎病的平均防效达46.5%和60%。     

荆芥茎枯病拮抗木霉菌筛选及其田间防效评价

通过室内对峙培养方法,从16株候选木霉菌中筛选出对荆芥茎枯病菌有较强抑制活性的绿色木霉M3和Tv04-2菌株,抑菌率分别高达83.2%和78.2%;田间试验发现,M3菌株对荆芥茎枯病害的田间防效明显高于Tv04-2菌株.结果表明,本研究筛选出的绿色木霉M3菌株具有理想的生防潜力,可作为防控荆芥茎枯病害的候选生防菌.     

烟草青枯病和黑胫病拮抗细菌的筛选、鉴定及防效研究

筛选对烟草青枯病和黑胫病具有良好防效的生防菌株,为烟草根茎类病害的有效防控提供生防资源。从发病烟株根际土壤中分离细菌,采用平板对峙法和滤纸片法测定分离菌株对烟草青枯病菌和黑胫病菌的抑制活性,基于盆栽验证法检测高活性菌株对烟草青枯病和黑胫病的防治效果,通过16S rDNA通用引物对高活性拮抗菌株进行分子生物学鉴定,同时选用9对特异性引物对高活性菌株的促生长和抑菌活性进行PCR检测。共筛选出2株对烟草青枯病和黑胫病均有防治效果的拮抗菌株LF-1和LF-2,经分子生物学鉴定LF-1为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,LF-2为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。室内活性试验结果表明,菌株LF-1、LF-2对烟草青枯病菌抑制率分别为31.16%、56.98%,对烟草黑胫病菌抑制率分别为64.44%、72.44%;盆栽试验结果表明,菌株LF-1对烟草青枯病和黑胫病的防效分别为69.54%和65.49%,菌株LF-2对烟草青枯病和黑胫病的防效分别为72.49%和68.32%。菌株LF-1和LF-2对烟草根茎类病害具有较好的生防效果,在烟草根茎类病害防控中应用前景广阔。     

辣椒品种对疫病的抗性研究(Ⅰ)不同互作中的水解酶活性及其与抗性的关系

研究了不同抗性的辣椒对疫霉菌侵染反应中的抗性表现及水解酶活性的变化。结果表明:辣椒对疫病的抗性表现为抗病菌扩展,β-1,3-葡聚糖酶对抗病菌在植物体内扩展起到积极作用,抗、感品种在接种疫霉菌后,β-1,3-葡聚糖酶活性均显著增加,抗、感品种增强的速度和数量差异很大。几丁质酶活性虽有所增加,抗、感品种差异不大,其在抗疫病扩展上的作用甚微。     

辣椒品种对疫病的抗性研究（I）不同互作中的水解酶活性及其与抗性的关系

研究了不同抗性的辣椒对疫霉菌侵染反应中的抗性表现及水解酶活性的变化。结果表明：辣椒对疫病的抗性表现为抗病菌扩展,β-1,3-葡聚糖酶对抗病菌在植物体内扩展起到积极作用,抗、感品种在接种疫霉菌后,β-1,3-葡聚糖酶活性均显著增加,抗、感品种增强的速度和数量差异很大。几丁质酶活性虽有所增加,抗、感品种差异不大,其在抗疫病扩展上的作用甚微。     

辣椒内生菌的分离及拮抗菌的筛选与鉴定

用稀释分离法从健康辣椒植株的茎、叶、果肉中共分离得到植物内生菌88株,其中细菌有65株,真菌有21株,放线菌2株.用平板对峙法从中筛选出内生菌003和X两株对辣椒疫霉病菌、辣椒绿霉病菌、辣椒炭疽病菌3种病原菌具有明显拮抗作用的菌株,得出抑制率为34.80％～48.0％.根据菌株形态、生理生化特性对菌株003和菌株X进行了初步鉴定,结果显示菌株003和菌株X都为芽孢杆菌属(Bacillus).     

辣椒内生菌的分离及拮抗菌的筛选与鉴定

用稀释分离法从健康辣椒植株的茎、叶、果肉中共分离得到植物内生菌88株,其中细菌有65株,真菌有21株,放线菌2株。用平板对峙法从中筛选出内生菌003和X两株对辣椒疫霉病菌、辣椒绿霉病菌、辣椒炭疽病菌3种病原菌具有明显拮抗作用的菌株,得出抑制率为34.80%～48.0%。根据菌株形态、生理生化特性对菌株003和菌株X进行了初步鉴定,结果显示菌株003和菌株X都为芽孢杆菌属(Bacillus)。     

土壤拮抗细菌的分离与筛选

为了获得高效广谱的原始拮抗细菌菌株用于油茶病害的防治,并探索其生物防治效果。从土样中分离到223株细菌,采用平板对峙培养法、发酵产物活性测定进行拮抗菌筛选。结果表明：以油茶炭疽病菌和根腐病菌为指示菌,通过平板对峙培养初步选出抑菌效果较好的菌株21株,其抑菌圈宽度在5.0~12.5 mm,占分离到的细菌总数的9.9%,其中菌株Z26抑菌效果最好;复筛表明21个菌株发酵液对供试6种植物病原菌有不同程度抑制作用,其中有8株对油茶炭疽病菌抑菌效果良好,有4株对油茶根腐病菌抑菌效果良好,其抑菌圈宽度≥10.0 mm,分别占被测菌的38.1%和19.0%,菌株Z26抑菌效果最好;发酵产物活性测定表明6个菌株的发酵液能完全抑制油茶炭疽病菌生长,效果明显,过滤液抑菌率为33.3%~58.3%,效果不明显,抑菌率超过50.0%的只有Z17、Z26 2个菌株。由此可知,菌株Z17和Z26对油茶病害有较好的抑菌效果,具有一定的生防潜力,可作为油茶病害的备选拮抗菌株开展深入研究。     

库尔勒香梨腐烂病拮抗菌的筛选及其防效测定

筛选对梨腐烂病菌具有抑菌活性的拮抗细菌,明确其防病效果,为香梨树腐烂病的生物防治提供依据。从各种原料的果蔬酵素液和香梨枝条组织中分离细菌,采用平板对峙培养初筛和细菌发酵液复筛,测定分离菌株对香梨腐烂病菌(Valsa ceratosperma)的抑菌活性,从中筛选抑菌作用显著的拮抗菌株,通过离体枝条法测定其防病效果。筛选出对V. ceratosperma具有抑菌活性的12个细菌菌株,抑菌率为54.72%~86.43%。离体枝条法测定结果表明,分离自酵素液的拮抗细菌XG-FX22和G-FX12菌株的保护性防效分别达到了77.71%和65.29%,治疗性防效分别达到了66.71%和66.14%,防病效果显著高于其他菌株。通过形态学及16S rDNA序列分析,将G-FX12和XG-FX22菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。研究结果为香梨腐烂病生防资源的发掘和病害的有效防控提供科学基础。     

海洋放线菌对几种蔬菜病原菌抗菌作用的测定

从连云港海域采集海水、海泥、漂浮物、海洋动物及海洋植物样品,分离得到62株海洋放线菌.采用平板对峙培养法和打孔法测定放线菌不同菌株及其发酵液对9种蔬菜病原真菌的菌丝生长和孢子萌发以及对番茄青枯病菌的抑制作用.结果表明,放线菌菌株BM_2、T-15、T-1-1、D-3、XS-X5-3、M-7和X-7对供试的番茄早疫病菌(Alternaria sola-ni)、茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、芹菜斑枯病菌(Septoria apii)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.lycopersici)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、油菜菌核病菌(Scleroti-na sclerotiorum)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsi-ci)、茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)和番茄青枯病菌(Ralstonia solanacarum)具有明显的抑制作用,同时海洋放线菌的发酵液对番茄早疫病菌分生孢子的萌发具有较强的抑制作用.其中BM-2菌株的抑菌作用最强.     

芽孢杆菌Pb-4菌株鉴定及其抑菌活性的研究

拮抗菌Pb-4是一株对多种植物病原菌有较强抑制作用的菌株。为了明确拮抗菌Pb-4的分类地位和抑菌机理,通过形态观察、生理生化特征和16S rRNA基因序列同源性比对及系统发育树分析,对Pb-4菌株进行鉴定。并采用平板对峙培养法测定Pb-4菌株的抑菌谱,显微观察其抑菌作用,采用硫酸铵沉淀和乙醚、苯提取得到抑菌活性物。通过加热处理,明确高温对Pb-4菌株抑菌活性的影响。结果表明,Pb-4菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌;Pb-4菌株对番茄枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、青椒枯萎病菌、辣椒疫霉病菌、苹果腐烂病菌均有抑制作用,其抑菌活性具有广谱性。该菌菌液能明显抑制枯萎病菌孢子的萌发,并对病菌菌丝有致畸作用;对番茄枯萎病菌的抑制生长率达93%,经100,121℃高温处理后的抑菌活性分别是未处理菌液的98.9%和80.1%。从菌液中提取的蛋白、酶、抗生素类活性物质对枯萎病菌的生长繁殖均有很强的抑制效果。为Pb-4菌株在病原菌防治中的广泛应用提供强有力的理论依据。     

水杨酸诱导辣椒抗疫病生化机制的研究

对水杨酸（SA）处理及其挑战接种辣椒疫霉菌的4个抗性不同的辣椒品系体内木质素含量和多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的测定结果表明：SA诱导的供试品系与未经诱导的相同品系相比,木质素含量增高,PPO、POD、PAL活性增强,其中木质素的含量与抗病性呈显著正相关;挑战接种后两者相比,SA处理的供试材料的木质素含量和PPO、POD、PAL活性的增强幅度更大,其中抗、耐病品系的增加早且增加幅度高于感病、高感品系。值得注意的是,经SA诱导的各供试品系接种后木质素含量与抗病性也呈显著相关。木质素含量与相关酶活性的上述变化趋势与SA对各品系的诱抗效果完全吻合。     

氨基寡糖素田间防治辣椒疫病及体外抑菌试验

研究了氨基寡糖素田间防治辣椒疫病和体外对辣椒疫霉(Phytophthoracapsici)的抑菌作用,为其在生产上的应用提供依据。田间喷雾使用氨基寡糖素对辣椒疫病有一定的防效,40mg/L氨基寡糖素对辣椒疫病的防效高达73.2%。采用生长速率法在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)上研究了氨基寡糖素体外对辣椒疫霉菌丝生长的影响,结果表明氨基寡糖素可以抑制辣椒疫霉的菌丝生长,有效中浓度EC50为100mg/L。在无菌水中氨基寡糖素可以抑制辣椒疫霉新生菌丝上孢子囊的形成以及静止孢的萌发,有效中浓度EC50分别为0.64mg/L和41.84mg/L。     

生防菌A4的鉴定及其对樱桃番茄采后主要病害的抑制作用

依据形态学、分子生物学以及菌株的生理生化特征对菌株A4进行鉴定,并研究其对樱桃番茄采后病害的防治效果。结果表明：菌株A4为生防菌贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,其对樱桃番茄采后的重要致病菌灰霉菌（Botrytis cinerea）和扩展青霉菌（Penicillium expansum）均有抑制作用;平板对峙试验表明,贝莱斯芽孢杆菌A4对上述2种病原菌生长的抑制率分别高达66.56%和59.19%,预先接种浓度为1.0×109 CFU/mL A4菌悬液的樱桃番茄患病率分别降至14.67%和4.00%;扫描电镜显示,生防菌A4通过抑制病原菌的萌发和生长,降低病原菌的致病能力,减少病害的发生。本研究为生防菌贝莱斯芽孢杆菌的鉴定提供了参考,并为提高樱桃番茄采后病害的防治技术提供了新思路。     

辣椒疫霉菌粗毒素对辣椒种子发芽及幼苗生长特性的影响

辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）可对寄主植物产生致病性的毒素,使辣椒产生类似病原菌侵染引起的症状。将辣椒疫病病原菌粗毒素按10％,20％,30％,40％,50％,60％,70％,80％,90％,100％的体积比浓度,分别作用于未萌发和已萌发的辣椒种子,结果表明,辣椒疫霉菌粗毒素对辣椒种子发芽指数、辣椒幼苗株高、下胚轴长以及辣椒胚根的主根长、侧根长、侧根。数具有明显的抑制作用。通过主、侧根抑制率的比较,在同一浓度下,粗毒素对侧根的抑制作用大于主根。     

内生细菌TY-6对樱桃采后灰霉病菌的抑菌效果和定殖特性研究

为明确内生细菌对樱桃采后灰霉病菌的抑菌活性和定殖特性,本研究采用研磨法对樱桃果实内生细菌进行分离,并采用平板对峙法、针刺接种法、利福平抗性标记法和分子生物学手段对其离体抑菌活性、活体伤口定殖特性和系统发育树进行研究。结果表明,樱桃内生细菌TY-6对灰霉病菌具有良好抑菌活性,离体和活体抑菌效果分别为89.08%和79.18%,且在20℃和0℃下均可在樱桃果实伤口处稳定定殖,形成保护,稳定定殖后伤口处菌株数量分别为2.22×105CFU/g和1.15×105CFU/g;拮抗细菌TY-6经16S rRNA序列鉴定为Bacillus tequilensis。因此,拮抗细菌TY-6对樱桃采后灰霉病的防治具有良好的效果,可为樱桃采后病害微生物防治提供参考依据。     

一株生防细菌GB58的鉴定与抑菌能力测定

对从广东水稻土中获得能高效抑制植物病原菌的细菌GB58进行鉴定、抑菌广谱性测定,明确其潜在应用价值。采用平板对峙法测定GB58抑菌广谱性,并参照细菌系统鉴定方法,通过形态、生理生化、分子生物学手段鉴定菌株。抗菌广谱性试验结果表明：GB58对多达12种的植物真菌性病害和1种细菌性病害具有较好的拮抗作用。细菌常规鉴定试验结果显示：GB58为芽孢杆菌属,碳源利用分析表明GB58能够利用46种碳源物质以及耐酸耐盐,通过16S rRNA、gyrA序列进行系统发育分析,确定GB58为解淀粉芽孢杆菌。GB58是一株抗菌范围广,营养竞争能力强的生防细菌,具备适应华南酸性土壤复杂环境的繁殖和代谢能力。     

土传病害生防菌的分离筛选及鉴定

为了使蛋鸡粪有机肥兼有防治作物土传病害的多功能性。实验从安徽省农科院实验田及蛋鸡养殖场等环境中共分离出170 株真菌,首先将分离菌与辣椒炭疽病(Colletotrichum capsici)进行平板对峙实验,再通过复筛选出7 株菌,同时对该7 株菌进行抑菌谱、耐温实验和蛋鸡粪肥中增殖实验,效果较好的菌株最终进行分子生物学鉴定。结果表明：筛选出的菌株中编号为TCC53 对油菜菌核病和麦纹枯的抑菌率分别可达90.4%、82.3%,TCC157 对辣椒炭疽病和辣椒疫霉的抑菌率分别可达88.6%、71.2%,同时该两株菌均可在40℃以上生长。通过分子生物学鉴定得出TCC53 和TCC157 分别为棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)和皮落青霉(Penicillium crustosum)。皮落青霉和棘孢曲霉均为环境中常见真菌,生长快、不具有致病性,将其添加至蛋鸡粪有机肥中有望提高作物的抗病效果又可改善土壤结构的微生物肥料。