4种硝基呋喃类代谢物在青石斑鱼肌肉中的富集与消除规律

实验通过连续7 d投喂各含有100 mg·kg~(-1)呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃妥因的饲料,研究4种硝基呋喃药物在青石斑鱼(Epinephelus awoara)肌肉中的消除规律。采用超高效液相色谱串联质谱(UPLCMS/MS)检测青石斑鱼肌肉中的氨基脲(SEM)、3-氨基-2-恶唑基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)和1-氨基-2-内酰脲(AHD)的质量分数,并用内标法定量。结果表明,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在石斑鱼背肌的峰浓度最大值依次为1 104.10μg·kg~(-1)、781.09μg·kg~(-1)、679.75μg·kg~(-1)和437.18μg·kg~(-1)。4种硝基呋喃代谢物在石斑鱼肌肉组织中的消除规律大致相似。SEM、AHD、AOZ和AMOZ半衰期时间的长短顺序为23.90 d、23.10 d、22.35 d和21.00 d。SEM在肌肉中消除最慢。消除到第163天时,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在肌肉中的质量分数仍然高于液质检出限(0.5μg·kg~(-1))。建议硝基呋喃药物应禁止用于石斑鱼疾病的预防或治疗中。     

UHPLC-MS/MS测定罗非鱼中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定

为判断罗非鱼中硝基呋喃类代谢物残留量测定中不确定度的主要来源,本研究参照JJF 1059.1—2012《测量不确定度的评定与表示》等相关理论,采用农业部783号公告-1-2006的前处理方法进行样品处理,并根据公告中的结果计算公式建立相应的数学模型,对罗非鱼中硝基呋喃类代谢物残留量的测定结果中产生的各不确定度来源进行分析和计算。当硝基呋喃类代谢物的添加水平为1.00μg/kg时,4种硝基呋喃类代谢物结果可表示为:呋喃西林代谢物C_(SEM)为(0.989±0.168)μg/kg,k=2;呋喃妥因代谢物C_(AHD)为(1.009±0.165)μg/kg,k=2;呋喃它酮代谢物C_(AMOZ)为(0.991±0.169)μg/kg,k=2;呋喃唑酮代谢物C_(AOZ)为(0.986±0.180)μg/kg,k=2。研究表明,在确定的实验条件下,本方法的不确定度主要来自于标准溶液和内标溶液配制、标准曲线拟合和加标回收率。研究结果对实际操作中减少不确定度,提高检测结果的准确性和可靠性具有重要意义。     

液质质串联质谱法测定淡水及沉积物中硝基呋喃类代谢物

改进了淡水水体和沉积物中4种硝基呋喃代谢物呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)、呋喃西林代谢物(SEM)的高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。方法采用内标法定量,提高了定量的准确性。水及沉积物样品直接进行衍生化后乙酸乙酯提取,化合物采用Thermo C18(5.0μm,100mm×2.1mm)色谱柱进行分离,以0.1%甲酸/甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱。方法的线性范围为0.1~200ng/mL,r2≥0.999。空白水体在0.02、1.0、10.0ng/L 3个加标水平下的平均回收率为75.4%~82.7%,相对标准偏差(RSD)为3.2%~8.7%,检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.01ng/mL和0.02ng/mL。沉积物样品在0.3、1.0、10μg/kg 3个加标水平下,平均回收率为77.9%~93.6%,RSD为2.5%~7.8%,检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.1μg/kg和0.3μg/kg。该方法灵敏度高、选择性好,适用于实际淡水养殖环境水体和底泥中4种硝基呋喃代谢物呋喃唑酮代谢物的残留测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定凡纳滨对虾中的硝基呋喃代谢物残留

采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法,测定了凡纳滨对虾（Litopenaeus vannam ei）中氨基脲（SEM）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）、3-氨基-2-唑烷基酮（AOZ）和5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）4种硝基呋喃类代谢物。采用2-硝基苯甲醛作为衍生化试剂,氘、碳-13、氮-15同位素标记的SEM1-3C1-5N2、AHD1-3C3、AOZ-D4和AMOZ-D5为内标物,样品经衍生、乙酸乙酯提取、正己烷净化,以甲醇0.5 mmol.L-1乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱,8 m in可将4种目标化合物完全分离并测定。结果表明,4种待测物在0.4～20.0 ng.mL-1范围内线性关系良好（R〉0.999）,检出限为0.03～0.15μg.kg-1。在0.5μg.kg-1、1.0μg.kg-1和2.0μg.kg-13个水平上进行加标回收试验,平均回收率为92.0%～107.3%,RSD为3.1%～8.7%。采用该法参加FAPAS国际水平测试,获得了满意的结果。     

超高效液相色谱-同位素稀释串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留

建立了采用Oasia PRiME HLB固相萃取柱净化-超高效液相色谱-同位素稀释串联质谱法(UPLC-MS/MS)快速测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留的方法。样品加入同位素内标,超声衍生化后用乙酸乙酯超声提取,经Oasia PRiME HLB固相萃取柱一次性净化后上机检测,电喷雾-正离子多反应监测模式,内标法定量。该方法将测试时间缩短至4小时。结果显示,4种硝基呋喃类代谢物的检测限为0.01μg/kg,定量限为0.03μg/kg,在0.05~10ng/mL质量浓度范围内线性良好,4种硝基呋喃类代谢物相关系数r均大于0.999,5个添加浓度水平的平均回收率为88.5%~115.2%,相对标准偏差均小于8,说明该方法快速、准确并且重复性好。     

水产品中硝基呋喃类代谢物两种检测方法的比较

通过加标回收实验比较了水产品中硝基呋喃类代谢物检测方法GB 31656.13-2021和农业部783号公告-1-2006公告的差异。实验发现：GB 31656.13-2021中衍生时用0.5 mol/L盐酸,虾蟹样品的AHD有干扰,造成AHD回收率偏高;农业部783号公告-1-2006方法衍生时用0.2 mol/L盐酸,检测结果无干扰,四种硝基呋喃类代谢产物回收率均在正常范围,但对于虾蟹类产品需在加入0.2 mol/L盐酸的基础上再加入盐酸调节溶液pH值1～2才能保证好的衍生效果。     

淡水养殖用水中硝基呋喃代谢物残留量的UPLC/MS/MS检测方法

研究了淡水养殖用水中4种硝基呋喃代谢物:呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)、呋喃西林代谢物(SEM)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC/MS/MS)分析方法。以邻硝基苯甲醛作为衍生化试剂,D4-AOZ、D5-AMOZ、13C15N-SEM、13C-AHD作内标,用水解衍生的方法对样品进行处理。以乙腈和0.1%甲酸(含有0.5 mmol/mL乙酸铵)水溶液为流动相,采用梯度洗脱,4.5 min可将4种代谢物完全分离,进行定性和定量分析。加标回收率为75.1%～102%;本方法的检出限(LOD)为0.50μg/L。     

应用Thermo LC—MS／MS检测水产苗种中的硝基呋嘀类代谢物

应用Thermo LC-MS／MS检测140个水产苗种中呋哺唑酮（AOZ）、呋喃它酮（AMOZ）、呋喃西林（SEM）和呋喃妥因（AHD）等硝基呋喃类代谢物。结果表明，方法的检出限为0．25μg／kg，工作曲线的线性范围为0．25～20．0μg／L。在添加浓度为0．25—10．0μg/kg的范围内，AMOZ、SEM、AHD和AOZ的回收率分别在90．5％-102％、95．3％-99．6％、92．6％-98．6％、82．0％-105．6％之间，相对标准偏差均小于10％。苗种样品检出率AOZ：15％，SEM：4％。AMOZ及AHD均未检出。在网箱养殖中的苗种检出比率要大于鱼池苗种检出比率。     

气相色谱法测定水产品中4种三唑类农药残留

本文建立了一种水产品中4种三唑类农药残留的固相萃取-气相色谱检测方法,4种三唑类农药包括三唑酮、三唑醇、环丙唑醇和联苯三唑醇。采用乙腈提取样品,石墨化碳黑-弗罗里硅土复合柱净化,丙酮-正己烷(1∶9,V/V)溶液洗脱,以及利用气相色谱法测定和外标法定量。研究显示,三唑酮在1.25~125.00 ng/m L,三唑醇、环丙唑醇和联苯三唑醇在25~2 500 ng/m L范围内响应值与质量浓度的线性关系良好,相关系数为0.999 7~0.999 8。当添加浓度分别为三唑酮0.4~8.0μg/kg,三唑醇、环丙唑醇和联苯三唑醇8~160μg/kg时,鳗鲡、日本对虾、鲍鱼和龙须菜加标样品的日内和日间平均回收率为78.8%~95.0%,相对标准偏差为1.48%~11.4%;三唑醇、环丙唑醇和联苯三唑醇检出限均为4.0μg/kg,最低定量限均为8.0μg/kg;三唑酮的检出限为0.2μg/kg,最低定量限为0.4μg/kg。研究结果表明,本文建立的固相萃取-气相色谱检测方法可以有效检测出水产品中4种三唑类农药的残留。     

利用LC-MS/MS辅助优化GICA对硝基呋喃类代谢物的快速检测

针对硝基呋喃类代谢物的胶体金免疫层析法(GICA)检测方法存在的缺陷,实验以硝基呋喃类代谢物实际阳性样本和模拟阳性样本为研究对象,选择液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)辅助优化GICA代谢物的水解和衍生条件前处理步骤,建立了一种快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物的方法.结果显示最佳实验条件为:盐酸浓度0.35 mol...     

酶联免疫法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物、氯霉素及氟苯尼考

应用特异性强的间接酶联免疫法,同时检测4种硝基呋喃类代谢物、氯霉素(CAP)和氟苯尼考(FF),建立快速分析水产品中6种药物残留量的方法.样品用盐酸进行消化,再由乙酸乙酯提取,使用酶联免疫试剂盒进行检测.实验结果显示,6种分析物均在其线性范围内,线性系数均大于0.995.在加标浓度为0.1、0.5和1.5μg/kg的加...     

酶联免疫法测定水产品中呋喃唑酮代谢物残留量

为测定水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)的残留量,采用2-硝基苯甲醛进行衍生,乙酸乙酯提取AOZ。通过样品中残留的AOZ和酶标板上预包被的抗原竞争抗体,加入酶标二抗后与底物显色,测得样品中AOZ的残留量。测定了四组水产品中AOZ的残留量,测定浓度均小于1μg/kg,结果为阴性。向空白样品中分别添加0.5μg/kg、1.5μg/kg和2μg/kg的AOZ标准品,回收率为90%、109%和101%。因此得出结论:采用酶联免疫法测定水产品中AOZ残留量操作简单,检测时间短,结果准确,是一种适合大批量水产样品筛选的检测方法。     

Application of ELISA-based kit for detecting AOZ and determining its clearance in eel tissues

Furazolidone, an antibacterial drug that was once widely used in the livestock industry and aquaculture, is now prohibited in numerous countries. It is difficult to detect residual furazolidone because it is readily metabolized in animal tissues but, by using and liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry, its metabolite, 3-amino-2-oxazolidinone (AOZ) can be detected. Here we describe the validity of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit to detect AOZ in Japanese eel Anguilla japonica tissue. ELISA is capable of detecting AOZ at 1.0 μg/kg in an eel sample with excellent accuracy and precision. Our results show that ELISA is suitable for regulatory purposes and for studying the fate of AOZ residues in eel treated with furazolidone. To measure the persistence of AOZ in eel tissues, eels (1.4–6.5g) were immersed in tanks containing 2 and 10 mg furazolidone/L for 3 h, and then maintained in a tank supplying well water for the next 160 days. The half-lives of AOZ, calculated from the linear terminal part of the excretion curve, were 25.0 days in muscle and 21.6 days in liver from fish exposed to 2 mg/L furazolidone. In the eels treated with 10 mg/L furazolidone, by contrast, high levels of AOZ were detected in liver and muscle, but the half-lives of AOZ were similar to those in fish treated with 2 mg/L furazolidone. The half-lives of AOZ in eel tissues were prolonged by the condition of low water temperature.     

超高效液相色谱串联质谱法对水产品中硝基呋喃代谢物的测定

建立了使用Waters UPLC Xevo TQ超高效液相色谱串联质谱仪检测水产品中4种硝基呋喃代谢物的分析方法。匀浆后的样品在酸性环境下水解,并用2-硝基苯甲醛衍生16h,经磷酸氢二钾提取,LMS固相萃取小柱净化后,在三重四极杆多反应监测模式下进行测定。方法采用同位素内标法定量,四种代谢物的检出限(LOD)均低于0.25μg·kg-1,线性范围在0.5μg·L~(-1)到10μg·L~(-1)间,相关系数大于0.99。在0.5、1.0和5μg·kg-1浓度下分别进行添加回收试验(n=5),回收率在75.2%~123.3%之间,相对标准偏差(RSD)小于9.4%。     

Rapid and sensitive determination of furaltadone metabolite 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone by biotin–streptavidin-amplified time-resolved fluoroimmunoassay

A competitive time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) using a biotin–streptavidin system was developed for the detection and quantification of the furaltadone metabolite 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone (AMOZ) in aquatic tissues. AMOZ-bovine serum albumin was coated to a solid phase and then competed with a free nitrophenyl derivative of AMOZ (2-NP-AMOZ) in standards or samples for binding with biotin-anti-AMOZ-ovalbumin polyantibody. Later, the complex was recognized by europium-labelled streptavidin, which was used as a novel tracer to amplify the signal, and it also reacted faster than europium-labelled second antibody in traditional TRFIA. After optimizing the reaction conditions, the method showed high sensitivity and specification to 2-NP-AMOZ with a half maximal inhibitory concentration of 0.190 μg/l and a sensitivity of 0.019 μg/l with a working range from 0.025 to 10 μg/l. The data from fish and shrimp samples indicated that the limit of detection was 0.021 μg/kg, and the recovery rates were 84.1–107.0% and 80.9–98.4%, respectively, with an average RSD below 10%. High correlation rates were observed in TRFIA, high performance liquid chromatography and universal enzyme-linked immunosorbent assay methods. The experiment above confirms that biotin–streptavidin-amplified TRFIA could be an ultrasensitive and accurate tool for screening large numbers of aquatic products for the determination of AMOZ residues.     

土霉素在黑鲷体内的药物代谢动力学研究

首次报道了黑鲷口服土霉素的药物代谢动力学特征，用高效液相色谱法测定组织中的药物含量，药物在肌肉，血液，肝脏中的平均回归率分别为８５.61%,85.38%,82.005,该方法的检测限可达0.01μg/g，黑鲷１次口服剂量为７５mg/kg的土壤素后，其血液药物浓度－时间数据符合一室开放动力学模型，吸收速率常数（ka)为０.296/h，达峰时间（Ｔamx)为１０.635h,峰浓度（Ｃmax)为１.398μg/ml, 分布半衰期（Ｔ１／２a）为２.339h ,消除半衰期(T1/20β）为46.663h，药时曲线下面积（ＡＵＣ）为１１0.25mg/L.h，黑绸口服药物０.5h后在血液，肥肉，肝脏，肾脏４种组织中就可以检测到药物的存在，药物在１６h的采样点浓度达最高，分别为1.68μg/ml,1.68,2.52,6.77μg/g。     

呋喃唑酮代谢物AOZ在斑点叉尾(鲴)体内组织分布与消除规律研究

研究了在池塘网箱养殖模式下,平均水温为30.6℃,以100 mg/kg鱼体重的剂量投饲斑点叉尾鲴(Ietalurus punetaus)苗种(95±20.9)g含呋喃唑酮的药饵,连续5d,每天2次.采用高效液相色谱串联质谱(HPLC-ESI/MS/MS)法分析了呋喃唑酮主要代谢产物3-氨基-2-噁唑烷酮(3-amina...     

养殖用水中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的测定

建立了用高效液相色谱紫外、荧光检测器同时检测养殖用水中的孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的分析方法。孔雀石绿和结晶紫用紫外检测器588 nm波长检测;隐色孔雀石绿和隐色结晶紫用荧光检测器检测,激发波长:265 nm,发射波长:360 nm。孔雀石绿和结晶紫的线性范围5.0~2500μg/L;隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的线性范围1.0~1 000μg/L,四种物质的检出限均为0.5μg/L,回收率均在70%以上,RSD15%,此方法也可用于地下饮用水中孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的检测。