RAPD—PCR及其在检疫性害虫鉴定中的应用

ＲＡＰＤ－ＰＣＲ及其在检疫性害虫鉴定中的应用安榆林朱宏斌焦国尧（南京动植物检疫局２１０００９）ＲＡＰＤ－ＰＣＲ或称ＲＡＰＤ，即随机扩增的多态性ＤＮＡ聚合酶链式反应技术，是近年来发展起来的一项能有效检测种及种下一级ＤＮＡ多态性的方法。它是在ＰＣＲ反应原...     

杀虫剂抗性监测技术研究进展

本文介绍了生物化学技术和分子生物学技术在害虫抗性监测中的应用进展。免疫盘分析法和斑点法能准确地监测具Ｅ４酯酶扩增和不敏感性乙酰胆碱酯酶的抗性频率,多种建立在ＰＣＲ技术基础之上的抗性基因监测法也显示了巨大的应用潜力。     

检疫性蚧虫的现状与对策

本文从形态,分类,分布,截获概况,植物检疫措施等方面综述了检疫性蚧虫的国内外研究进展和现状,针对存在的若干问题,从加强基础研究、改进蚧虫标本制作技术、在分类鉴定上应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术和多媒体专家系统、筛选经济有效的化学杀虫剂和改进施药方法、建立生态控制技术体系等方面提出了发展对策。     

烟草环斑病毒PCR产物的克隆及部分序列分析

将ＴＲＳＶ的ＰＣＲ产物与ｐＧＥＴ－ＴＥａｓｙＶｅｃｔｏｒ连接,克隆到大肠杆菌ＴＧ１中,得到白色菌落,重组质粒通过酶切鉴定、ＰＣＲ扩增和部分序列分析,表明ＴＲＳＶ的ＰＣＲ产物确实插入了质粒,并已克隆到大肠杆菌中,测序列２４０个碱基,与资料显示的序列相比较,同源性达９２．５％,可用于解决病毒检疫应用中阳性对照有扩散危险的疑难问题。     

应用聚合酶链反应技术检测梨火疫菌的研究

应用梨火疫菌ＰＣＲ技术可以准确，快速地检测出梨火疫菌潜伏侵染的样品，检出样品中梨火疫菌的最低带菌量为５０个细菌，未发现它与其它植病细菌有交叉反应，从ＰＣＲ扩增、电泳分离到获得最后结果仅需８小时。此法适宜对进口苗木、接穗和水果上的梨火疫菌快速检疫和对引种苗圃和果园里梨火疫病发生进行监测。     

RT－PCR检测烟草环斑病毒的研究

本文报道应用ＲＴ一ＰＣＲ技术检测烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）的结果。根据ＴＲＳＶＲＮＡ－２序列３末端非编码区设计、合成引物一１和引物一２；用ＴＲＳＶＲＮＡ作模板，引物一２作引物，反转录合成ｃＤＮＡ，并以此作模板进行ＰＣＲ扩增，５～６小时内可得到结果，检测粗提液中ＲＮＡ灵敏度达４００ｐｇ，并且可以直接从受侵染的叶片汁液中检出ＴＲＳＶ，为口岸快速检疫推出一个更灵敏、准确的分子生物学新方法。值得推广应用。     

RT—PCR检测烟草环斑病毒的研究

本文报道应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）的。根据ＴＲＳＶＲＮＡ－２序列３末端非编码区设计，合成引物－１和引物－２；用ＴＲＳＶＲＮＡ作模板，引物－２作引物，反转录合成ｃＤＮＡ，并以此作模板进行ＰＣＲ扩增，５－６小时内可得到结果，检测粗提液中ＲＮＡ灵敏度达４００ｐｇ，并且可以直接从受侵染的叶片汁液中检出ＴＲＳＶ，为口岸快速检测疫推出一个更灵敏、准确的分子生物学新方法。值得推广应用。     

RT—PCR检测南方菜豆花叶病毒

根据南方菜豆花叶病毒（ＳＢＭＶ）两株系Ｂ和Ｃ的核酸序列设计两对引物，利用ＲＴ－ＰＣＲ可以特异地区分纯化的和０．２ｇ病叶中的两株系，ＲＴ－ＰＣＲ检测ＳＢＭＶ－Ｂ的灵敏度为１０ｐｇ。     

利用RK2的parDE片段提高重组质粒在生防菌成团泛菌中的稳定性

用ＰＣＲ方法将广宿主范围质粒ＲＫ２中控制稳定性的片段ｐａｒＤＥ克隆到ｐＧＥＭ┐Ｔ载体上,然后插入到分泌表达载体ｐＥｘＳｅｃ１的ＢａｍＨＩ切点上,得到两个新载体ｐＺＬ２和ｐＺＬ３,其中ｐａｒＤＥ的转录方向分别与Ｔ７启动子相同和相反。经酶切物理图谱分析和ＰＣＲ扩增验证后,将ｐＺＬ２和ｐＺＬ３分别电击转化到成团泛菌３０８Ｒ中,在无抗生素的ＬＢ培养基中生长１００代后仍１００％地保留在细胞内。新质粒在植物叶面生长的细胞内也１００％稳定     

应用基因工程创造抗黄矮病毒转基因小麦新种质

应用花粉管通道法和基因枪法将大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系外壳蛋白基因导入小麦栽培品种，获得了抗大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系的转基因小麦株系（文献检索证明世界上无任何其它抗病毒转基因小麦报道）。转基因植株经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，证明ＣＰ基因可稳定遗传到Ｔ３代；经Ｗｅｓｔｅｒｎ测定，证明ＣＰ基因在转基因小麦中已经得到表达；经带毒蚜温室和田间人工接种试验，获得了一些抗病性明显的后代，并得到了ＥＬＩＳＡ验证     

应用基因工程创造抗黄矮病毒转基因小麦新种质

应用花粉管通道法和基因枪法将大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系外壳蛋白基因导入小麦栽培品种，获得了抗大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系的转基因小麦株系（文献检索证明世界上无任何其它抗病毒转基因小麦报道）。转基因植株经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，证明ＣＰ基因可稳定遗传到Ｔ３代；经Ｗｅｓｔｅｒｎ测定，证明ＣＰ基因在转基因小麦中已经得到表达；经带毒蚜温室和田间人工接种试验，获得了一些抗病性明显的后代，并得到了ＥＬＩＳＡ验证     

不同寄主植物上烟蚜DNA多态性的RAPD-PCR分析

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术研究了桃树,油菜和烟草上烟蚜的ＤＮＡ多态性。结果表明,用相似性指数和Ｎｅｉ的遗传距离及聚类分析对本研究筛选的三个引物ＯＰＸ－０４,ＰＯＸ－０６和ＯＰＸ－１９的扩增结果进行比较,除ＯＰＸ－０６的Ｄ值聚类可将各寄主植物上的烟蚜分开外,其余均可将样本分为两类,即来自桃树的烟蚜和来自油菜,烟草上的烟虾。     

利用RAPD-PCR技术区分4种仓虫幼虫的初步研究

以花斑皮蠹、谷斑皮蠹、黑毛皮蠹和印度谷螟等４种仓储害虫的幼虫为材料，借用小麦ＤＮＡ提取方法提取了虫体的ＤＮＡ，用Ｅ_１２、Ｅ_１５、Ｅ_１８、Ｇ_１０和Ｇ_１４等５种引物采用ＲＡＰＤＩ程序进行扩增。电泳检测结果显示，５种引物均产生可用以区分这４种仓虫的扩增谱带。从ＤＮＡ提取到获得结果，只需４８ｈ。试验表明ＰＣＲ技术在昆虫尤其是幼虫的快速鉴定有应用前景     

RT-PCR检测李坏死环斑病毒的研究

为了从植物组织中快速检测李坏死环斑病毒９ＰＮＲＳＶ）,根据该病毒ＲＮＡ３序列设计引物,对感病和健康组织总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ,结果从感病组织中扩增出了大约４５０ｂｐ的目的片段,而健康组织中无此扩增带。将此ＰＣＲ产物连接到ｐＧＥＭ－Ｔ－ｅａｓｙ载体也能转化大肠杆菌ＤＨ５５α菌株,得到了含有目的片段的重组子。并采用双脱氧终止法进行序列配美国报道的李坏死环斑病毒ＲＮＡ３序列对应部分核苷酸基本一致,这表     

分子标记技术在杂草学中的应用现状与前景

本文较详细地介绍了蛋白质同工酶及ＲＦＬＰ技术,并且比较了它们各自的优缺点,回顾总结了它们在杂草科学中的应用现状,并对其进一步应用提出了建议。     

苏云金芽孢杆菌cry218基因改造

通过合成特异性的寡核苷酸，利用定点突变和ＰＣＲ扩增技术，在苏云金芽孢杆菌ｃｒｙ２１８杀虫晶体蛋白基因的编码区上游－１４４ｂｐ和下游２４２ｂｐ处分别引入ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ位点，以利于该基因克隆到其它表达载体中。当修饰后的ｃｒｙ２１８基因克隆到表达载体和穿梭载体后，均能表达出对小菜蛾有毒的１３０ｋＤａ蛋白质     

高粱霜霉病

高粱霜霉病Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａｓｏｒｇｈｉ(Ｗｅｓｔｏｎ＆Ｕｐｐａｌ)Ｃ .Ｇ .Ｓｈａｗ是我国对外检疫一类危险性病害玉米霜霉病(Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａｓｐｐ .)其中的 1个种。玉米霜霉病有 7个种侵染玉米 ,Ｐ .ｓｏｒｇｈｉ是其中分布最广危害最重的 1个种。本文描述了高粱霜霉病 (以下简称ＳＤＭ )症状和病原菌生物学特性 ,对病原菌的分生孢子、孢子梗和卵孢子等形态上的检测方法进行研究 ,并探讨应用ＰＣＲ技术检测高粱霜霉病和玉米霜霉病。1　国内外研究概况ＳＤＭ最早在印度发现。 1 90 7年Ｂｕｔｌｅ…     

广东稻瘟病菌的遗传宗谱与致病性的关系

不同病圃同一套寄虫主的田间表现及其穗颈瘟分离菌株的遗传宗谱和致病性分析试验结果表明,不同生态稻区稻瘟病菌的小种分布类型不同,对品种的致病性也存在差异。将已经过ＲＦＬＰ和ＰＣＲ技术进行ＤＮＡ指纹分析,并划分为不同遗传宗谱的稻瘟病菌株进行致病性测定。结果表明,菌株的致病性与其遗传宗谱类型、生理小种类型、寄主及采集地点存在密切的关系：（１）同一遗传宗谱、分离自相同寄主、鉴定出来的生理小种类型又较接近的菌     

李长江局长在动植物检疫实验所考察工作

20 0 1年 6月 2 6日 ,国家质检总局李长江局长和党组成员、副局长王秦平 ,党组成员、国家认可认证委员会主任王凤清 ,党组成员夏红民及北京市副市长张茅一行 ,考察了动植物检疫实验所转基因检测技术中心。动植物检疫实验所介绍了目前已研究建立的 3种转基因定性检测方法、两种转基因定量检测方法 (包括ＰＣＲ和基因芯片技术 ) ,演示了转基因检测方法。在考察中 ,李局长一行还详细询问了转基因产品检测的程序。最后 ,李局长作了重要指示 :一是转基因检测工作很重要 ,国务院领导很重视。最近颁布了《农业转基因生物安全管理条例》 ,我们的检验…     

聚合酶链反应（PCR）技术在蚊虫抗性基因研究中的应用

应用ＰＣＲ技术对广泛部分地区的致倦库蚊ＯＰ抗性基因进行测定，实验证明广州地区自然种群和实验室株有相当数量致倦库蚊有扩增的抗性酯酶Ｂ１基因存在。对实验室株及四个地区自然群体的抗性基因进行扩增，发现实验室株阳性率比自然群体为高，四个地区自然群体抗性基因频率分别为２２．５％、２０％、１５％、和７．５％。另外发现雄性库蚊出现的扩增阳性率比雌蚊高。所设计的两对引物均能成功的扩增致倦库蚊抗性基因酯酶Ｂ１，但后