辣椒AFLP反应体系的优化与建立

以5个辣椒（Clapsjcum annuum L.）材料为研究对象,对AFIJP反应体系中的DNA用量、酶切连接时间、预扩增产物的稀释倍数等关键因素进行优化分析,建立了适宜辣椒作物的AFLP反应体系。研究结果：酶切连接反应中,基因组DNA适宜用量为100ng,反应时间是6h最为合适,预扩增产物适宜稀释倍数在30-50倍时较为理想。     

美洲南瓜AFLP反应体系的优化与建立

以美洲南瓜(Cucurbita pepo L.)为试材,通过对AFLP反应体系中的关键因素进行研究,获得了稳定的南瓜AFLP反应体系。优化后的体系能扩增出稳定条带,可用于基因定位、南瓜遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究,为南瓜分子辅助育种奠定了理论基础。     

广藿香AFLP反应体系的优化及引物筛选

以广藿香叶子为试材,采用AFLP分子标记方法,研究了广藿香AFLP反应体系,包括酶切连接体系、连接产物稀释倍数、预扩增产物稀释倍数等关键因素,并对AFLP引物组合(E/M组合)进行筛选,以期为后续的广藿香优良种质资源筛选奠定基础。结果表明:酶切体系为20μL,含300 ng模板DNA,在37℃下反应3 h;连接反应在16℃下反应12 h;连接产物的最适稀释倍数为3倍;预扩增产物的最适稀释倍数为20倍。采用优化好的反应体系筛选出了12对条带清晰、多态性丰富的引物组合。优化好的反应体系适用于广藿香AFLP分子标记研究,筛选出的引物也具有较好的多态性,可为后续的广藿香优良种质筛选提供技术支持。     

空间诱变辣椒AFLP反应体系的优化

为了建立适合空间诱变辣椒的AFLP反应体系,以3～4叶期的辣椒叶片为试材,对体系中的DNA用量、酶切与连接、预扩增及产物的稀释倍数等关键因素进行了优化,确立了适合空间诱变辣椒的AFLP反应体系.结果表明:采用该体系对空间诱变辣椒进行AFLP分析,能够得到清晰稳定的分子标记图谱.     

樱桃荧光AFLP反应体系优化及应用

以12个甜樱桃品种和4个中国樱桃品种为试材,对荧光AFLP分析过程中模板DNA的制备、酶切与连接、酶切连接产物的预扩增与选择性扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳等过程中易出现的问题及其解决方法进行了研究。结果表明:改良CTAB法提取甜樱桃嫩叶和老叶DNA效果均很好;200ng DNA双酶切反应4h,连接产物稀释10倍作为预扩增模板,预扩增产物稀释20倍作为选择性扩增的模板;筛选了64对引物,其中8对扩增效果理想,能够得到清晰、稳定的条带,平均每对引物扩增条带为40.6条,建立了樱桃AFLP分子标记技术体系;该体系的建立为研究甜樱桃遗传多样性和标记重要农艺性状奠定了基础。     

石榴ISSR-PCR反应体系的正交设计优化

现利用正交设计L16(45)探讨DNA模板、Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶对石榴ISSR-PCR反应体系的影响,首次应用加权平均法及百分制对正交实验结果进行评分,并应用DPS数据处理系统进行数据分析;同时对石榴ISSR-PCR最佳反应体系进行退火温度梯度试验。结果表明:适合石榴的ISSR-PCR最优反应体系(25μL)为:Mg2+1.75 mmol/L、dNTPs0.15 mmol/L、TaqDNA聚合酶1 U、引物0.8 mmol/L、DNA模板20 ng;引物UBC 811的最适退火温度为51.2℃,且最适退火温度因引物而异。     

橄榄基因组AFLP扩增体系的优化

为建立适于橄榄研究用的AFLP技术体系,以10个橄榄品种为材料,对其基因组DNA从酶切、连接、预扩增和选择性扩增等方面进行条件优化。研究结果表明,DNA模板用量为500 ng,酶切体系中限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ各加入3 U,37℃水浴4 h;连接体系中T4DNA连接酶加入1.5 U,16℃连接6 h;并利用优化后的预扩增体系和选择性扩增体系筛选出6对适合于橄榄AFLP分析的引物组合:E/AAC-M/CAT、E/AAC-M/CTT、E/ACA-M/CAA、E/AGG-M/CAA、E/ACC-M/CAA、E/ACT-M/CAT。采用该体系得到的电泳条带清晰可靠、多态性好,可用于对橄榄遗传多样性的研究。     

菠萝DNA的提取及AFLP反应体系的建立

为了应用AFLP分子标记对菠萝种资源进行种质鉴定、分类及亲缘关系等方面的研究,最重要的是要获得高质量的DNA,菠萝叶片革质化程度较高,且纤维、多糖、多酚等次生代谢物质含量较多,严重干扰DNA的抽提或影响其后的AFLP双酶切及其扩增反应,本研究以菠萝叶片为材料,利用改良CTAB法得到了39个高质量的菠萝分类群的DNA基因组,并进行了AFLP分析,得到了条带清晰、多态性好的菠萝品种指纹图谱,这为菠萝基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究提供理论依据。     

山东石榴品种遗传多样性与亲缘关系的荧光AFLP分析

利用荧光AFLP标记技术,采用8对EcoR I/Mse I引物对山东省25个石榴品种进行AFLP－PCR分析,结果表明： 25个石榴品种扩增的多态性位点数从70条到126条不等,平均90.25条,平均多态性位点41.78%;所有检出位点的平均观测等位基因数、平均有效等位基因数、平均Nei's基因多样度和平均香农信息指数分别为1.4178、1.1874、0.1133和0.1752;方差分析显示各位点的Nei's基因多样度和香农信息指数具有不同程度的显著性差异;基于Lei & Li相似系数利用UPGMA法进行聚类分析,在相似系数0.786处将25个品种划分为4大类。根据AFLP结果探讨了山东石榴品种的亲缘关系与新品种选育的前景。     

荔枝AFLP分析体系的建立

以39份荔枝种质资源为试材,建立起荔枝AFLP分析体系。对AFLP分析过程中的影响因子(酶切与连接、预扩增、标记)进行了研究。双酶切必须完全彻底。选出适于荔枝AFLP分析的引物组合3对,分别为EcoRIAAC+MseICTG,EcoRIAGC+MseICAT,EcoRIACC+MseICAT。应用其中2对引物(EcoRIAAC+MseICTG,EcoRIACC+MseICAT),共在106个位点扩增出条带,多态性带92个(86.7%)。对荔枝AFLP分析的影响因子进行了分析。     

木瓜属植物AFLP分析体系的建立与应用

以29个木瓜属品种为试材,研究该属植物基因组AFLP反应体系的建立。通过检测AFLP分析中的DNA提取、酶切及连接、预扩增和选择性扩增的结果,对影响AFLP分析的主要因子进行探讨,建立了木瓜属植物的AFLP分析体系,并利用该体系筛选出E-AAG+M-CAA、E-ACA+M-CAA、E-AAG+M-CAC、E-AAG+M-CAG、E-AAG+M-CAT、E-AAG+M-CTG、E-ACA+M-CTT和E-ACG+M-CTT共8对引物组合,对供试品种进行扩增,获得的条带清晰可辩,说明所建立的反应体系适合于该属植物进行AFLP分析。     

番荔枝DNA的提取和AFLP体系的建立

以7份番荔枝品种为试材,通过对DNA的提取、酶切、连接、预扩增和选择性扩增等分析,建立并研究番荔枝的AFLP分析体系,以其找出番荔枝品种间的亲缘关系,为番荔枝的杂交育种的亲本选择和嫁接砧中砧穗选择提供理论基础.结果表明:利用该体系对7份番荔枝的样品进行了分析,可以获得清晰的条带,表明所建立的体系可使用于番荔枝AFLP分析.     

板栗基因组AFLP银染反应体系的建立

为了建立准确、高效、实用的板栗品种鉴别体系和方法,采用改进的CTAB—DNA提取方法,从板栗的嫩叶和老叶中提取获得总DNA。所得DNA样品的D260nm/D280nm值为1.7～1.9,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且获得率高。该体系使用操作简便、快捷、高效,适合于板栗DNA提取,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,适合AFLP-PCR反应应用,得到清晰的指纹式样,适宜用作板栗品种鉴别的有效方法。     

牡丹AFLP荧光反应体系的建立和优化

以牡丹的叶片为材料,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中几个关键参数进行优化,建立了牡丹的AFLP荧光反应体系,首次在牡丹DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验过程取的成功,得到了清晰的部分牡丹品种的指纹图谱.为牡丹品种指纹图谱的绘制、亲缘关系的研究等奠定基础.     

葡萄AFLP技术体系建立及其在超藤与藤稔葡萄品种鉴别中的应用

超藤葡萄是藤稔葡萄的一个芽变品种,由于2者亲缘关系十分接近,应用形态学手段以及RAPD分子标记不易区分。针对葡萄叶片富含多糖和多酚类等杂质的特点,从基因组DNA纯化入手,对AFLP流程进行了优化改进,建立了葡萄AFLP体系,并成功地对此2个品种进行了区分。采用引物组合M-CAT+E-ACG进行AFLP扩增,超藤葡萄出现167bp特异带。     

石榴离体培养再生体系的研究

对石榴休眠枝段、成熟叶片及当年生新梢离体培养 ,建立其再生体系。结果表明 ,以休眠枝段、成熟叶片为外植体均能形成愈伤组织并分化出不定芽 ;当年生新梢茎段培养 ,以MS +BA 2 0mg·L-1+NAA0 3mg·L-1对茎段腋芽的增殖最适宜。诱导生根 ,用 1/2MS为基本培养基附加NAA 0 5mg·L-1+活性炭0 1mg·L-1+蔗糖 2 0g·L-1,生根率达 95 8%。培养基中附加 0 1%活性炭 ,对促进生根均有显著效果。