几种佐剂免疫增强效应的比较研究

本研究以氢氧化铝胶、油佐剂、裂解乳酸菌,百白破三联苗(DTP)和左旋咪唑等5种佐剂,分别配合布氏杆菌猪二(S_2)号苗给豚鼠免疫。以淋巴细胞转化、E—玫瑰花环形成、凝集反应及布氏菌素皮肤变态试验等方法,3个月内进行跟踪性定期检测,考察所试各佐剂增强细胞免疫及体液免疫的作用及特点。试验结果表明,所试各佐剂对豚鼠的免疫应答均具有增强作用。其中,裂解乳酸菌对细胞免疫及体液免疫的增强作用均较理想,是一种具有发展前途的佐剂;百白破三联苗增强细胞免疫及体液免疫效果均佳,但其过敏原作用值得重视;油佐剂在提高抗体滴度,促进体液免疫应答方面的作用最强,明显优于所试的其它佐剂。     

甲壳素对猪传染性胃肠炎免疫调节作用的研究

研究了甲壳素对猪传染性胃肠炎疫苗的免疫调节作用；用浓碱法处理甲壳素可获得吸附能力强的佐剂，但物理性状不适合用于疫苗佐剂；壳聚糖可用作制备具有良好水溶性的疫苗佐剂，经与白油和蜂胶等佐剂比较：表明该佐剂对猪传染性胃肠炎具有一定的免疫调节作用。即4种佐剂的疫苗在免疫后14d，壳聚糖疫苗组抗体效价显著高于其它组；免疫后30～120d油乳剂疫苗组抗体效价显著高于其它组。     

猪丹毒丝菌灭活疫苗免疫佐剂的筛选

为筛选猪丹毒丝菌灭活疫苗免疫佐剂,将5种佐剂(聚合物佐剂、矿物油佐剂ISA 201 VG、蜂胶佐剂、弗氏佐剂、铝胶佐剂)分别与3株猪丹毒丝菌株(AEr21、AEr31和AEr32)制备成15种灭活疫苗,经物理性状检验、无菌检验、安全检验合格后分别免疫小鼠,应用ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体水平和细胞因子含量(IL-4、IL-10、TNF-β、IFN-γ、MCP-1)。通过腹腔注射和灌胃2种方式对免疫后小鼠进行攻毒,计算免疫保护率。结果显示,5种佐剂与3株猪丹毒丝菌株制备的灭活疫苗均可刺激小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫,矿物油佐剂ISA 201 VG疫苗免疫组诱导小鼠产生的IgG抗体水平和细胞因子含量最高,与铝胶佐剂、弗氏佐剂疫苗免疫组差异显著(P<0.05),与聚合物佐剂、蜂胶佐剂疫苗免疫组差异不显著(P>0.05);矿物油佐剂ISA 201 VG疫苗免疫组在攻毒后的免疫保护率最高,对腹腔注射和灌胃攻毒小鼠的免疫保护率分别为80%、80%、60%和100%、100%、80%。试验结果表明,矿物油佐剂ISA 201 VG可作为猪丹毒丝菌灭活疫苗制备的候选免疫佐剂。     

H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗安全性试验研究

通过对H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗的急性毒性试验、眼结膜刺激试验、肌肉刺激试验与溶血试验研究,评价其安全性。急性毒性试验：取AA+肉鸡70只,随机分成7组,设为高剂量疫苗组与佐剂组,中剂量疫苗组与佐剂组,低剂量疫苗组与佐剂组,空白对照组。眼结膜刺激试验：取兔12只,随机分成2组,为疫苗组和佐剂组,采用自身对照法,观察兔...     

高效佐剂对猪细小病毒和圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果

为评价高效佐剂VA5对猪细小病毒和猪圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果,将VA5与猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗混合免疫BALB/c小鼠和豚鼠。结果显示,VA5佐剂能明显提高猪细小病毒血凝抑制抗体效价和血清病毒中和抗体效价,亦能提高猪圆环病毒ELISA抗体和中和抗体效价,并可降低二种抗原的使用量。VA5佐剂显著提高小鼠和豚鼠免疫后的淋巴细胞刺激指数。攻毒后,VA5佐剂处理组动物脾脏PCV2/PPV病毒载量明显低于不含高效佐剂的免疫组。VA5佐剂能提高猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗在小鼠/豚鼠中的抗体效价,提高细胞免疫力,降低攻毒后的排毒。     

E515-A对猪流行性腹泻病毒灭活疫苗的佐剂作用

E515-A是一种含人参茎叶皂苷(GSLS)的白油佐剂。将E515-A和含猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗原的水相在低剪切力(转速200r·min~(-1))下混合,形成油乳剂疫苗。为观察E515-A对PEDV灭活疫苗的免疫增强作用,将72只ICR小鼠随机分成6组,分别进行2次(间隔2周)皮下注射:(1)0.9%NaCl溶液,(2)PEDV抗原+0.9%NaCl溶液,(3)PEDV抗原+GSLS,(4)PEDV抗原+白油佐剂,(5)PEDV抗原+E515-A和(6)PEDV抗原+氢氧化铝铝胶。于一免后24h采血检测血清IFN-γ水平和NK细胞杀伤活性;于二免后检测血清特异性IgG及IgG1和IgG2a水平,制备脾淋巴细胞检测细胞增殖能力。结果表明,E515-A对于PEDV疫苗诱导的免疫反应具有显著的促进作用,免疫增强效果优于铝胶佐剂。和对照组比较,E515-A油佐剂可以显著促进免疫小鼠的NK细胞杀伤活性,促进细胞因子IFN-γ的产生,增强脾淋巴细胞对刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)刺激的增殖应答能力,提高血清IgG及其亚类IgG1和IgG2a水平。为增强猪的疫苗免疫效果,E515-A作为猪疫苗的佐剂值得进一步研究。     

对猪流行性腹泻病毒灭活疫苗的佐剂作用

E515-A是一种含人参茎叶皂苷(GSLS)的白油佐剂。将E515-A和含猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗原的水相在低剪切力(转速200 r·min^-1)下混合,形成油乳剂疫苗。为观察E515-A对PEDV灭活疫苗的免疫增强作用,将72只ICR小鼠随机分成6组,分别进行2次(间隔2周)皮下注射:(1)0.9% NaCl溶液,(2)PEDV抗原+0.9% NaCl溶液,(3)PEDV抗原+GSLS,(4)PEDV抗原+白油佐剂,(5)PEDV抗原+E515-A和(6)PEDV抗原+氢氧化铝铝胶。于一免后24 h采血检测血清IFN-γ水平和NK细胞杀伤活性;于二免后检测血清特异性IgG及IgG1和IgG2a水平,制备脾淋巴细胞检测细胞增殖能力。结果表明,E515-A对于PEDV疫苗诱导的免疫反应具有显著的促进作用,免疫增强效果优于铝胶佐剂。和对照组比较,E515-A油佐剂可以显著促进免疫小鼠的NK细胞杀伤活性,促进细胞因子IFN-γ的产生,增强脾淋巴细胞对刀豆蛋白A(Con A)和脂多糖(LPS)刺激的增殖应答能力,提高血清IgG及其亚类IgG1和IgG2a水平。为增强猪的疫苗免疫效果,E515-A作为猪疫苗的佐剂值得进一步研究。     

猪IL-18增强猪细小病毒灭活疫苗猪体细胞免疫效果的研究

为了研究猪白细胞介素18是否增强猪细小病毒(PPV)灭活疫苗在猪体免疫效果,分别将猪白细胞介素18与自制猪细小病毒灭活疫苗和猪细小病毒灭活疫苗联合免疫仔猪,并设猪白介素18和生理盐水对照组。免疫后分别用间接ELISA方法和流式细胞技术检测仔猪抗体水平变化和仔猪外周血T淋巴细胞亚群动态变化。结果显示,免疫后猪白细胞介素18联合灭活疫苗组抗体水平与无猪白介素18灭活疫苗组相似,但免疫后猪白介素18联合PPV灭活疫苗组的CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+T淋巴细胞所占比值均高于相应的PPV灭活疫苗组,但差异不显著,且CD4~+/CD8~+在正常范围内。研究证实猪白介素18主要增强PPV油乳剂灭活疫苗的细胞免疫应答。     

不同佐剂制备的鸡坦布苏病毒灭活疫苗免疫效果比较

以不同材料为佐剂制备坦布苏病毒灭活疫苗,用ELISA方法检测免疫鸡不同时间抗体产生的情况,以选择最佳制苗佐剂。取40只1月龄SPF鸡,随机分成8组,以不同的佐剂组合制备疫苗,免疫7个组(包括白油组、白油+IL-2组、铝胶组、铝胶+IL-2组、蜂胶组、蜂胶+IL-2组、IL-2组),另设不免疫对照1个组,分别于免疫前及免疫后1周、2周、3周和4周采血,用已建立的ELISA方法检测血清中的ELISA抗体,比较不同佐剂灭活疫苗的免疫效果。结果表明:以白油+IL-2作为佐剂组的灭活疫苗效果最好,产生的抗体水平优于其他各组,免疫后3周ELISA抗体可达到1∶800以上,是较理想的制备坦布苏病毒灭活疫苗的佐剂。     

不同佐剂制备的鸡坦布苏病毒灭活疫苗免疫效果比较

以不同材料为佐剂制备坦布苏病毒灭活疫苗,用ELISA方法检测免疫鸡不同时间抗体产生的情况,以选择最佳制苗佐剂。取40只1月龄SPF鸡,随机分成8组,以不同的佐剂组合制备疫苗,免疫7个组(包括白油组、白油+IL-2组、铝胶组、铝胶+IL-2组、蜂胶组、蜂胶+IL-2组、IL-2组),另设不免疫对照1个组,分别于免疫前及免疫后1周、2周、3周和4周采血,用已建立的ELISA方法检测血清中的ELISA抗体,比较不同佐剂灭活疫苗的免疫效果。结果表明:以白油+IL-2作为佐剂组的灭活疫苗效果最好,产生的抗体水平优于其他各组,免疫后3周ELISA抗体可达到1∶800以上,是较理想的制备坦布苏病毒灭活疫苗的佐剂。     

马尾藻多糖佐剂对猪PRRS疫苗免疫效果影响的研究

分别以马尾藻多糖的不同剂量与猪PRRS灭活抗原配制成完全佐剂疫苗,免疫5组非猪PRRSV免疫猪,并于首免的第0、20、40、50d采血,测定其体液免疫和细胞免疫水平。结果表明：（1）各马尾藻多糖佐剂组T淋巴细胞转化率（61.4%、65.0%、63.4%）均高于空白组1（52.8%）及普通佐剂疫苗组（59.6%）,各马尾藻多糖佐剂组与空白对照组间差异显著（P〈0.05）;（2）各马尾藻多糖佐剂组的T淋巴细胞亚群数量均高于空白组和普通佐剂疫苗组,其中以CD3的数量差异最明显（P〈0.05）,但马尾藻多糖组与普通佐剂疫苗组的CD8和NK细胞亚群的测定值差异不显著;（3）间接ELISA法测定各马尾藻多糖佐剂组血清中抗体的活性（0.631、1.015、0.688）均高于两对照组（0.518、0.568）,其中100mg/头份马尾藻多糖佐剂组与对照组间的差异显著（P〈0.05）。可见,以马尾藻多糖作为佐剂即可以提高体液免疫水平,又能增强细胞免疫功能,其中100mg/头份马尾藻多糖剂量的总体免疫效果最佳。     

猪链球菌不同佐剂苗的制备及对家兔的免疫原性

选择油乳佐剂、蜂胶佐剂和铝胶佐剂分别制成３ 种猪链球菌苗。对兔体进行了免疫试验,结果证实：油乳佐剂苗免疫原性最好,其次为蜂胶佐剂苗,铝胶佐剂苗效果较差。３ 种佐剂苗中,无论哪种佐剂疫苗,经两次免疫注射的效果均优于一次注射的;且两次注射后,抗体滴度高,维持时间长,进一步验证了免疫抗体的消长规律。     

鸭α-干扰素真核表达质粒的构建及其对DVH弱毒苗免疫鸭细胞免疫调节作用研究

为检测鸭α-干扰素对鸭细胞免疫的调节作用,本文按常规方法构建了鸭α-干扰素真核表达质粒(pcDNA-DuIFN-α),并以50、100、200μg分别肌注28日龄樱桃谷鸭,15 d后免疫鸭病毒性肝炎(DVH)弱毒疫苗,设空载体+DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱毒疫苗以及pcDNA-DuIFN-α对照组,采用流式细胞仪(FACS)和淋巴细胞增殖试验(MTT法)分别对免疫鸭外周血的CD3+淋巴细胞总数和T淋巴细胞转化能力进行动态检测。结果:①CD3+淋巴细胞数量:7~56 d实验组极显著(P≤0.01)高于生理盐水和显著高于(P≤0.05)DVH弱毒苗、空载体+DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN-α对照组,14~28 d 100μg组显著(P≤0.05)高于50和200μg组;②T淋巴细胞对ConA的反应能力(OD值):21~56 d实验组极显著(P≤0.01)高于生理盐水和显著高于(P≤0.05)DVH弱毒苗、空载体+DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN-α对照组,50和100μg组差异不显著,28~56 d均略高于200μg组。研究表明pcDNA-DuIFN-α是一种优秀的鸭细胞免疫的分子增强剂和DVH弱毒疫苗的分子佐剂,肌注100μg/只的效果最佳。     

鸡霍乱组织灭活苗的研究

选择鸡源多杀性巴氏杆菌C481强毒株(血清1型)接种鸡胚,收集死胚组织,分别以油乳剂、蜂胶和铝胶为佐剂,按一定比例配制成含1.5×1010个/ml巴氏杆菌的灭活苗。经试验证明,该疫苗安全、有效,其中油乳剂灭活苗的保护期和蜂胶灭活苗的保护期相当,但蜂胶灭活苗的抗体水平上升速度比油乳剂苗快且保护率高;铝胶苗的效果不及蜂胶苗和油苗。     

DNA疫苗策略

DNA疫苗是最近几年从基因治疗研究领域发展起来的一种新型疫苗,它能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答,能够抗病毒、细菌和寄生虫的感染,对自身免疫性疾病和过敏性疾病有一定的疗效作用。但与传统的灭活疫苗相比．其免疫效价还比较低．最近的研究表明：联合使用DNA疫苗和疫苗佐剂．如细胞因子,协同刺激分子等有助于提高DNA疫苗的免疫效价。     

猪流产嗜性衣原体omp-1基因的重组质粒与重组蛋白免疫组合效果

为增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫措施进而筛选出高效新型分子疫苗,本实验将猪流产嗜性衣原体omp-1基因克隆入pcDNA3.1( )载体构建DNA疫苗,初次和二次免疫分别以核酸/重组蛋白(DNA/r-MOMP)、重组蛋白/核酸(r-MOMP/DNA)、重组蛋白 核酸/重组蛋白 核酸(r-MOMP DNA/r-MOMP DNA)、核酸 核酸(DNA/DNA)和重组蛋白 重组蛋白(r-MOMP/r-MOMP)5种组合接种BALB/c小鼠,同时以载体和弱毒为对照。二次免疫后14 d以ELISA和T淋巴细胞增殖实验检测特异性体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示核酸与重组蛋白同时免疫可以诱导产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,而DNA/r-MOMP组合的细胞免疫和体液免疫水平高于r-MOMP/DNA组合,单独免疫DNA组或r-MOMP都不能获得好的细胞和体液免疫。     

猪转移因子增强猪细小病毒灭活疫苗猪体细胞免疫活性的研究

为探讨猪转移因子增强猪细小病毒灭活疫苗对猪体免疫效果,从健康猪的新鲜脾脏中提取转移因子,分别与自制猪细小病毒灭活油苗和猪细小病毒商品灭活苗联合免疫仔猪,并设猪转移因子和生理盐水对照组。免疫后分别用间接ELISA方法和流式细胞技术检测仔猪抗体水平变化和仔猪外周血T淋巴细胞亚群动态变化。结果显示,免疫后猪转移因子联合灭活疫苗组能有效提高抗体水平,且免疫后猪转移因子联合PPV灭活疫苗组的CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+T淋巴细胞比值均高于相应的PPV灭活疫苗组。表明猪转移因子主要增强PPV油乳剂灭活疫苗的细胞免疫应答。     

基因佐剂CpGDNA对生长抑素DNA疫苗pES/2SS的作用

 【目的】探讨CpGDNA对生长抑素DNA疫苗免疫小鼠免疫效果的影响。【方法】生长抑素质粒pES/2SS分别与CpG-ODN、pE-CpG、细菌DNA、脂质体配合免疫小鼠，疫苗剂量为20μg/只，佐剂等量混合，2周后加强免疫。【结果】雌性小鼠免疫后4、6周，疫苗组平均增重显著高于对照组(P<0.05)。CpGDNA和DNA疫苗联合免疫后SS抗体P/N值、IgG2a/IgG1、脾细胞活性、GH和IGF-I均比单一使用DNA疫苗的高(P<0.05)。免疫后4周，P/N值以pES/2SS + CpGODN组最高，SI值以pES/2SS+ CpG-ODN组最高。CpGDNA佐剂组GH从第2周开始升高，至第6周达高峰，显著高于pES/2SS组（P<0.01），CpG-ODN组GH高水平持续时间最长，至免疫后8周，仍显著高于pES/2SS组（P<0.01）。CpGDNA组IGF-I值显著高于pES/2SS疫苗组（P<0.05）。【结论】生长抑素基因免疫小鼠可以产生SS抗体，而含CpGDNA序列的核酸佐剂及脂质体粗品，可以增强生长抑素基因疫苗的效果。     

中药成分复方的佐剂作用及其与中药复方的功效比较

分别用淫羊藿多糖(EPS)加蜂胶黄酮(PF)、黄芪多糖(APS)加人参皂甙(GS)制成2个中药成分复方(cCHMI1,cCHMI2),同时用相应的淫羊藿、蜂胶、黄芪和人参的提取物制成相应成分含量相同的2个中药复方(cCHM1,cCHM2).试验1用2个中药成分复方(对照组为生理盐水)分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔,于免疫后第0、3、7、10、14、17、21、28、35、42天用血凝抑制试验法测定血清抗体效价的动态变化;试验2将4个复方分别与灭活的新城疫强毒混合制成疫苗免疫雏鸡,以油佐剂苗、无佐剂苗和生理盐水为对照,分别于免疫后第7、14、21、28、35、42天用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化.结果表明,2个中药成分复方能显著提高家兔血清的兔瘟抗体效价,cCHMI1的效果优于cCHMI2;4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价,效果与油佐剂苗相当,中药成分复方稍优于中药复方.     

水溶性酵母葡聚糖对猪细小病毒灭活疫苗免疫效果的影响

为研究水溶性酵母葡聚糖作为免疫佐剂对猪细小病毒(PPV)灭活疫苗免疫效果的影响,将水溶性酵母葡聚糖与PPV灭活疫苗联合免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫后不同时间小鼠血清中的抗体水平及IL-4、IL-6、IFN-γ的分泌水平,应用流式细胞仪检测免疫小鼠CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+T淋巴细胞百分比值的动态变化。结果显示,与疫苗单独免疫组相比,酵母葡聚糖对抗体水平无明显影响,CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+细胞数量增加,且均能不同程度诱导IL-4、IL-6、IFN-γ分泌。表明,水溶性酵母葡聚糖联合PPV灭活疫苗能够有效增强机体的免疫功能,水溶性酵母葡聚糖可以作为PPV的免疫佐剂。