一株死谷芽孢杆菌的分离、鉴定及抗病促生效果初探

为了寻求新的生物防治菌种资源,以醋糟基质为试验材料,采用稀释涂布平板法从醋糟中分离出对立枯丝核菌具有明显抑制作用的拮抗菌,采用平板对峙法研究其对病原菌的广谱抑制效果,将菌体特征与16SrDNA序列分析及生理生化指标相结合,对拮抗菌进行初步鉴定,确定其分类地位,采用温室盆栽试验对分离的拮抗菌进行抗病促生效果初探。结果表明:从醋糟中分离到了1株对立枯丝核菌具有明显拮抗作用的菌株CZ,且菌株CZ具有广谱的抑菌效果,对西瓜枯萎病、香瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、水稻恶苗病、小麦赤霉病、苹果炭疽病原菌都具有较强的拮抗作用。根据菌体特征、16SrDNA序列分析及生理生化指标的结果,初步鉴定该菌为死谷芽孢杆(Bacillus vallismortis CZ)。温室盆栽试验表明菌株CZ对由立枯丝核菌引起的黄瓜立枯病具有显著的抑制效果,与对照组相比,接种菌株CZ后,黄瓜小苗的病情指数降低了18.3%。由此可见,菌株Bacillus vallismortis CZ具有开发成生防试剂的潜力。     

番茄灰霉病拮抗细菌的分离筛选及鉴定

以番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)为供试菌,采用平板对峙方法,研究了不同植物根围土壤中的细菌对番茄灰霉病(Botrytis cinerea)的拮抗效果。结果表明:对分离纯化的75株细菌进行拮抗测定,其中30株对番茄灰霉病有不同程度抑制作用,分离频率为40.00%。其中3株拮抗细菌YM8、FQ10、FQ11对番茄灰霉病病原菌拮抗效果较好,抑菌圈直径在1.5~3.0cm。通过生理生化试验、形态特征观察对其进行了种属初步鉴定,鉴定结果为菌株YM8为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),FQ10为短芽孢杆菌(Bacillus brevis),FQ11为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。     

白菜黑斑病菌拮抗细菌LBC-1菌株的分离与鉴定

从湖南、湖北、河北等地区菜地采集土样,采用抑菌圈法筛选对白菜黑斑病病原菌芸薹链格孢菌（Alternaria brassicae）具有拮抗作用的芽孢杆菌菌株。通过初筛得到具有拮抗作用的菌株20株,复筛出1株拮抗活性较高的菌株LBC-1。通过生理生化试验、形态特征观察及16S rDNA序列分析对其进行了种属鉴定。鉴定结果为菌株LBC-1属于解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,是1株广谱拮抗芽孢细菌菌株。     

大花惠兰根腐病拮抗细菌ZL7-5菌株的筛选与鉴定

 从各地大花惠兰种植地采集的土样中共分离到细菌519株,初筛出对大花惠兰根腐病病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporium）具有拮抗活性的细菌菌株26株,经过复筛,选出1株具有较高拮抗活性的菌株ZL7-5。通过16S rDNA序列相似性分析,菌株ZL7-5与解淀粉芽孢杆菌标准菌株(NBRC 15535)的16S rDNA序列相似度达100%,通过比较菌株ZL7-5和模式菌株的形态特征和生理生化特性,最终将菌株ZL7-5鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。     

根结线虫生防细菌的筛选及鉴定

以抗病番茄根际土壤、根为分离对象,采用稀释分离方法,进行了根结线虫生防细菌的筛选及鉴定。结果表明:从番茄根际土和根内分离出47株细菌,其中,根内细菌7株,根际细菌40株。经杀根结线虫活性检测,获得2株活性强且稳定的细菌菌株W49、W21,对根结线虫的校正死亡率均超过90.0%,对卵的孵化抑制率达96.0%。通过菌落形态特征、生理生化特征观察和16SrDNA序列分析,W49和W21分别被鉴定为简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)和内生芽孢杆菌(Bacillus endophyticus)。     

火龙果茎腐病拮抗细菌的筛选和鉴定

对黑龙江、江苏、浙江、海南等地土壤细菌进行分离纯化,得到细菌206株。采用平板对峙法筛选出对火龙果茎腐病菌Neoscytalidium dimidiatum具有强拮抗作用的菌株1株,PCY-67。通过形态特征、生理生化特性及16SrDNA序列同源性比较,鉴定该菌株为多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa Ash,Priest et Collin。     

黄瓜枯萎病拮抗芽孢杆菌A7-3-14的筛选及鉴定

以从敦煌地区盐碱土壤中分离获得的19株细菌为试材,采用平板对峙法和菌丝生长速率法进行筛选,通过菌株形态特征、生理生化试验和16S rDNA序列分析进行鉴定,并采用盆栽试验测定所筛选的拮抗菌,研究了其对黄瓜枯萎病病原菌Fusarium oxysporum的防效,以期得到对黄瓜枯萎病病原菌具有较强拮抗作用的芽孢杆菌。结果表明:从敦煌地区盐碱地土壤中共分离出19株拮抗细菌,其中菌株A7-3-14拮抗作用最强,抑制率为79.22%,菌株鉴定为内生芽孢杆菌Bacillus endophyticus,盆栽防效结果表明该菌株发酵液对黄瓜枯萎病具有显著的防治效果,其处理后的黄瓜苗病情指数为28.14,防治效果达到69.77%。表明分离到的芽孢杆菌菌株A7-3-14可以用于黄瓜枯萎病的生物防治,且具有良好的效果。     

2株抗枯萎病尖镰孢菌内生细菌菌株的分离及鉴定

华南地区因尖镰孢菌引起的枯萎病发生较为严重,特别是近年来发现的香蕉枯萎病,对香蕉产业来说更是毁灭性的病害。分离、筛选有拮抗活性的内生细菌是防治枯萎病的有效措施之一。从海南红树林健康叶片中分离到102株非致病性内生细菌菌株,通过室内抗菌活性的测定,得到了2株对枯萎病尖镰孢菌具有明显抑制作用的拮抗菌株。通过对它进行形态、生理生化特性及16SrDNA序列等方面的研究,确定其中1株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis,命名为BS-009;另一株确定为新发表种Bacillus Mojavensis的一个相似种,命名为BM-027。     

西瓜枯萎病拮抗菌株的筛选与鉴定

为了从丰富的土壤微生物资源中挖掘对西瓜枯萎病有较高防效的生防菌株,通过梯度稀释和平板涂布法分离获得西瓜根际土壤主要细菌,采用平板对峙培养和测定盆栽防效的方法,从中筛选出对西瓜枯萎病有较强拮抗活性的菌株,并通过菌落形态观察、生理生化鉴定、16S rDNA和gyrA基因序列比对获得生防菌株的分类地位。结果表明,从8份西瓜根际土壤中分离纯化到182个细菌单菌落,并筛选获得对西瓜枯萎病防效较高的3株拮抗细菌,接种30 d后盆栽防效均高于75%,与30%噁霉灵水剂防效无显著差异。综合形态特征、生理生化特性及序列分析结果,明确拮抗菌株JHXG0406为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis),拮抗菌株JHXG0221和XQXG0111为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。获得了3株对西瓜枯萎病有较好防效的菌株,具有作为生防菌剂开发应用的潜力。     

果树内生拮抗细菌的筛选鉴定及其生防作用研究

通过组织分离法,在不同健康果树的木质部中分离到235株内生细菌。通过平板对峙法对所得菌株进行了初筛和复筛,得到6株拮抗作用较强的菌株。用过滤和高温灭菌得到的菌株发酵液进行抑菌谱试验,最终获得拮抗作用较强的内生细菌X8。对X8菌株在植物体内定殖、分类鉴定和防治作用的深入研究。结果表明：X8菌株可以在杏、辣椒等植物中定殖。X8菌株发酵液对辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）抑制作用最强,达80.3%,对3种链格孢菌（Alternaria）病原菌的抑制作用达到75%以上,对番茄灰霉病和辣椒疫病的防效达到75.4%和79.3%,显著高于50%腐霉利和25%甲霜灵的防效。经16S rDNA序列分析,X8菌株与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的16S rDNA序列的同源性达99%。综合形态特征、生理生化特性,最终将X8鉴定为B. subtilis,在GenBank中序列登录号为HQ647257。     

辣椒疫霉病生防细菌的筛选鉴定及其防效

以筛选、获取优良辣椒疫霉病害生防菌株材料为目标,通过平板稀释法与对峙法对水稻土壤耕层可培养细菌进行 分离和筛选,成功从167 株可培养细菌中分离、筛选获得1 株拮抗菌LRS-1,并被鉴定为多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）。该拮抗菌对辣椒疫霉菌具有68% 左右的室内持久抑菌率以及63.4% 的温室病害防效;Realtime-PCR 检测结果表 明该拮抗菌对根围疫霉菌侵染数量具有显著的抑制效果。     

3株拮抗细菌对节瓜枯萎病菌的抑菌作用

对从香蕉园和节瓜地土壤中分离获得的3株细菌菌株F1、HN10和ZCb进行离体抑制节瓜枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发的试验。结果表明,3株菌株的发酵原液、50倍液和100倍液的抑菌带宽度范围为9.6～14.7 mm;HN10和ZCb菌株对孢子萌发的抑制率范围为13.7 %～58.4 %。     

苹果表面微生物数量及其与两种主要病菌的关系

对新收获及市售的8个品种苹果表皮微生物区系的分析表明,每克苹果表皮上细菌和真菌的含量分别为4.87 × 10~3CFU—7.38X10~5CFU和2.63X10~2CFU—4.75X10~2CFU.经分离纯化后得到细菌菌株273个,真菌菌株75个.以苹果贮存期两种主要病菌炭疽病菌和轮纹病菌为指示菌进行抑菌测定,得到拮抗性细菌菌株77个,真菌菌株20个.对其中拮抗性强的9个菌株在人工接种条件下测定,表明它们对苹果贮藏病害有不同程度防治作用,其中NA—W42和K'B—X71对轮纹病防治效果分别达96.3%和88.9%,PG—Wlla对炭疽病防治效果达55.6%.     

东北油豆角腐皮镰孢菌根腐病拮抗芽胞杆菌的筛选与鉴定

以东北油豆角腐皮镰孢菌为靶标菌,采用室内平板对峙培养和温室防效测定方法,从发病油豆角根际(围)土壤中筛选拮抗能力强的芽胞杆菌菌株,以期获得腐皮镰孢菌根腐病的生防资源。结果表明:该试验筛选到一株拮抗芽胞杆菌WJ-126,初步鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),在温室人工接种条件下,该菌株对油豆角腐皮镰孢菌根腐病的相对防效可达60.92%。     

不同发酵条件对苹果轮纹病拮抗细菌生长的影响

对1株苹果轮纹病细菌No.1菌株的发酵条件进行了探索,确定了其最佳培养基组成及培养条件。单因素发酵试验和正交试验结果表明,在含酵母浸膏5g、蔗糖20g、蛋白胨10g的1000mL液体培养基中,菌体生长量最大;细菌生长所需的最佳碳源为淀粉,最佳氮源为酵母浸膏和蛋白胨;当温度为28℃,pH7.0,在250mL三角瓶中装40mL液体培养基,接种量体积分数为5%,培养时间96h时,菌体生长量最大;在酸性条件下(pH4),细菌几乎不生长。     

甘蓝霜霉病内生拮抗细菌的筛选鉴定及防效研究

以感染霜霉病和健康的甘蓝叶片为试材,研究筛选了对甘蓝霜霉病菌有拮抗作用的内生细菌。结果表明:从健康的甘蓝幼苗中分离到18株内生细菌;用离体叶法进行测定,发现其中2株内生细菌对甘蓝霜霉病菌有拮抗作用,对其中一拮抗效果较好的菌株AC8进行田间防治试验,其防效达61.4%;通过形态观察、培养特征和生理生化特性鉴定,菌株AC8属于蜡状芽孢杆菌。