基因芯片及其研究进展

基因芯片(genechip)又称DNA芯片,是指将大量探针分子固定于支持物上,然后与标记的样品进行杂交,通过杂交信号的强弱判断靶分子的数量。用该技术可将大量的探针同时固定于支持物上,所以一次可对大量核酸分子进行检测分析,从而解决了传统核酸印迹杂交技术操作复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低等不足。它能在同一时间内分析大量的基因,使人们准确高效地破译遗传密码。这将是继大规模集成电路后又一次意义深远的科技革命。1基因芯片的特点1.1并行性高度的并行性不仅大大提高实验的进程,并且有利于DNA芯片技术所展示图谱的快速…     

分子育种研究手段之基因芯片技术

基因芯片技术是分子标记技术方法之一,其将大量的基因片段有序地、高密度地排列在固相载体上,称之为基因芯片。基因芯片技术是融生物学、物理学、化学、计算机科学、微电子学为一体的新技术,是90年代中期以来最重大科技进展之一,已经广泛用于许多物种的功能基因组学研究,具有重     

生物芯片研究与应用概况

生物芯片技术是伴随着人类基因组计划的实施应运而生的一种用于基因功能研究的新技术、新方法。通过基因芯片可以大规模、高通量地对成千上万个基因进行同时研究 ,从而解决传统核酸印迹杂交 (Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等 )技术操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足。目前 ,生物芯片技术已广泛受到基因表达研究、疾病诊断、发现新基因及药物筛选等领域的关注。1　生物芯片的基本概念生物芯片 (Ｂｉｏｃｈｉｐ)是指将大量的生物分子探针以大规模阵列形式排布在很小的载玻片、尼龙网等载体上 ,…     

基因芯片技术在猪病毒性疾病诊断中的应用

基因芯片是研究生物大分子功能的新技术,具有高通量、高度平行性、高度自动化的特点。它是通过点样法或原位合成法把大量基因探针或基因片段按特定的排列方式固定在硅片上形成致密有序的DNA分子点阵,按碱基配对的特性与样品DNA杂交,然后通过计算机进行解读和分析,以获取大量信息。在对动物传染病病原体的研究中,基因芯片技术已应用于病原体检测、基因分型、表达谱的分析等。论文就其定义、作用机理、分类、在动物病毒性传染病方面的应用及其存在的问题和发展前景进行了综述。     

基因芯片法鉴别饲料中猪、牛、鸡和鸭等动物源性成分分析

研究了基因芯片技术在动物源性成分检测中的应用,在研究过程中选择mtDNA 18S rRNA为目标基因,在通用引物扩增区间设计了质控探针、特异性探针。最终验证了基因芯片检测技术在动物源性成分检测中的应用效果。本次研究证实了基因芯片检测技术在特异性、灵敏度等方面可以达到较高检测水平,该方法成本较低,灵敏度和准确性较高,可用于高通量检测饲料中是否含有猪、牛、鸡和鸭等4种动物源性成分。     

几种主要禽疫病诊断基因芯片的制备及初步应用

进行了几种主要禽疫病诊断基因芯片制备及其初步应用研究。试验分别设计和克隆鉴定了NDV、IBV、AIV和IBDV的靶基因重组质粒。以克隆的靶基因重组质粒为模板。分别进行PCR扩增制备靶基因并纯化，以基因芯片点样仪将制备的靶基因点制在氨基化的基片上，经干燥、水合、紫外线交联和洗涤后，成功制备了NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片。试验应用CY3荧光标记制备的探针进行芯片的检验，结果表明制备的NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片质量好，可对NDV、IBV、AIV和IBDV进行诊断检测，具有检测灵敏性好，特异性高和芯片可重复检测的优点。试验对30个临床样品进行初步应用检测，结果表明该诊断基因芯片技术与RT—PCR检测技术检出率基本一致，并具有同步诊断检测多种疫病的优点。     

基因芯片及应用

基因芯片是基于核酸分子杂交原理，利用光导原位化学合成或液相合成自动化点样技术，将大量的寡核苷酸探针固定于玻片，硅片、尼龙膜等固相支持物上，与荧光或同位素标记的样品核酸杂交，通过计算机系统检测与分析，获得有关的生物信息，它广泛应用于人类基因组研究，现代医学研究，动植物研究和环境保护等方面。     

基因芯片技术的应用

基因芯片(gene chip)也叫D N A芯片、D N A微阵列(D N A m icroarray)、寡核苷酸阵列(oligonucleotide array),是指采用原位合成(in situ synthesis)或显微打印手段,将数以万计的D N A探针固化于支持物表面上,产生二维D N A探针阵列,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断,由于常用硅芯片作为固相支持物,且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术,所以称之为基因芯片技术。基因芯片技术由于同时将大量探针固定于支持物上,所以可以一次性对样品大量序列进行检测和分析,从而解决了…     

基因芯片检测鱼类病毒的方法建立与优化

本研究建立并优化了一种基因芯片检测方法,可以同步检测7种重要的海水养殖鱼类病毒（淋巴囊肿病毒、细胞肿大病毒属虹彩病毒、赤点石斑鱼神经坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、传染性胰脏坏死病毒、病毒性出血败血症病毒、传染性鲑贫血病毒）。该基因芯片包含10条病毒特异性的寡核苷酸探针（25~30 mer）分别与病毒的CP、N、VP5、G、NS、MA等基因位点互补。将各病毒基因探针以50% DMSO稀释至20μmol/L,使用PersonalArrayer 16个人点样仪在醛基修饰玻片上点样,然后与Cy3标记的扩增产物在47℃条件下杂交1.5 h,最后在LuxScan 10K扫描仪上采集荧光信号、判断检测结果。初步应用表明,该基因芯片检测方法具有良好的特异性和可靠性,在鱼类病毒高通量检测技术领域有广泛的应用前景。     

基因芯片技术及其在微生物检测中的应用

基因芯片技术是20世纪90年代发展起来的一门高新技术。应用该技术可以对大量的遗传信息进行快速、高通量、并行检测,解决了传统检测方法中遇到的难题,已广泛应用于基因表达分析、突变检测、核酸多态性分析、基因测序和药物筛选等几乎所有的生物学研究领域。作为一种高通量的基因检测方法,基因芯片技术在微生物检测和鉴定方面的应用越来越多,具有巨大的应用潜力。文章简要介绍了基因芯片技术的基本概念和技术流程,综述其在微生物检测和鉴定中的应用。     

基因芯片技术在畜牧业中的应用

DNA芯片（DNA chip）技术是20世纪90年代中期以来影响最为深远的重大科技进展之一,是近年来生命科学与微电子学等学科相互交叉的一门高新技术.该技术通过设计不同的探针阵列,使用特定的分析方法可以具有多种不同的应用价值,如基因表达图谱测定、基因突变检测、基因多态性分析、基因组文库作图及杂交测序等,为＂后基因组计划＂时期基因功能的研究及现代医学发展提供了强有力的工具,将在新基因的发现、基因诊断、药物筛选、给药个性化方面取得重大突破.     

奶牛乳房炎主要致病菌16S rDNA基因芯片检测方法的建立

本研究建立了快速检测奶牛乳房炎主要致病茵的基因芯片方法,试验以奶牛乳房炎4种主要致病菌的16SrDNA基因作为基因芯片检测的靶片段,设计和筛选通用性引物和特异性探针,对通用引物进行荧光标记、PCR扩增、芯片杂交和信号扫描分析,根据杂交信号强度和聚类分析结果,判定奶牛乳房炎感染的致病菌种类。实验结果显示：以16SrDNA为靶基因检测奶牛乳房炎主要致病菌（无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌、金黄色葡萄球菌）的基因芯片方法,可以快速、特异、准确地对这4种试验菌株进行检测和鉴定。该检测方法的建立将为流行病学调查、食品卫生监督、乳房炎的防控等提供快速、有效的检测方法,具有良好的市场应用前景。     

应用基因芯片技术检测禽4种主要疫病的研究Ⅱ.检测基因芯片的构建及制备

本试验进行了NDV—IBV—AIV—IBDV检测基因芯片的构建及制备。以构建的重组质粒为模板，用PCR方法扩增制备靶基因，异丙醇沉淀法进行纯化，制备的靶基因质量浓度可达161．88～1218．36mg／L。将靶基因以点样缓冲液稀释至100mg／L，以芯片点样仪SpotArray24将靶基因点制在氨基化基片上，样点中心间距450／Lm，样点直径220／Lm。点样基片经室温干燥2h、水合处理10s、紫外线交联25min和0．2％SDS洗涤5min等系列处理后，成功制备出检测基因芯片。试验以PCR扩增标记制备检验探针，对制备的检测芯片进行质量检验。结果表明，制备的NDV—IBV—AIV—IBDV检测基因芯片质量好，可对NDV、IBV、AIV和IBDV进行检测。     

耐氟喹诺酮类病原菌gyrA基因突变的寡核苷酸芯片检测

根据大肠杆菌、沙门菌、无乳链球菌和鸡毒霉形体的gyrA基因序列，设计了通用引物和ll条寡核苷酸探针；利用点样仪将探针点在基片上，制成寡核苷酸芯片；采用PCR荧光标记靶基因，与芯片杂交，用荧光扫描仪检测信号；同时以PCR一测序法进行gyrA基因突变的检测。结果，PCR反应体系能特异性地扩增出靶基因；寡核苷酸芯片能同时检测不同病原菌GyrA第83、87位发生的突变，芯片检测结果与测序结果较为一致。结果表明，使用寡核苷酸芯片技术检测病原菌耐氟喹诺酮类基因突变是可行的；研究结果为基因芯片技术应用于兽医临床耐药性检测提供了基础。     

水貂阿留申病基因检测芯片的研究与初步应用

根据已发表的水貂阿留申病病毒（ADV）的序列，设计合成能扩增VP2基因片段的一对引物，通过生物素标记PCR技术，将VP2基因片段作为探针点在硝酸纤维素膜上，制作成疾病诊断基因芯片。以采取的160份可疑病貂的血液核酸作模板，进行PCR扩增，将其产物与诊断基因芯片进行特异性逆向点杂交检测；同时使用水貂阿留申病DOT-ELISA检测试剂盒进行检测、比较。结果表明基因芯片的检出率比ELISA方法高17％，试验同时还比较了常规PCR与基因芯片的敏感性。     

猪细小病毒检测基因芯片的构建及初步应用

本研究以猪细小病毒VP2基因为目的基因设计引物和探针,通过不对称PCR扩增Cy3标记的DNA片段与固定于芯片上的探针进行杂交,对杂交芯片进行扫描分析,根据荧光信号的强度来确定是否存在猪细小病毒。结果表明,采用浓度为5μmol/L的探针与PCR产物于47℃杂交1 h即可得到清晰的荧光信号,检测灵敏度可达34.5 ng/μL,同时用制备的基因芯片对临床20份疑似猪细小病毒病感染的病料进行检测,检测结果与PCR检测结果符合率达100%,表明基因芯片检侧技术是一种灵敏度高、特异好的检侧方法。该方法的建立可以快速有效地对猪细小病毒做出诊断,具有较好的应用前景。     

基因芯片技术检测细菌耐药性

1　基本概念生物芯片 (Biochip)是指将大量的生物分子探针以大规模阵列形式排布在很小的载玻片、尼龙网等载体上 ,通过与标记的样品进行杂交 ,检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。依据生物分子探针的不同 ,生物芯片可分为很多种类 ,包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片。目前研究最成功的且形成一定商业市场的是 DNA芯片 (DNAchip或DNA Microarry) ,又称为基因芯片 (Gene chip) ,即将无数预先设计好的寡核苷酸、c DNA、基因组 (Ge-nomic) DNA在芯片上做成点阵 ,与样品中同源核酸分子杂交。包括两种模式 :一是…     

基因芯片技术在药物研究中的应用

生物芯片是由现代分子生物学技术结合微加工技术制成的具有一定生物学分析检测功能的微型器件，以DNA芯片和PCR、毛细管电泳及介电电泳为代表。九十年代以来，在人类基因组实施计划的推动下，DNA芯片技术得到了迅猛的发展，具在生命科学的研究中开始发挥作用。DNA芯片技术能够同时分析成千上万个基因或基因组，研究与疾病诊断相关的基因序列，可用于药理基因组学研究与基因重复测序工作，它在药学领域将对于药物靶标的发现、多靶位同步超高通量药物工筛选、药物作用的分子机理研究、中医药基础理论的现代化、药物活性和毒性评价等领域具有其它方法无可比拟的优势。美国Affymetrix公司已开始与Merck公司、Hoffmanlaroche公司等合作，将基因芯片技术用于新药筛选；Incyte Pharmaceuticals,Synteni,Nanogen等公司也采用基因芯片技术进行新筛选，以期从天然药物或合成物中筛选出基因相关药物。     

多重链接探针扩增技术的原理及应用

多重链接探针扩增技术是将核酸杂交和PCR链式扩增相结合的一项高通量检测技术。该技术特异性强、敏感性高,可以实现多达50个靶分子的同步检测。自2002年被报道以来,该技术取得了很大进展,目前已广泛用于遗传性疾病的基因检测、肿瘤预后及传染病高通量检测领域。本文就多重链接探针扩增技术的原理、优缺点及应用等进行了探讨。     

应用寡核苷酸芯片检测猪口蹄疫病毒的初步研究

本研究根据口蹄疫病毒(FM DV)基因组序列保守区,设计合成2对引物,通过RT-PCR方法筛选出特异引物,用Cy3标记下游引物5′端;针对这个基因片段,设计合成4条寡核苷酸探针,开展靶基因扩增和克隆、阳性质粒构建、芯片杂交与反应条件优化以及芯片灵敏度和特异性分析等试验研究,建立FM DV的基因芯片检测方法,同时应用该芯片检测了现地标本39份,证明该芯片的灵敏度高、特异性好,可以准确检测出猪口蹄疫病毒,为建立猪病基因芯片诊断技术平台奠定基础。