猪流行性腹泻病毒S1蛋白的免疫原性评估

为了评估猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白的免疫原性,利用果蝇胚胎S2细胞表达重组S1蛋白,将纯化的S1蛋白免疫4周龄昆明小鼠,收集免疫血清及脾淋巴细胞,通过ELISA、病毒中和试验和流式细胞术等方法分析表达的重组S1蛋白的免疫原性。结果显示,与对照组(PBS)相比,重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠血清中特异性IgG抗体水平显著提升;二免后14 d,果蝇细胞重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠的中和抗体效价达到1∶320;免疫后小鼠脾脏淋巴细胞具有更强的增殖能力;外周血CD3⁺T细胞百分比显著增加,CD4⁺/CD8⁺T细胞比值高于对照组;小鼠血清中IL-4、IFN-γ水平显著上升。综上,成功表达了重组PEDV S1蛋白,其可以诱导小鼠产生高效价的中和抗体,促进细胞免疫应答。     

奶牛乳房炎主要病原菌GapC蛋白生物信息学分析及抗原表位预测

奶牛乳腺炎是主要由病原菌感染引起的奶牛常见疾病，新型疫苗研发是防控奶牛乳腺炎的重要内容之一。引起奶牛乳腺炎的主要病原菌为链球菌和葡萄球菌，包括无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，它们都存在甘油醛-3-磷酸脱氢酶C(GapC)，且均能诱导机体产生良好的抗感染免疫保护作用。但对链球菌和葡萄球菌GapC的交叉免疫原性分析和研究缺乏报道。研究从GenBank获取链球菌和葡萄球菌GapC基因序列，利用生物信息学软件对理化性质、同源性、T细胞和B细胞表位等进行分析。结果显示，这些病原菌GapC均由336个氨基酸组成的亲水性蛋白，且无规则卷曲占比较高，表明具有良好的抗原性；三种链球菌与两种葡萄球菌之间GapC的氨基酸序列同源性67.8%～69.9%，存在4个共同线性B细胞表位、9个共同CD4⁺T细胞表位和9个共同CD8⁺T细胞表位，表明有一定的交叉免疫原性，为进一步实验研究GapC交叉免疫原性提供重要参考。     

小鼠骨髓源CD103+DC分离培养及LPS对其形态与功能特征的影响

旨在建立C57BL/6小鼠骨髓源CD103⁺树突状细胞(CD103⁺ dendritic cell,CD103⁺DC)分离培养方法,阐述LPS对其形态与功能特征的影响。在无菌条件下分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,并用重组GM-CSF和FLT3L对其进行体外联合诱导培养;利用光镜、扫描电镜、荧光显微镜和流式细胞术,分别对LPS作用前后细胞形态、表型及功能进行了分析。结果表明,细胞培养至第3天有零星集落出现,第13天后集落开始分散,可见典型的树突状突起,第15天后可得到大量的CD103⁺DC,加LPS刺激培养24 h后细胞表面树突样结构更加明显;分离培养的骨髓细胞能够表达表面分子CD103,其表达率达90%以上。RPMI-1640组(LPS未刺激组)可吞噬VOA的CD103⁺DC比例为25.70%,能够表达MHC-Ⅱ和CD83阳性细胞分别为41.31%和13.79%;LPS刺激组可吞噬VOA的CD103⁺DC比例为10.33%,能够表达MHC-Ⅱ和CD83的阳性细胞分别为68.10%和24.71%。MTT法检测结果显示,经LPS处理的CD103⁺DC刺激T细胞增殖的能力明显增强。综上所述,分离于C57BL/6小鼠的骨髓细胞,可在体外经FLT3L和GM-CSF共同诱导培养出CD103⁺DC,LPS可促进CD103⁺DC的成熟。     

猪链球菌2型灭活疫苗对小鼠的免疫效果评价

在前期筛选出2株毒力强、抗原性好、遗传稳定的猪链球菌2型(SS2)疫苗菌株(HF2、HF3株)并分别制成灭活疫苗(采用ISA 201 VG矿物油佐剂)的基础上,进一步与SS2商品化灭活疫苗(HA9801株,铝胶佐剂)同步免疫小鼠,利用间接ELISA、流式细胞术、免疫攻毒试验、细菌定植试验和病理组织学观察等方法测定小鼠血清中IgG抗体效价,细胞因子含量(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1),外周血中CD4⁺/CD3⁺、CD8⁺/CD3⁺ T细胞亚群含量,攻毒保护率,组织荷菌数和病理组织变化等指标。结果显示,二免7 d后,HF2、HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组的血清IgG抗体效价分别为1:25 600、1:12 800、1:25 600;HF2灭活疫苗组的IL-4、IL-10含量显著高于HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组,IFN-γ、TNF-β含量显著高于HF3灭活疫苗组,但MCP-1含量显著低于HF3灭活疫苗组;HF2和HF3灭活疫苗组的CD4⁺/CD3⁺ T细胞比率均显著低于HA9801商品化灭活疫苗组,但CD8⁺/CD3⁺ T细胞比率差异不显著;HF2、HF3灭活疫苗和HA9801商品化灭活疫苗对小鼠的攻毒保护率均为100%;HF2灭活疫苗组小鼠的肺、脾脏组织荷菌数显著低于HF3灭活疫苗组;HF2灭活疫苗组小鼠的肺、肾、脾脏病理变化较HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组轻微。综合结果表明,由SS2(HF2株)制备的ISA 201 VG佐剂灭活疫苗免疫小鼠后不仅可产生较强的免疫应答,还可完全抵抗强毒株的攻击。     

抗原浓度和DC数量对OT-I小鼠CD8+ T细胞分化与增殖的影响

【目的】探讨细胞毒性T细胞(CTL)表位肽SIINFEKL浓度和树突状细胞(DC)数量对CD8+T细胞活化和增殖的影响。【方法】用小鼠重组粒细胞集落刺激性生物因子(GM-CSF)和IL-4诱导骨髓细胞来源的DC增殖和分化,将所得成熟树突状细胞(maDC)和SIINFEKL抗原肽,与免疫磁珠法分离的OT-I小鼠CD8+T细胞共培养。用不同质量浓度的SIINFEKL(100,10,1,0.1,0.01和0.001 ng/mL)或不同数量的DC(DC/T比例分别为1/20和1/5)与CD8+T细胞共培养,刺激CD8+T细胞增殖分化。于共培养不同时间收集细胞,流式细胞术测定CD8+T细胞的数量、分裂速度、细胞表面活化分子的表达丰度,碘化丙叮(PI)染色测定细胞活力。【结果】在任一DC/T比例下,SIINFEKL浓度过低,均不能引起CD8+T细胞的充分增殖,而高于CD8+T细胞最佳增殖浓度的SIINFEKL则导致CD8+T细胞数量减少;在SIINFEKL质量浓度为0.001~0.1 ng/mL时,增加DC数量能促进CD8+T细胞的扩增;而SIINFEKL质量浓度为1~100 ng/mL时,提高DC数量反而导致CD8+T细胞数量减少;高浓度抗原和DC数量能有效诱导CD8+T细胞的活化和分裂增殖,但过量刺激会使细胞死亡,导致CD8+T细胞数量减少。【结论】CD8+T细胞的增殖受DC数量和抗原肽浓度的共同调节,要获得持久有效的CD8+T细胞免疫,必须保证CD8+T细胞得到足够的抗原信号,同时避免抗原信号过强导致的细胞活化后死亡。     

番木瓜籽提取物对免疫抑制大鼠免疫调节作用研究

探讨番木瓜籽提取物苄基硫代葡萄糖苷(BG)对免疫抑制大鼠免疫调节作用。以前期提取的番木瓜籽已知成分BG含量为72%的提取物作为给药组，将SD大鼠随机分为空白组、模型组、左旋咪唑阳性对照组(LMS,50 mg/kg)及低、中、高给药组(50、100、150 mg/kg)；模型组与空白组均灌胃等量的生理盐水，连续给药10 d；各组(空白组除外)从第4天开始腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺(CTX)制备骨髓抑制动物模型，隔日给药，给予3次；进行血细胞检测、吞噬功能测定、脾脏细胞因子与转录因子测定；选择最佳剂量组对外周血T淋巴细胞亚群数量进行测定。结果显示，番木瓜籽提取物中、高剂量组对白细胞(WBC)、红细胞(RBC)具有升高作用，能显著提高巨噬细胞的吞噬指数和吞噬率(p<0.05或p<0.01)，对脾脏细胞因子及转录因子具有调节作用，最佳剂量组能够明显提高CTX降低的CD4⁺T、CD8⁺T细胞的数量(p<0.05或p<0.01)。番木瓜籽提取物对免疫抑制大鼠具有免疫增强作用。     

高精饲粮中添加苦豆子对杜蒙羔羊血清免疫及抗氧化指标的影响

【目的】研究高精饲粮中添加苦豆子对育肥杜蒙羔羊血清免疫及抗氧化指标的影响。【方法】选取32只健康、体质量为(25.73±2.17) kg的杜蒙杂交公羔随机分为4组,每组8个重复。对照组饲喂基础饲粮,T₁、T₂和T₃组在基础饲粮中分别添加0.1%、0.3%和0.5%苦豆子,饲喂75 d后测定相关指标。【结果】(1)第30天时,T₁组血清中T淋巴细胞亚群CD3⁺和T₂组T淋巴细胞亚群CD4⁺的水平显著升高(P<0.05),3个试验组血清中干扰素(IFN)的质量浓度显著高于对照组(P<0.05),而T₂和T₃组血清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)的质量浓度显著低于对照组(P<0.05);第60天时,T₁和T₂组血清中CD4⁺的水平及CD4⁺/CD8⁺的比值分别极显著和显...     

苯并芘诱导小鼠肺损伤模型的建立

构建苯并芘诱导小鼠肺损伤模型,选取6~8周龄雄性昆明小鼠,随机分成2组,经右侧胸壁穿刺肺内注射,对照组给予50 μL玉米油,处理组给予50 μL苯并芘-玉米油溶液(苯并芘浓度为20 mg·mL^-1),每周处理1次,共4次。分别在处理后30、90、180 d处死小鼠,采样以供检测。结果表明,处理组小鼠肺组织均出现不同程度的病理变化,晚期出现肺癌症状。与对照组相比,处理组小鼠脾脏出现明显的肿大,肺和脾脏中的CD8⁺T细胞先增多,后显著减少。本实验成功构建了苯并芘诱导小鼠肺损伤的动物模型,为肺癌的早期防御和进一步临床研究提供良好的动物模型。     

人CD8~+T细胞基因调控网络研究

为研究CD8~+ T细胞的功能异常机制,对功能异常状态CD8~+ T细胞和3种正常CD8~+ T细胞亚型[中央记忆CD8~+ T细胞(HCM)、效应记忆CD8~+ T细胞(HEM)和na?ve CD8~+ T细胞(HW)]的ATAC-seq(Assay for transposase accessible chromatin with high-throughput sequencing)数据进行基因调控网络比较,结果表明,3种正常CD8~+ T细胞特异表达的基因参与维持相应T细胞正常功能的信号通路,功能异常CD8~+ T细胞特异的基因参与癌症相关通路。转录因子调控网络比较分析发现功能异常CD8~+ T细胞GMEB2转录因子表达关闭。细胞表面受体调控网络比较分析发现功能异常CD8~+ T细胞CD7和P4HB受体的表达关闭。采用基因调控网络的数据进行比较分析,发现CD8~+ T细胞功能异常机制可能与GMEB2转录因子、CD7和P4HB受体表达关闭有关,这为抗病育种寻找特定基因提供新思路。     

公鸡生殖器官中T细胞分布密度研究

【目的】检测CD4+/CD8+T细胞在公鸡生殖器官中的分布密度。【方法】通过荧光定量PCR分析IL-8的表达水平,以及通过冰冻切片和免疫组化技术,定位健康公鸡的生殖系统中CD4+和CD8+T细胞。【结果】IL-8在附睾中表达水平最高,在睾丸中的表达水平最低;有少量的CD4+和CD8+T细胞被定位在睾丸间质细胞区。在附睾管和输精管的固有层和黏膜上皮中,均识别到两种类型的T细胞。而且CD4+和CD8+T细胞在公鸡生殖道中不同部位密度的变化趋势明显:CD4+和CD8+T细胞在公鸡生殖管道中段(输出管、附睾管)的密度高于两端(睾丸网、输精管)。【结论】T细胞介导的免疫防御主要发生在附睾,尤其附睾输出管和附睾管中。     

致病疫霉酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

致病疫霉是引起马铃薯晚疫病的重要病原菌,在全世界范围内造成了严重的经济损失。以2种不同致病力的致病疫霉菌株侵染马铃薯叶片5个时间点的混合菌丝样品作为cDNA文库的材料来源,利用Gateway法分别构建了初级文库与次级文库,初级文库与次级文库的库容量分别为1.60×10⁷、1.52×10⁷ CFU,插入片段长度大多在1 000～2 000 bp之间,重组率均达到100%。次级文库质粒转化酵母菌构建酵母文库,所得酵母文库滴度为1.00×10⁸ CFU/mL,转化效率为6×10⁸ CFU/μg。结果表明,本研究构建的酵母双杂交cDNA文库质量较高,完全可以满足互作蛋白高质量、高效率筛选的要求。该文库为后续深入解析致病疫霉的致病机制奠定了基础。     

手足口病患儿免疫学指标变化的临床意义

目的 探讨手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)患儿细胞免疫和体液免疫指标改变的临床意义。方法 80例HFMD患儿根据卫健委手足口病预防控制指南分为轻型组38例和重症组42例,选取同年龄段正常体检儿童40例为对照组,检测外周静脉血T淋巴细胞亚群、血清免疫球蛋白、血清补体及炎症细胞因子。结果 HFMD轻型组和重症组患儿外周血T淋巴细胞亚群(CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺细胞)检测值均低于正常儿童,差异有统计学意义(P<0.01),重症组低于轻型组(P<0.05)。HFMD轻型组和重症组患儿血清免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)、血清炎症细胞因子(IL-1、IL-6和TNF-α)水平高于正常儿童且随病情加重升高(P<0.01),INF及C3和C4含量低于正常儿童且随病情加重下降(P<0.01)。结论 HFMD患儿细胞免疫和体液免疫指标较正常儿童均改变且随病情加重变化幅度增加,可为临床判断病情严重程度及采取干预措施提供一定参考依据。     

miR-144/451在虾原肌球蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症中的作用研究

为探讨miR-144/451基因敲除对过敏性哮喘小鼠的影响,用虾原肌球蛋白诱导野生型小鼠和miR-144/451基因敲除鼠过敏性哮喘模型,研究miR-144/451基因对小鼠过敏性哮喘的影响。试验分为野生型小鼠对照组(WT-Ctl)、miR-144/451基因敲除小鼠对照组(KO-Ctl)、野生型小鼠哮喘组(WT-Asthma)和miR-144/451基因敲除小鼠哮喘组(KO-Asthma)。哮喘组以20μg虾原肌球蛋白腹腔注射致敏小鼠,每周1次,连续3周。激发采用滴鼻50μg虾原肌球蛋白,连续7 d,诱导小鼠过敏性哮喘模型。末次激发24 h后,小鼠称体重,取小鼠肺脏和脾脏,计算肺重/体重比值和脾重/体重比值;采用苏木素-伊红染色方法观察肺组织病理学变化;分离小鼠血浆,采用ELISA法检测血浆白介素4 (interleukin, IL-4)和IgE含量;测定虾原肌球蛋白刺激的脾脏淋巴细胞分泌IL-4和IL-5含量;流式检测支气管肺泡灌洗液中CD45⁺CD4⁺细胞百分比;qRT-PCR法检测脾脏中CD4⁺细胞Myc、IL-...     

载脂蛋白A1对小鼠淋巴细胞频率及活性的影响

以载脂蛋白A1 (ApoA-Ⅰ)基因敲除及转基因小鼠为基础,利用流式细胞术检测小鼠体内T细胞、B细胞和NK细胞及其亚型频率、表面活化型分子表达情况,探讨ApoA-Ⅰ水平对小鼠淋巴细胞频率及活性的影响.结果 表明:相对于野生小鼠,生理状态下ApoA-Ⅰ基因敲除小鼠脾脏、外周血CD8+T细胞及效应型(CD8+ NKG2D+、CD8+ CD44+CD62L-、CD8+ CD44+ KLGR1+、CD8+ IFN-γ+)细胞频率显著下调,而以上指标在A poA-Ⅰ转基因小鼠中上调.CD4+T细胞、调节性T细胞(CD4+ CD25+ FoxP3+)、B细胞和NK细胞频率在3组小鼠中均无显著差异.该研究说明ApoA-Ⅰ参与调控CD8+T细胞活性,但对CD4+T细胞、B细胞及NK细胞无显著影响.     

流式细胞术检测海洛因成瘾者外周血T细胞亚群的变化

目的 :观察海洛因成瘾者外周血 T细胞亚群的变化。方法 :用流式细胞术检测 5 0例海洛因成瘾者 (成瘾者 )和 5 0例正常人(对照组 )外周血 T细胞亚群的数目。结果 :海洛因成瘾者外周血 CD3+、CD4+、CD8+细胞数明显低于正常人 ( P<0 .0 5～ 0 .0 1 ) ,CD 4+/CD8+比值显著低于正常人 ( P<0 .0 1 )。结论 :海洛因成瘾者机体细胞免疫功能处于抑制状态。     

免疫功能在大鼠骨质疏松发病环节中的作用

目的研究免疫功能在大鼠骨质疏松发病环节中的作用。方法 36只新生雌性SD大鼠随机等分为6组,A、B、C、D、E、F组分别用生理盐水、谷氨酸单钠(MSG)、MSG+低剂量胸腺肽、MSG+高剂量胸腺肽、MSG+低剂量环孢素、MSG+高剂量环孢素灌胃,每周1次,连续7周。测定CD3、CD4、CD8和NK细胞数和体外T淋巴细胞转化功能,并进行骨组织形态学观察。结果 B组CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK细胞及T淋巴细胞转化能力明显低于A组(P<0.01)。与B组比较,C、D组CD3、CD4、CD4/CD8、NK细胞及T淋巴细胞转化能力明显升高(P<0.01),骨质疏松明显减轻;而E、F组CD3、CD4、CD4/CD8、NK细胞及T淋巴细胞转化能力明显降低(P<0.01),骨质疏松明显加重。结论免疫功能低下诱发骨质疏松,而增强免疫功能减轻骨质疏松。     

球孢白僵菌 GqBb 的分离、鉴定及其对 松果梢斑螟幼虫的致病性研究

为了探寻对松果梢斑螟有高致病性的病原微生物,本研究分离培养了采自秦皇岛北戴河区的感染松果梢斑螟幼虫病原物,结合菌种形态特征及 ITS 序列分析鉴定明确了其主要致病菌种,测定了其致病力。结果表明,该菌株为球孢白僵菌（编号 Gq-Bb 菌株）,当孢子悬浮液浓度从 1×10⁴孢子 /mL 逐步提高到 1×108 孢子 /mL时,其对各虫龄松果梢斑螟幼虫的致病性逐渐增强。当浓度为 1×10⁸孢子 /mL 时,其 1 龄和 2 龄幼虫的累计校正死亡率均达到 100%,3 龄、4 龄和 5 龄幼虫的分别为 96%、90% 和 77.33%。1 ～ 5 龄幼虫的 LC₅₀值分别为1.26×10³、1.90×10³、2.99×10³、2.12×10⁴、2.12×10⁵孢子/m L,LT₅₀分别为4.34～2.57、4.91～2.78、5.19～2.78、5.73 ～ 2.99和 6.44 ～ 3.64 d,...     

南蛇藤提取物联合miR-451抑制胃癌细胞侵袭和迁移的机制研究

为探讨南蛇藤提取物联合miR-451抑制人胃癌AGS细胞侵袭和迁移的作用机制,用慢病毒转染技术构建稳定过表达miR-451的人胃癌AGS细胞,记作AGS/miR-451⁺细胞。MTT试验检测不同浓度南蛇藤提取物(20、40、80、160或320μg·mL^-1)对AGS/miR-451⁺细胞增殖的影响。伤口愈合试验和Transwell试验观察南蛇藤提取物对细胞迁移的影响。qRT-PCR试验检测南蛇藤提取物处理后细胞内mTOR mRNA表达量的变化。Western blot试验分析南蛇藤提取物对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)和PI3K/AKT/mTOR信号转导通路相关蛋白质表达的影响。结果表明：南蛇藤提取物处理24 h后明显抑制AGS/miR-451⁺细胞的侵袭和迁移能力。细胞中E-Cadherin表达量增加,Vimentin和N-cadherin表达量降低。mTOR通路相关蛋白质,如mTOR、PI3K、AKT、4EBP1的总蛋白质表...     

砷和铅对HepG2细胞毒性和氧化损伤的研究

为研究砷(Arsenic,As)和铅(Lead,Pb)单独以及联合作用对人肝癌细胞(Human liver carcinoma cells,HepG2)毒性作用和细胞氧化损伤的机制,采用不同质量浓度的As(2.65、3.15、3.65、4.15和4.65μg/mL)和Pb(160、190、220、250和280μg/mL)以及质量浓度比为1∶55的As+Pb分别或联合处理HepG2细胞24、48和72h,使用MTT法检测细胞活力;细胞培养24h后测定细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的相对含量。MTT结果表明:As、Pb和As+Pb的24、48和72h半数抑制浓度(IC50),As分别为4.20、4.03和3.74μg/mL;Pb分别为228.01、205.46和203.40μg/mL;As+Pb分别为3.10、3.17和3.18μg/mL。3组处理分别作用HepG2细胞24、48和72h表现出显著的生长抑制(P0.05),且细胞毒性与时间和浓度呈依赖性。当As、Pb单独作用和As+Pb联合作用HepG2细胞诱导ROS、LDH和MDA水平显著升高(P0.05),GSH的含量显著降低(P0.05)。综上所述:As+Pb联合作用与单独作用表现出较强的细胞毒性,毒性大小顺序依次为:As+PbAsPb,且As+Pb联合作用表现为拮抗效应。活性氧以及细胞氧化应激的产物可能是诱导重金属对细胞毒性的重要原因。     

鸭源呼肠孤病毒感染引起雏鸭免疫损伤的观察 征文

 【目的】观察鸭源呼肠孤病毒对雏鸭脾、法氏囊的病理损伤及相关免疫指标,初步阐明鸭源呼肠孤病毒对所引起的机体免疫器官损伤以及机体免疫抑制,为进一步探讨发病机理和免疫防治提供理论依据。【方法】7日龄樱桃谷雏鸭人工感染鸭源呼肠孤病毒,分别观察脾、法氏囊组织病理学变化,检测脾、法氏囊指数,外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率,脾、法氏囊IgY生成细胞,并分析试验组及对照组差异显著性。【结果】感染鸭源呼肠孤病毒后,雏鸭脾出现明显坏死灶,之后出现肉芽肿结构,法氏囊固有层淋巴滤泡明显减少;脾、法氏囊指数降低;外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率降低;脾IgY生成细胞数量增多、法氏囊IgY生成细胞数量减少。【结论】鸭源呼肠孤病毒感染可导致雏鸭免疫器官严重损伤并引起免疫抑制。