嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物的敏感性及耐药相关基因分析

为明确嗜水气单胞菌临床分离株对常用氟喹诺酮类药物的敏感性和耐药菌株中gyrA和parC基因的突变情况。试验采用自动化细菌药敏分析仪测定4种常用氟喹诺酮类药物对23株鱼源嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度,并依据耐药数目的不同选取9株嗜水气单胞菌,PCR扩增其gyrA及parC基因的喹诺酮抗性决定区(QRDR),直接测序后进行多序列比对分析。结果显示:嗜水气单胞菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星的耐药率依次为8.7%、30.4%、73.9%和43.5%;序列分析发现gyrA基因编码的第83位氨基酸存在Ser→Ile、Ser→Val的突变,parC基因编码的第87位氨基酸同样存在Ser→Ile的突变。表明临床分离的嗜水气单胞菌对恩诺沙星耐药最为严重,氧氟沙星、环丙沙星次之,对诺氟沙星较为敏感;尽管绝大多数耐药菌株的药物靶位基因QRDR区域有突变发生,但是菌株的耐药性与药物靶位基因QRDR区域有无发生突变并不存在线性关联,提示我们药物靶位的变化并非是氟喹诺酮类耐药菌株唯一的抗性机制。     

嗜水气单胞菌对四环素类和氟喹诺酮类药物的耐药性研究

在离体条件下进行患病鱼体内分离的嗜水气单胞菌3个菌株对四环素类和氟喹诺酮类药物的耐药性获得、稳定性、保存条件和交叉耐药性研究.结果表明:分别在含有盐酸多西环素、盐酸四环素、诺氟沙星和左氧氟沙星的药物培养基中连续传代9次(在28℃条件下培养72 h为1代)后,四环素类对3个菌株的最小抑菌浓度上升倍数为8～32倍,氟喹诺酮...     

水产养殖过程中嗜水气单胞菌对喹诺酮药物的敏感性及耐药基因分析

对养殖水体中的嗜水气单胞菌进行选择性分离,分析其对不同抗生素药物的敏感性。采用PCR方法对耐药株的耐药基因gyrA、qnrA和qnrS进行检测。结果表明,嗜水气单胞菌对喹诺酮药物的敏感性最强,这与喹诺酮药物的过度使用密切相关。通过对耐药性嗜水气单胞菌和敏感性嗜水气单胞菌的耐药基因扩增结果对比,发现耐药基因gyrA的检出率最高。该研究结果可为水产养殖过程中嗜水气单胞菌的耐药性检测及抗生素的合理使用提供分子生物学依据。     

嗜水气单胞菌毒素研究

嗜水气单胞菌近年引起我国养殖鱼类暴发性鱼病的大面积流行，给我国渔业生产造成了极大损失。溶血毒素是该菌致病的主要因子，该毒素是一条链的多肽，分子量５２０００道尔顿左右，与红细胞膜上的血型糖蛋白结合形成寡聚体，进而在膜上成洞，溶血。ＤＮＡ序列分析结果显示该毒素基因与典型的原核基因相符。由于该菌的抗药性等问题，应用基因工程的方法改造病原菌是防治暴发性鱼病的有前途的手段之一。     

嗜水气单胞菌喹诺酮类药物抗性决定区基因片段的克隆与突变分析

将分离到的4株对环丙沙星，诺氟沙星和氧氟沙星等喹诺酮类药物耐药的嗜水气单胞菌、2株敏感菌，进行旋转酶基因A亚单位（gyrA)喹诺酮抗性决定区基因（QRDR）PCR扩增。引物序列A1:agagttcctatcttgattacg;a2:ctgtgatgtaggtcatcaact，在gyrA基因中的位置分别为53-73和620-640。PCR扩增后，将扩增产物克隆到pMD-18T载体，酶切鉴定后测序。用DNAstar软件分析比较其蛋白序列，发现4个氨基酸突变位点，分别是83位点的Ser-Ile（4株耐药菌），92位点的Leu-Met(4株耐药菌），174位点的Ile-Phe(3株耐药菌），202、203位点的Asn、Leu-Asp、Arg（3株耐药菌，另1株Leu未突变）。83位点的突变与大肠杆菌等一致，122位点具有保守的Try，耐药菌突变后的氨基酸残基分子量均比对应增大。4株耐药菌、2株敏感菌的喹诺酮抗性决定区基因片段序列巳登录GenBank，注册号AY039655，AY039656，AY138539，AY138540，AY138537，AY138538。     

几种氟喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌体外药效学研究

采用试管两部稀释法测定了盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、二氟沙星对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度 (MIC)和最小杀菌浓度 (MBC) ,MIC分别是 :0 .0 0 6 2 5 ,0 .0 0 6 2 5 ,0 .0 12 5 ,0 .0 5 ,0 .2 0 ︼g.m L- 1 ,MBC分别是 0 .0 2 5 ,0 .0 2 5 ,0 .0 5 ,0 .10 ,0 .80 ︼g.m L- 1。同时研究了不同药物浓度 (2 MIC,5 MIC,8MIC)对嗜水气单胞菌杀菌的经时变化规律。结果表明 ,这几种药物从 2 MIC到 5 MIC浓度在 3h内菌数减少的 1g值之间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,从 5 MIC浓度到 8MIC浓度在 3h内菌数减少的 1g值之间差异不显著 (P >0 .0 5 )     

体外药动模型中诺氟沙星对嗜水气单胞菌的药动及药效研究

通过建立体外药动模型的方法,研究诺氟沙星对嗜水气单胞菌Aerom onas hydrophila的药动-药效(简称PK-PD)参数。结果表明:在消除半衰期为3.4 h的模型内,2M IC(最小抑菌浓度)、4M IC和8M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够抑制4 h,4 h后细菌出现再生长,而16M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用;在消除半衰期为77 h的模型内,2M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够抑制4 h,4 h后细菌出现再生长,而4M IC、8M IC和16M IC对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。消除半衰期为3.4 h的模型内,当AUC0→24 h/M IC(药时曲线下面积与最小抑菌浓度的比值)>42.43±9.21,Cm ax/M IC(峰浓度与最小抑菌浓度的比值)>15.78±0.22时,诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用;消除半衰期为77 h的模型内,当AUC0→24 h/M IC>41.87±10.16,Cm ax/M IC>4.79±0.11时,诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。     

体外药动模型中恩诺沙星对嗜水气单胞菌的药动及药效研究

为降低嗜水气单胞菌耐药菌株的产生速度,延长恩诺沙星在水产动物上的应用年限,通过建立体外模型的方法,研究恩诺沙星对嗜水气单胞菌的药动-药效(PK-PD)参数。在消除半衰期为100h的模型内,2MIC(最小抑菌浓度)的恩诺沙星对嗜水气单胞菌能够抑制6h,6h后细菌出现再生长;4、8和16MIC对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。在消除半衰期为168h的模型内,2MIC的恩诺沙星对嗜水气单胞菌能够抑制6h,6h后细菌出现再生长;4、8和16MIC对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。结果表明,当AUC0→24/MIC>75.24±13.24,Cmax/MIC>4.10±0.12时,恩诺沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。     

低剂量四环素诱导嗜水气单胞菌产生耐药性的分析

[目的]探索抗生素长期低剂量浓度刺激对致病菌耐药性产生的影响。[方法]以盐酸四环素为例,对1株鳖源嗜水气单胞菌开展抗生素耐药诱导试验。用盐酸四环素亚抑菌浓度(1/2MIC)持续4代(每代诱导72 h)刺激1株鳖源嗜水气单胞菌。[结果]这株嗜水气单胞菌对四环素由敏感转至耐药。[结论]四环素亚抑菌浓度长期刺激对致病菌有较强的致耐药作用。该研究对养殖用药具有一定的指导意义。     

体外药动模型中诺氟沙星对嗜水气单胞菌的药动及药效研究

通过建立体外药动模型的方法,研究诺氟沙星对嗜水气单胞菌Aerom onas hydrophila的药动-药效（简称PK-PD）参数。结果表明：在消除半衰期为3.4 h的模型内,2M IC（最小抑菌浓度）、4M IC和8M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够抑制4 h,4 h后细菌出现再生长,而16M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用;在消除半衰期为77 h的模型内,2M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够抑制4 h,4 h后细菌出现再生长,而4M IC、8M IC和16M IC对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。消除半衰期为3.4 h的模型内,当AUC0→24 h/M IC（药时曲线下面积与最小抑菌浓度的比值）〉42.43±9.21,Cm ax/M IC（峰浓度与最小抑菌浓度的比值）〉15.78±0.22时,诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用;消除半衰期为77 h的模型内,当AUC0→24 h/M IC〉41.87±10.16,Cm ax/M IC〉4.79±0.11时,诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。     

水产动物源嗜水气单胞菌药物敏感性及QRDR基因突变分析

为了解临床分离的59株嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物的耐药性及其靶基因gyrA和parC编码的喹诺酮类耐药决定区(QRDR)的突变情况。采用纸片琼脂扩散法测定15种抗菌药物对水产动物源嗜水气单胞菌的耐药情况,采用PCR法扩增gyrA和parC,并通过测序分析其靶基因突变情况。结果表明:24株(40.7%)嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物耐药,其中对萘啶酸、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星的耐药率依次为40.7%、16.9%、20.3%、8.5%。敏感菌株QRDR靶位点未发生突变,24株喹诺酮类耐药菌株中gyrA基因编码的第83位氨基酸均存在Ser→Ile突变;19株菌parC基因编码的第87位氨基酸也发生突变,其中18株为Ser→Ile突变,1株为Ser→Arg突变,有5株未检测到突变;ParC亚基氨基酸突变的菌株其GyrA亚基均同时发生氨基酸突变。表明临床分离的嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物耐药程度不一,其中萘啶酸的耐药最为严重,诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星敏感性较高。喹诺酮类耐药菌株GyrA亚基QRDR氨基酸突变,可能是引起萘啶酸耐药的主要原因。临床分离嗜水气单胞菌QRDR区域的突变具有随机性,但靶位点GyrA的Ser83→Ile以及ParC的Ser87→Ile是最主要的突变方式,另外喹诺酮类药物耐药性的产生可能还与其他耐药机制存在关联。     

嗜水气单胞菌超微结构的研究

嗜水气单胞菌的代表株Ｊ－Ｉ负染显示它具有一端生单鞭毛及周身菌毛,菌毛有两种形态：一种是短而硬,数量多,另一种是细而长,易弯曲,数量少。不同的培养条件影响菌毛、Ｓ蛋白的表达。     

嗜水气单胞菌研究进展

介绍了嗜水气单胞菌的分类地位、生物学性状等,并概述了嗜水气单胞茵检测技术方面的研究进展。     

鳖嗜水气单胞菌疫苗的试制

嗜水气单胞菌能引起人和动物的疾病。我国的许多淡水鱼类的暴发病病原是嗜水气单胞菌［孙其焕等1991,陈怀青和陆承平1991］。暴发病的流行造成巨大的经济损失,严重影响了我国渔业的发展。近年来各种名特水产品的养殖也正在受这种细菌的危害［孙佩芳等1996,陆宏达和金丽华1996］。一味地应用抗生素及化学药物将会带来很多不良后果,且效果不很明显。因此开发一种有效的疫苗势在必行。国外商品性鱼用疫苗在七十年代中已开始生产,国内也在研究试制［杨先乐等1989,许淑英等1994,孙建和和陆承平1995］。本实验室人员从患穿孔病的鳖上分离到…     

嗜水气单胞菌流行病学研究进展

通过对传统流行病学和分子流行病学的比较,概括了嗜水气单胞菌的流行病学的研究现状,展望分子流行病学在水产动物嗜水气单胞菌流行病学上的研究前景。     

鳖的嗜水气单胞菌的分离及其特性鉴定

从杭州市某甲鱼养殖场发生后咱持续性慢性不明传染病病死甲鱼中，分离到多株细菌。用玻板凝集试验筛选出与嗜水气单胞菌抗血清发生强阳性反应的两株细菌，经形态、染色、生长特性研究及生化反应鉴定，确定这两株细菌均为嗜水气单胞菌，但其中一株具毒力，在血琼脂上呈β－溶血，能在４小时内致死小白鼠，而另一株无毒力，不溶血。     

中华鳖嗜水气单胞菌病研究概况

综述了嗜水气单胞菌所引起的中华鳖疾病种类、症状、致病机理及防治方法，并就免疫学防治的必要性和可行性提出了一些见解。     

鳖嗜水气单胞菌疫苗的试制

嗜水气单胞菌能引起人和动物的疾病。我国的许多淡水鱼类的暴发病病原是嗜水气单胞菌［孙其焕等1991，陈怀青和陆承平1991］。暴发病的流行造成巨大的经济损失，严重影响了我国渔业的发展。近年来各种名特水产品的养殖也正在受这种细菌的危害［孙佩芳等1996，陆宏达和金丽华1996］。一味地应用抗生素及化学药物将会带来很多不良后果，且效果不很明显。因此开发一种有效的疫苗势在必行。国外商品性鱼用疫苗在七十年代中已开始生产，国内也在研究试制［杨先乐等1989，许淑英等1994，孙建和和陆承平1995］。本实验室人员从患穿孔病的鳖上分离到…     

嗜水气单胞菌耐药性研究进展

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)具有广泛的致病性,是水生动物尤其是鱼类最常见的致病菌.对嗜水气单胞菌耐药性的产生及机制包括固有耐药性、获得性耐药性以及耐药性基因的种类等进行了论述,并对发展前景进行了展望.     

几种培养因子对喹诺酮类药物抑制体外嗜水气单胞菌活性的影响

研究了培养基酸碱度(pH)、镁离子(Mg2+)、细菌接种量及小牛血清对4种喹诺酮药物抑制鱼类体外病原菌嗜水气单胞菌Aeromonashydrophila的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的影响。结果表明,当pH为7和8时,4种药物的MIC和MBC均最小,当pH升高或降低时,MIC和MBC均明显升高,抑菌活性明显降低。Mg2+对4种药物的体外抗菌活性均有不同程度的影响,随着Mg2+浓度的升高,环丙沙星和恩诺沙星的MIC和MBC均升高;当Mg2+浓度为0～2 0mg/mL时,二氟沙星的MIC无明显变化;Mg2+浓度为1 0mg/mL时,二氟沙星的MBC由0 8μg/mL上升到3 2μg/mL,单诺沙星的MIC为0 00625μg/mL,但随着Mg2+浓度的增加,MIC和MBC均有升高。细菌接种量为102～105CFU/mL时,环丙沙星和二氟沙星的MIC和MBC均无变化,只有当菌数增至106CFU/mL时,MIC和MBC才开始随着接种细菌量的增加而增加。血清能明显降低4种喹诺酮类药物的体外抑菌活性。