柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的mRNA差异显示

利用柔嫩艾美耳球虫马杜霉素敏感虫株裂殖子和抗药虫株裂殖子为材料,对马杜霉素敏感虫株和抗药虫株进行差异显示PCR,共回收34条电泳差异片段,反向Northern点杂交鉴定4个片段为真正差异片段,并对4个片段进行测序、B1ast同源性比较.来自于马杜霉素抗药虫株裂殖子的ACD3-2序列与柔嫩艾美耳球虫微线-5同源性99%,说明AcD3-2序列是该基因的部分序列,微线-5蛋白与虫体融解宿主细胞膜、入侵、运动和溢出有关,在第二代裂殖子时期,抗药性虫株该序列发生转录,而在敏感虫株中沉默;HCD1序列来自马杜霉素敏感虫株,与柔嫩艾美耳球虫表面抗原16和17序列同源性分别为83%和86%,说明与这2个基因同源.AGD5片段来自抗药虫株,HAD8-2序列来自敏感虫株,通过比较这2条序列可能为新序列.     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

马杜霉素对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)超微结构的影响

将马杜霉素按 0 .0 0 0 5 %的比例混入饲料 ,作用于鸡体内柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella) ,透射电镜观察 ,发现裂殖体变小 ,内含裂殖子的数目减少 ,裂殖子膨胀变为椭圆 ,裂殖子间 (带虫空泡内 )微管结构模糊、膨胀 ,裂殖体中有髓鞘样结构出现 ;细胞膜外突和细胞质分离形成空隙 ,细胞膜有破损、结构模糊 ;细胞质出现空泡化 ,内部出现附加体和髓鞘样结构 ;少数细胞核的外膜外突和内膜分离 ,有的部位的核膜模糊、破损。裂殖子顶体结构发生异常变化 ,棒状体消失 ,微线数目减少或者消失。线粒体表现为形态改变 ,肿大变圆 ,或者变为马蹄形 ,内膜和嵴脱落 ,内部形成空泡、膜状结构、螺旋状或者髓样结构 ,线粒体的嵴与长轴平行排列 ,且贯穿线粒体。作者推测 ,抗生素类抗球虫药的作用机理可能是 ,通过使虫体结构的完整性受损 ,抑制虫体的物质代谢及能量代谢等生理机能 ,达到杀死虫体或者抑制虫体生长、发育和繁殖的目的。     

柔嫩艾美耳球虫YL株抗药性研究

用柔嫩艾美耳球虫杨凌株 ( YL t)对 1 4日龄雏鸡进行感染 ,检测了该虫株对 4种常用抗球虫药 (马杜拉霉素、地克珠利、克球粉和氯苯胍 )的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标 ,进行综合评定 ,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性 4个等级。结果表明 ,该虫株对马杜拉霉素有轻度抗药性 ,对地克株利有完全抗药性 ,对克球粉和氯苯胍无抗药性。     

2株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的抗药性

选择130只21日龄雏鸡，研究了柔嫩艾美耳球虫（E.tenella)南京株和凤阳株对地克珠利（Diclazuril)、马杜霉毒（Maduramicin)、氯羟吡啶（Clopidol)、氯苯胍（Robenidine)和氨丙啉（Amprolium)的抗药性。试验鸡随机分成13组，其中每株球虫均设5个感染用药组，1个感染不用药组，另设1个不感染不用药组，每组10只鸡。以POAA，RLS，ROP，ACI作为指标。结果表明，2株柔嫩艾美耳球虫均对氨丙啉轻度抗药，对地克珠利敏感或轻度抗药，对氯羟吡啶中度抗药。对马杜霉和氯苯胍中度抗药或安全抗药。提示：目前在凤阳地区可合理地使用地克珠利和氨丙啉，对氯羟哟啶应慎用，对马杜霉素和氯苯胍须减少或暂停使用。     

柔嫩艾美耳球虫交叉抗药性试验

以雏鸡为试验对象,以抗球虫指数(ACI)为判断指标,检测5 mg/kg马杜霉素,70 mg/kg盐霉素,1 mg/kg 地克珠利对抗盐霉素株、抗地克珠利株和实验室保存的敏感株的控制效果。结果表明,马杜霉素对3 个虫株都有很好的抑杀效果,地克珠利也可有效地控制抗盐霉素株,同时,盐霉素也可有效地控制抗地克珠利株,说明盐霉素和地克珠利2种药物之间没有交叉抗药性。     

柔嫩艾美耳球虫莆田株抗药性研究

为掌握鸡场球虫抗药程度,以便制定合理用药方案,采集福建省莆田市某鸡场盲肠球虫,进行柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离和纯化;采用鸡体试验法,设立5个用药组、1个感染不用药对照组和1个不感染不用药对照组,以病变记分减少率(Reduction of lesion sores,RLS)、抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)、相对盲肠卵囊产量(Relative at oocyst production,ROP)和最适抗球虫活性百分率(Percent of optimum anticoccidial activity,POAA)4项为指标,检测该球虫对癸氧喹酯、尼卡巴嗪、地克珠利、二硝托胺和氯苯胍等5种常用抗球虫药的抗药性。结果表明:该虫株对癸氧喹酯敏感,对地克珠利、二硝托胺和氯苯胍具有完全抗药性,对尼卡巴嗪为中度抗药性,说明目前莆田市球虫抗药性非常严重,癸氧喹酯可用于抗球虫病,其他药物应慎用或暂停使用。     

6株柔嫩艾美耳球虫对4种药物的交叉抗药性研究

６株柔嫩艾美耳球虫对４种药物的交叉抗药性研究＠余丽芸＠汪明＠蒋金书＠侯喜林￥黑龙江八一农垦大学动物科技学院￥中国农业大学动物医学院６株柔嫩艾美耳球虫对４种药物的交叉抗药性研究＊余丽芸汪明＊＊蒋金书＊＊侯喜林（黑龙江八一农垦大学动物科技学院,密山１５８３０８...     

柔嫩艾美耳球虫扬州分离株对8种抗球虫药的抗药性

将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)扬州分离株感染14日龄苏禽黄羽肉鸡,设立8个用药组、1个感染不用药对照组和1个不感染不用药对照组,以相对卵囊产量、病变记分减少率、最适抗球虫百分数和抗球虫指数为指标对该虫株对盐霉素、马杜拉霉素、球痢灵、氯羟吡啶、氨丙啉、尼卡巴嗪、甲基三嗪酮、地克珠利等8种常用抗球虫药的抗药性进行了综合评定,分析了该地区球虫的抗药性及对策。结果表明,该虫株对甲基三嗪酮敏感,对氨丙啉具有中度抗药性,对盐霉素、马杜拉霉素、球痢灵、氯羟吡啶、尼卡巴嗪、地克珠利等其他6种药物具有完全抗药性。提示目前在扬州地区甲基三嗪酮抗球虫疗效最好,氨丙琳效果稍差,应合理使用,盐霉素等其他6种药物应慎用、减少或暂停使用。     

鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株的抗药性研究

使用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)西宁株(Et XN)感染13日龄岭南黄肉鸡,进行该虫株对轻灭(地克珠利,Diclazuril)、马度米星铵预混剂(Maduramicin Aminonium Premix)、球痢灵(磺胺氯吡嗪钠,Sulfachoropyridazine)、球迪2000(盐酸氯丙啉,Amprolium Hydrochloride)4种药物的抗药性研究。以相对卵囊产量(ROP)、病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫活性百分数(POAA)、抗球虫指数(ACI)作为指标进行综合判定。结果表明:该虫株对马度米星铵预混剂具有轻度抗药性,对球痢灵具有中度抗药性,对轻灭和球迪2000具有完全抗药性。     

柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG2基因的克隆与表达

根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2 N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32 a(+),构建了重组表达质粒pET-32 a(+)-SAG2,并将其转化至E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku。菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。     

柔嫩艾美球虫杨凌株表面抗原SAG10基因的克隆与原核表达

从柔嫩艾美球虫第二代裂殖子总RNA中扩增＆SAG10基因，与pGEM-TEasy载体连接后转化大肠杆菌（E．coli）DH5a，筛选阳性克隆，扩增不舍N端信号肽的编码序列，分别插入表达载体pET-32a（＋）和pMAL-c2X，转化至E．coliRosetta，以IPTG诱导表达。结果表明，pET-32a（＋）-EtSAGIO在E．coliRosetta中的表达产物约占菌体总蛋白的43％，融合蛋白分子质量约为47ku，以包涵体形式存在；而pMAL-c2x-EtSAG10在E．coli Rosetta中表达的重组蛋白为可溶性，表达产物约占菌体总蛋白的35％，融合蛋白分子质量约为69ku。以表达的可溶性EtSAG10重组蛋白100μg／只肌肉注射免疫雏鸡，攻虫后以盲肠病变计分、盲肠卵囊数（OPG）、相对增重率和抗球虫指数（ACI）评价，免疫组相对盲肠卵囊产量为47．7％，抗球虫指数由86．79提高至152．13。提示，重组表达的EtSAG10可诱导雏鸡产生一定的抗球虫免疫保护。     

柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导

采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。     

紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因筛选和分析

为获得紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因,将0.5%紫茎泽兰提取液作用于鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化过程,采用抑制消减杂交技术（SSH）筛选处理后卵囊的差异表达基因,通过GO和COG功能预测分析,并采用实时荧光定量PCR验证差异表达的基因。结果显示,采用SSH成功构建了紫茎泽兰处理前后鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的cDNA消减文库,获得86条ESTs序列,经拼接和聚类后得到31条独立基因（Unigenes）,其中有23个基因有功能注释,8个基因没有功能注释,另外有4个基因没有同源性匹配。为进一步验证文库的特异性,从中随机选取3个差异表达基因,运用实时荧光定量PCR技术验证表面抗原13、3-羟酰辅酶A脱氢酶和细胞色素P450基因在紫茎泽兰处理前后的表达差异,结果显示,3个基因在经紫茎泽兰处理的鸡球虫孢子化卵囊中的表达量明显低于未处理组,说明紫茎泽兰对柔嫩艾美耳球虫卵囊具有一定的活性抑制作用。本试验获取了紫茎泽兰作用柔嫩艾美耳球虫卵囊的主要调控基因,为将紫茎泽兰研发成环境杀虫剂奠定了良好的理论基础,也可为球虫致弱疫苗或基因缺失疫苗的靶标筛选研究提供参考。     

柔嫩艾美耳球虫对盐酸氟乙基硫胺素耐药性的诱导

为评估盐酸氟乙基硫胺素产生抗药性的倾向,采用药物浓度递增法,在实验条件下进行柔嫩艾美耳球虫耐药性的诱导研究。每组动物用10只快大黄肉鸡,每只鸡接种1×105个孢子化卵囊,以50 mg/kg盐酸氨丙啉和盐酸氟乙基硫胺素为起始诱导浓度连续传代,以病变记分、存活率和卵囊数三项指标综合判定耐药性。经过10次传代,盐酸氨丙啉对敏感虫株的ACI为192.6,而对耐药虫株的ACI为109.1;经过12次传代,盐酸氟乙基硫胺素对敏感虫株的ACI为197.5,而对耐药虫株的ACI为110.6,对盐酸氨丙啉耐药虫株的ACI为163.2;结果表明成功地诱导出对盐酸氨丙啉、盐酸氟乙基硫胺素完全耐药的虫株。盐酸氟乙基硫胺素产生耐药速度慢于盐酸氨丙啉,与盐酸氨丙啉有部分交叉耐药性。     

柔嫩艾美耳球虫癸氧喹酯耐药株的诱导研究

采用药物浓度递增法,在实验室条件下进行柔嫩艾美耳球虫耐药虫株的诱导。以5.4 mg/kg癸氧喹酯为起始诱导浓度连续传代,以病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫指数(POAA)和抗球虫指数(ACI)3项指标综合判定耐药性,经9次传代,成功地诱导出对54 mg/kg癸氧喹酯具有完全抵抗力的耐药虫株,为进一步的球虫耐药的分子机理研究提供材料。     

用单胚mRNA差显技术克隆山羊早期胚胎发育相关基因

用单胚构建的mRNA差异显示技术，对体外培养的山羊早期2、4、8—16细胞期胚胎的基因表达进行了研究，并选择了一条在4细胞期胚胎特异表达的条带进行分析。结果表明：该片段与牛胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP3）基因具有88％的同源性。该基因通过调控IGFs的生物学活性而影响早期胚胎的生长发育，并具有促进细胞分裂和影响内分泌的作用，是羊早期胚胎发育过程中的重要调控因素。     

mRNA差异显示技术及其用于动物胚胎早期发育基因研究的进展

真核生物mRNA差异显示技术的创立及对该技术的一系列改进,为研究胚胎发育过程中有关基因的差异表达,以及有关基因的分子克隆提供了有效工具。本文概述了差显技术的原理及其在动物早期胚胎发育基因方面的研究进展。     

mRNA差异显示技术及其改进

分子生物学的首要任务之一就是比较不同细胞间或同一细胞不同时间与空间基因表达的差异。在多种基因检测技术中 ,mRNA差异显示技术作为研究细胞、组织在不同条件下 ,基因表达水平差异的重要手段 ,以不可替代的优势已被广泛用于生物学领域。该技术与传统的消减杂交等方法进行比较具有简便、快捷、灵敏、高效等优点 ,但也存在假阳性率高、易污染等缺点。为了克服以上缺点又不断涌现出一些改进技术。文章对该技术的原理、优势与不足及主要改进进行了综述