食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达

【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标基因,使用反转录荧光定量PCR研究各肠毒素基因在细菌生长周期中的表达水平变化。【结果】除see、ses和set外,其余8种肠毒素基因在51株食源性金黄色葡萄球菌菌株中均有检出,且sei和seg的检出率最高（27.45%）。各肠毒素基因在mRNA水平的时序性表达规律基本一致,均在对数后期达到峰值,随后快速下降。以内标基因为参照,同一菌株中不同肠毒素基因的相对表达量以及不同菌株中同一肠毒素基因的相对表达量均差异较大。【结论】本文系统研究了肠毒素基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布,并探究了肠毒素基因的时序性表达规律,对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制具有参考意义。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究进展

万古霉素在临床上的使用越来越频繁,成为治疗MRSA的最后一道防线;然而,对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌的出现,临床上抗感染治疗面临极大困难,引起了医学界普遍的关注。笔者对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌的发展、耐药状况、作用机制和相关治疗等方面的研究进展进行了综述。     

Presence of laminin receptors in Staphylococcus aureus

A characteristic feature of infection by Staphylococcus aureus is bloodstream invasion and widespread metastatic abscess formation. The ability to extravasate, which entails crossing the vascular basement membrane, appears to be critical for the organism's pathogenicity. Extravasation by normal and neoplastic mammalian cells has been correlated with the presence of specific cell surface receptors for the basement membrane glycoprotein laminin. Similar laminin receptors were found in Staphylococcus aureus but not in Staphylococcus epidermidis, a noninvasive pathogen. There were about 100 binding sites per cell, with an apparent binding affinity of 2.9 nanomolar. The molecular weight of the receptor was 50,000 and pI was 4.2. Eukaryotic laminin receptors were visualized by means of the binding of S. aureus in the presence of laminin. Prokaryotic and eukaryotic invasive cells might utilize similar, if not identical, mechanisms for invasion.     

紫菜中金黄色葡萄球菌的检测

笔者在对紫菜中致病菌污染现状分析的基础上,对金黄色葡萄球菌的检测方法进行了比较,结果表明快速检测因其方便省时可靠性高而值得推广应用。     

大蒜素对金黄色葡萄球菌抑菌作用的研究

[目的]研究不同种类,不同处理方法蒜液抑菌效果及大蒜素最低抑菌浓度和对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响,为进一步利用大蒜素资源提供理论依据。[方法]用大蒜提取蒜液为材料,定硫法测定其中蒜素含量,研究大蒜素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。[结果]大蒜液中含有的大蒜素对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,经过机械破碎或挤压得到的蒜液抑菌效果比蒸煮后蒜液好,紫蒜抑菌效果优于白蒜,蒜素的最低抑菌浓度为32 mg/ml。细菌生长曲线表明,对数生长期的金黄色葡萄球菌对大蒜素敏感,而稳定期的菌体抑制作用较弱。[结论]大蒜素在体外对金黄色葡萄球菌有很好的抑菌作用。     

金黄色葡萄球菌蛋白A基因的克隆

[目的]获得SPA蛋白的IgG结合结构域的基因克隆。[方法]采用优化的CTAB法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,通过PCR扩增获得SPA基因。[结果]金黄色葡萄球菌基因组DNA的纯度较高,完整性好,扩增获得了SPA基因。[结论]改进的CTAB法适用于金黄色葡萄球菌DNA的提取．且成功地获得了SPA基因。为进一步构建SPA非融合表达奠定了基础。     

葡萄球菌铁表面决定簇IsdB的研究进展

金黄色葡萄球菌是一种具有重要生物学意义的细菌,可以引起人和动物的多种疾病。根据目前对葡萄球菌铁表面决定簇系统的研究进展,从IsdB的结构、功能以及应用等方面进行综述。     

牛肉中金黄色葡萄球菌的复核鉴定研究

[目的]采用2种方法复核检出牛肉中金黄色葡萄球菌阳性结果,确保检测结果的准确性。[方法]按照GB 4789.10—2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》方法前增菌、选择性分离培养、革兰氏染色和血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌,应用SN/T1870—2007《食品中致病菌检测方法实时PCR法》对疑似阳性结果进行了进一步验证和复核。[结果]经过2种方法验证可疑菌落,该批牛肉中检出金黄色葡萄球菌。[结论]分离并鉴定牛肉中金黄色葡萄球菌可疑样品时,可采用不同方法进行验证和复核,该方法可提高检测结果的准确性,可用于畜禽肉中致病菌的检测。     

金黄色葡萄球菌荚膜多糖的提取及其多糖含量的测定

为提取纯化金黄色葡萄球菌荚膜多糖并测定多糖含量.采用超声波破碎菌液,用CTAB结合其中的多糖、CaCl2解离、乙醇沉淀等化学方法提取纯化金黄色葡萄球菌荚膜多糖,利用苯酚-硫酸法测定其含量.结果显示,得到荚膜多糖0.31 g,含量为65.06%.结果表明,成功提取金黄色葡萄球菌荚膜多糖,并对其含量进行了测定,初步确定了粗提金黄色葡萄球茵荚膜多糖的方法.     

食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测

建立一种快速聚合酶链反应(PCR)方法,用于食品中金黄色葡萄球菌的检测.针对金黄色葡萄球菌独有的SEA基因设计1对引物,在PCR体系中对相应片断进行扩增,最后通过电泳技术与阳性对照进行对比来判断阴阳性.结果表明,该方法检出率高,样品中模板DNA含量仅有0.05 pg即可检出金黄色葡萄球菌,24 h即可报告结果.因此,PCR方法是一种高效、敏感、特异性高的检测技术,可用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测.     

鸡源金黄色葡萄球菌耐药性分析

采用药敏纸片扩散法,测定48株鸡源金黄色葡萄球菌对常用的19种抗菌药物的耐药性,检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).结果表明:所有菌株除对万古霉素、头孢西丁和头孢唑啉100%敏感以外,对其他16种药物均产生不同程度的耐药性,其中耐药率较高的有四环素、强力霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星及克林霉素,耐药率最低的为头孢噻肟、阿米卡星、复方新诺明及利福平.100%的菌株呈多重耐药,分离菌株最少耐受4种药物,最多耐受12种药物,未检测出耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌.     

大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌的抑菌机制研究

 【目的】研究大豆异黄酮（Soybean isoflavone,SI）的抑菌机制。【方法】本试验利用呼吸代谢抑制实验和4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）荧光染色对大豆异黄酮的抑菌机制进行研究。【结果】呼吸代谢抑制实验结果表明,当SI的终浓度为0.8 mg?ml-1时,可显著抑制金黄色葡萄球菌苹果酸脱氢酶的活性,SI组苹果酸脱氢酶的比活性与对照组相比降低了74.97%。DAPI染色结果显示,DAPI可以和金黄色葡萄球菌内的核酸结合,经过SI作用28 h后,菌体内的核酸含量呈明显下降趋势,其中DNA的荧光强度减少了33.53%,RNA减少了39.82%。【结论】SI具有有较强的抑菌活性,其抑菌机制是通过抑制细菌的呼吸代谢和核酸的合成等方面实现的。     

电解水对金黄色葡萄球菌生物被膜的影响

为了阐明不同性质的电解水在控制金黄色葡萄球菌生物被膜中的作用,本研究分别使用酸性、碱性和中性电解水处理生物被膜,并测定处理前后生物被膜生物量、活性、活菌数和构造的变化。结果表明,酸性电解水能够有效杀死生物被膜中的菌体,但不能有效去除生物被膜;其有效氯含量与杀菌作用呈正相关。碱性电解水能够有效去除生物被膜,其pH值直接影响去除能力。中性电解水的作用与酸性电解水相似。不锈钢表面的生物被膜用碱性、酸性和中性电解水处理10min后,活菌数从7.5lgCFU/cm2分别减少至5.3,2.3和3.2lgCFU/cm2。电解水有潜力成为生物被膜杀菌剂和去除剂。     

金黄色葡萄球菌的群体效应研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中已知的群体效应系统是Agr系统和LuxS/AI-2系统,其在细菌浓度等于或大于1×10~7 CFU/mL时会被激活,通过调控相应基因,间接或直接调控生物被膜的产生和降解、细菌毒素的分泌以及细菌的生长。综述了金黄色葡萄球菌的群体效应研究进展,旨在为今后对金黄色葡萄球菌的研究寻找新方向,金黄色葡萄球菌致病性及生物被膜的形成与金黄色葡萄球菌的群体效应系统之间存在必然联系。     

金黄色葡萄球菌TraP蛋白单克隆抗体制备

研究通过骨髓瘤细胞SP2／O与经金黄色葡萄球菌（S．aureus）Trap蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,并进一步筛选种单克隆化,获得了11株稳定分泌抗TraP蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株,其中8株McAb（2A1、3A6、381、184、2C5、4C7、5C3和2D8）亚类为IgGl,3株McAb（2A7、3A1和1c4）亚类为IgM,轻链均为K链。8株IgGl型McAb的小鼠腹水的抗体效价均达到1：128000,交叉实验结果显示这8株McAb不与S．aureus的ClfA、ClfB、Cna、FnbPA和IsdB蛋白以及链球菌的GapC蛋白反应,具有良好的特异性,Western—blotting结果显示这8株McAb识别的都是TraP的线性表位。     

牛源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）;再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素和头孢唑林的敏感性高于90%,2株细菌的万古霉素MIC≥16 μg•mL-1;其中8株细菌的苯唑西林MIC≥8 μg•mL-1,而其它菌株的苯唑西林MIC≤2 μg•mL-1;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种及3种以上药物的菌株占84.21%,其中4株细菌能同时耐受9种不同抗菌药物;16（42.11%）株细菌被检测携带mecA耐药基因,而仅有其中7株的苯唑西林MIC≥4 μg•mL-1;头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐琼脂筛选法分别检出7株、10株和7株表型为MRSA的菌株。【结论】分离菌株的耐药性和多重耐药现象较为严重,被调查地区奶牛场中已经存在MRSA和OS-MRSA感染情况,且感染率高。     

傅立叶变换红外光谱技术对2种葡萄球菌的快速分类鉴定

[目的]建立金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌2种菌的傅立叶变换红外光谱数据库及FT-IT分类鉴定方法。[方法]应用FT-IR技术对2种葡萄球菌进行指纹图谱数据采集,应用化学计量学分析方法对光谱进行分析。[结果]建立2种葡萄球菌的标准FT-IR光谱数据库,用于FT-IR技术对2种可疑目标葡萄球菌进行鉴定;建立一种基于主成分分析的聚类分析模型,可成功地区分2种葡萄球菌。[结论]傅立叶变换红外光谱分析方法简便、快速、易操作,结果重现性好,是一种区分金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的有效方法。     

Passage of heme-iron across the envelope of Staphylococcus aureus

The cell wall envelope of Gram-positive pathogens functions as a scaffold for the attachment of virulence factors and as a sieve that prevents diffusion of molecules. Here the isd genes (iron-regulated surface determinant) of Staphylococcus aureus were found to encode factors responsible for hemoglobin binding and passage of heme-iron to the cytoplasm, where it acts as an essential nutrient. Heme-iron passage required two sortases that tether Isd proteins to unique locations within the cell wall. Thus, Isd appears to act as an import apparatus that uses cell wall-anchored proteins to relay heme-iron across the bacterial envelope.