CotA漆酶催化靛蓝胭脂红脱色条件优化

采用Plackett-Burman试验设计法及响应面分析优化了重组细菌漆酶Cot A催化靛蓝胭脂红脱色的条件。经过Plackett-Burman试验筛选出影响脱色条件的主要因素为p H、温度和染料质量浓度。利用Box-Behnken中心组合试验设计及响应面分析,通过三元二次数学模型进行回归拟合,预测了靛蓝胭脂红染料最佳脱色条件为:p H=8.6,温度60℃,染料质量浓度41.5 mg·L~(-1),染料在最优方案条件下45 min内的脱色率实际检测值为91.40%,与预测值的误差仅为0.86%。以上结果显示,Cot A漆酶在靛蓝胭脂红脱色领域具有较好的应用前景。对脱色产物进行液相质谱分析,检测到m/z=216.07[M-Na]~-的脱色产物,推测该降解产物为4-氨基-3-羧基苯磺酸钠,证明Cot A漆酶催化靛蓝胭脂红降解。     

用溴麝香草酚蓝鉴别芦笋雌雄性

以芦笋试管苗、袋育苗和成年植株3个不同生长阶段的茎叶为材料,应用溴麝香草酚蓝(BTB)法对芦笋的雌雄性别进行了鉴别,试验结果表明:雌、雄株提取液加入BTB液后雌株转色快于雄株,反应6~8 h时在620 nm处雌、雄株吸光值出现差异,是鉴别芦笋雌、雄性别的最佳时期;不同生长阶段的材料转色速度不同,试管苗雌株混合液在反应6 h时转为黄色,雄株混合液呈黄绿色;袋育苗、成年植株雌株混合液在反应8 h时转为黄色,雄株混合液仍为黄绿色。     

固定化漆酶对刚果红染料脱色降解的研究

[目的]探讨固定化漆酶脱色降解刚果红染料的最佳反应条件。[方法]以海藻酸钠为载体、戊二醛为交联剂,进行漆酶的固定化,并研究了固定化漆酶用量、染料浓度、反应温度和pH对染料脱色率的影响。[结果]固定化漆酶脱色降解刚果红染料的最佳条件为酶用量1 g,染料浓度40 mg/L,反应温度65℃,pH=4.5。在该条件下降解3 h,固定化漆酶对刚果红染料的脱色率达92.6%,重复利用5次后,脱色率仍能保持在50%左右。[结论]该研究为染料废水的有效处理提供了理论依据。     

灵芝漆酶催化活性艳色蓝X-BR脱色条件的研究

[目的]研究灵芝（Ganoderma lucidum）固体发酵所得漆酶粗酶液对蒽醌染料进行脱色的条件.[方法]分别研究不同的pH、染料浓度、温度、酶用量、反应时间等条件对活性艳色蓝X-BR染料脱色的影响.[结果]脱色的适宜条件为：在pH 3.5、40℃、60 U/ml灵芝漆酶、200 mg/L染料浓度的条件下反应5h,活性艳色蓝X-BR染料脱色率可达49％.[结论]灵芝固体发酵的漆酶粗酶液在一定条件下对蒽醌染料活性艳色蓝X-BR具有较好的脱色效果.     

LACCLR2细菌漆酶性质及其脱色作用的研究

该试验以LACCLR2细菌漆酶为研究对象,对漆酶的酶学性质以及漆酶对染料的降解脱色效果进行了研究,结果表明:漆酶反应的最适温度是50℃,最适p H为6,铜离子浓度为0.01%时酶活力最高。针对染料的脱色实验,靛蓝最显著,褪色率达到77.4%,COD/BOD提高了43.5%。     

Bacillus细菌的分离及其芽孢漆酶对染料脱色的影响

利用含铜离子的富集培养基,从东北林业大学实验林场蒙古栎林下的土壤中筛选出具有较高漆酶活性的1株细菌,采用形态学、生理生化反应以及16S r DNA序列同源性分析等方法,鉴定其为芽孢杆菌属细菌,命名为Bacillus sp.5`MS。以丁香醛连氮为底物,以芽孢干重计算,其芽孢漆酶的活性高达56.73 U/g。菌株5`MS芽孢漆酶的最适pH值为6.6,最适反应温度为70℃。在100℃条件下,该芽孢漆酶反应活性仍可达最适条件下的34.61%。当染料脱色体系中添加介体乙酰丁香酮时,菌株5`MS芽孢漆酶1 h内对活性黑、靛红及结晶紫的脱色率均达92%以上,4 h内对活性蓝的脱色率达82.8%。     

高产漆酶菌株Bacillus sp.CLb的筛选及其对染料脱色效果的研究

[目的]为了筛选出一株高产漆酶的菌株。[方法]利用含铜的富集培养基从土壤中筛选出漆酶活性较高的菌株,结合形态学、生理生化特性及16S rDNA序列分析对菌株的分类地位进行鉴定,研究菌株的生长特性及菌株的芽孢漆酶对常用染料的脱色效果。[结果]该菌株属于芽孢杆菌属,命名为Bacillus sp.CLb。菌株CLb最适生长温度为37℃,最适生长pH为7.0,菌株能在含1 mmol/L Cu2+的培养基中生长,具有很强的耐铜性。以丁香醛连氮为底物,测定其芽孢漆酶活性,漆酶活性高达46.1 U/g干重。菌株CLb芽孢漆酶的最适pH为7.0。在介体乙酰丁香酮存在的脱色体系中,菌株CLb芽孢漆酶在4 h内对活性黑以及在2 h内对靛红的脱色率均达到93.0%,在6 h内对活性亮蓝和结晶紫脱色率分别为79.0%和92.5%。[结论]菌株CLb芽孢漆酶在介体乙酰丁香酮存在的体系中对常用染料具有很高的脱色率。     

双孢菇漆酶对弱酸艳蓝-RAWL的脱色和降解

采用双孢菇粗漆酶对弱酸艳蓝-RAWL进行脱色,探索了双孢菇粗漆酶的酶活力、反应时间、染料浓度、温度、pH值对其脱色效果的影响。结果表明,双孢菇粗漆酶降解弱酸艳蓝-RAWL的适宜条件为:粗漆酶酶活力62.68U/mL,染料浓度100mg/L,温度20℃,pH值5.0条件下脱色60min,脱色率可达79.5%。双孢菇粗漆酶在低温下可以降解一定浓度的弱酸艳蓝-RAWL染料,具一定的应用价值。     

具有漆酶活性细菌的鉴定及芽孢漆酶对染料脱色的研究

[目的]为了研究具有漆酶活性的新菌株的生长特性及其芽孢漆酶对各种染料的脱色效果。[方法]利用经典的形态学、生理生化反应特性和现代分子生物学的方法,对具有漆酶活性的菌株进行鉴定,研究温度、p H、Na Cl和Cu2+对菌株生长的影响,并且研究菌株的芽孢漆酶对常用染料的脱色效果。[结果]该菌株为芽孢杆菌属的细菌,被命名为Bacillus sp.10`ZS。菌株10`ZS的最适生长p H为6.0,最适生长温度为35℃,能耐受浓度6%Na Cl和0.6 mmol/L Cu2+。菌株10`ZS的芽孢漆酶对结晶紫和活性亮蓝的脱色率分别为87.9%和78.5%。[结论]菌株10`ZS具有耐盐和耐铜的特性,能在碱性条件下生长,其芽孢漆酶对三苯甲烷类和蒽醌类染料的脱色率较高。     

交联聚乙二醇二丙烯酸酯固定化漆酶的性质

为探究交联聚乙二醇二丙烯酸酯为载体的固定化漆酶的优势,采用单因素分析法,在不同条件下对固定化漆酶和游离漆酶的酶学性质进行了研究。结果表明:与游离漆酶相比,固定化漆酶与底物2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的亲和力下降,但稳定性明显提高,最适p H值也发生了变化。固定化漆酶的最适温度为60℃,比游离漆酶升高了5℃;固定化操作p H为3.5时,固定化漆酶的酶活力最高。固定化漆酶对2,4-二氯苯酚降解时间为24 h时,降解率达到了85%,酶活力保持80%以上,漆酶的使用效率和稳定性明显提高。     

纤维素酶—木聚糖酶—漆酶的共固定化

多酶共固定化能发挥多酶的协同作用,实现底物到产物的一步转化。文章以纤维素酶、木聚糖酶和漆酶分别固定化工艺研究为基础,选择pH敏感型可逆可溶性聚合物Eudragit L-100为载体,应用物理吸附法制备固定化纤维素酶、木聚糖酶和漆酶。采用物理吸附和共价交联相结合的方法进行酶的固定化研究发现,当pH为4.8、反应温度为60℃、反应时间为40 min、载体浓度为1.6%和EDC浓度为0.1%时,纤维素酶、木聚糖酶和漆酶的固定化率分别为50.86%、36.90%及25.93%。     

几种木腐菌漆酶活性的研究

对18种木腐菌胞外漆酶活性的测定结果表明,腐木生侧耳的漆酶活力最高,为605.0 u*mL-1,其次是多毛拴菌和云芝,其漆酶活力分别为440.0 u*mL-1和400.0 u*mL-1,其余菌株活性低于336.7 u*mL-1.腐木生侧耳漆酶作用的最适pH值为4.6,Cu2+ 、Mg2+、Na+、Co2+对漆酶活力有激活作用,Ag+、K+、Ca2+、Hg2+、Fe2+ 、Cl- 和Zn2+对其漆酶活力有明显抑制作用.     

白腐真菌发酵罐液态发酵产漆酶条件的优化

通过在发酵罐中液体发酵产漆酶,在发酵罐中筛选黄孢原毛平革菌液体发酵产漆酶的最佳条件.试验选取已优化的白腐真菌液态发酵培养基进行培养,在发酵罐中进行单因素和多因素正交试验,对其在发酵罐中发酵产酶条件进行优化.选取的白腐真菌黄孢子原毛平革菌的最佳发酵生产条件为:温度28℃、转速300r/min、通气量5L/min(通气比1.0vvm)、pH值5、接种量为15%.在此条件下最高产酶水平可达14.86U/mL.     

纳米磁性载体在固定化漆酶技术中的应用

漆酶是一种具有高效催化效用的氧化酶。它的催化产物为水,完全不对环境产生任何污染,因而其利用受到各方研究人员越来越多的关注。近年来,随着新型材料、环境保护等相关领域的高速发展,大量高质量、高性能的材料在固定化漆酶方向得以应用。纳米磁性复合载体就是其中一种。它在回收循环利用、提高利用效率以及扩大漆酶可使用条件方面的效果明显。     

辣椒疫霉漆酶基因Pclac3克隆表达

辣椒疫霉是一种侵染性植物病原,能引起多种茄科及葫芦科植物的病害。利用同源克隆法从辣椒疫霉基因组内克隆了漆酶基因Pclac3,该基因全长1 881个核苷酸,编码626个氨基酸,与已知的真菌漆酶基因具有较高的同源性,并且具备漆酶基因的保守区域。利用PCR将该基因克隆于pPIC9K载体,并转化于毕赤酵母GS115,经过1%甲醇诱导表达获得其异源表达产物。将表达产物进行SDS-PAGE检测,获得分子量大约为90 kDa的特异蛋白。利用ABTS法对Pclac3的表达产物粗酶液进行酶活性分析发现,其活性在第11天时最大,达到45 U/mL。这为研究辣椒疫霉漆酶基因家族及探索卵菌漆酶生物活性及其潜在的应用提供了理论依据。     

巴尔喀什蘑菇子实体漆酶纯化与理化特性及对酚类化合物的降解能力

【目的】研究巴尔喀什蘑菇子实体的生物学特性、漆酶理化性质及对酚类化合物的降解能力,为野生巴尔喀什蘑菇的栽培驯化以及栽培料高效利用提供理论依据。【方法】利用纤维素CM-cellulose阳离子交换和Q-Sepharose阴离子交换以及Superdex 75凝胶层析过滤纯化技术,纯化分析该漆酶的降解代谢底物与抗金属离子抑制能力,确定该漆酶活性最适温度与pH值。【结果】获得本漆酶为65 kDa的单亚基蛋白,总纯化倍数为354.58,比活力17.02 U/mg,该酶N端10个氨基酸的序列为SGGPEQNTTA,经过NBCI-BLAST后发现该漆酶与糙皮侧耳、杂色云芝等的漆酶具有同源性。本漆酶底物差异性较大,从强到弱主要为ABTS>二甲氧基酚>甲苯胺。最适pH值为2.2,属中低温活性;最适反应温度为40℃,为中低温活性漆酶。Cu²⁺对该漆酶催化ABTS有轻微促进作用,Hg²⁺对其催化ABTS有很强的抑制作用。【结论】巴尔喀什蘑菇子实体漆酶为65 kDa的单亚基蛋白,是一种中低温活性耐酸性漆酶,底物特异性为ABTS>二甲氧基酚>甲...