大鼠肌肉卫星细胞的分离、鉴定与诱导分化

肌肉卫星细胞是组织特异性干细胞,负责着骨骼肌的生长和再生.尽管发现卫星细胞的存在已经有50多年的历史了,但分离鉴定肌肉卫星细胞的方法仍然不稳定.本研究使用两步酶消化和差速贴壁相结合的方法分离大鼠(Rattus norve gicus)肌肉卫星细胞.免疫细胞化学染色显示,分离的大鼠肌肉卫星细胞高表达Desmin;通过RT-PCR鉴定所分离的细胞表达肌源性干细胞因子Myf5及Myod1;成肌诱导48h后,卫星细胞开始形成多核的肌管;成脂诱导1周后,细胞内开始出现脂滴,2周后充脂细胞明显增多.研究结果提示,分离的卫星细胞具有肌源性,有发育形成肌管和向成脂细胞分化的能力.     

一个水稻根时空差异表达启动子的克隆及功能分析

本研究旨在分离克隆水稻根特异表达的启动子,为育种提供资源.本实验结合本室芯片数据库和RT-PCR验证得到一个水稻根特异表达的基因(TIGR Locus:Loc_Os05g19570),采用PCR技术从MH63的基因组DNA中扩增其上游启动子P12,长度为1950 bp,将该启动子片段与报告基因gus相连,构建植物表达载体,农杆菌(Agrobaterium tumefaciens)介导转化水稻(Oryzative ssp.japonica)中花11.组织化学分析及荧光定量测定显示该启动子具有根特异性及时间差异性.根据P12启动子序列特征,利用PCR对其进行有目的的缺失,将5个长度不同的缺失片段分别与gus相连,构建植物表达载体,转化水稻中花11.荧光定量测定结果表明:-1059～-819bp区域缺失后,报告基因在根里的表达量显著降低,说明这个区域可能存在顺式元件.本研究成功的分离克隆到一个水稻根特异的启动子P12,进一步分析发现其还具有时间差异性.     

梨果黑斑病菌磷酸二酯酶PDE基因克隆及其在侵染结构分化中的表达分析

磷酸二酯酶(PDE)能够特异地催化cAMP/cGMP 3', 5'环磷酸的3'环磷酸键水解,调节胞内cAMP水平,进而调控致病真菌的生长发育,但PDE基因在梨果黑斑病菌中的具体调控机制有待研究。本研究采用反转录PCR(RT-PCR)克隆了梨果黑斑病菌Alternaria alternata中的PDEL和PDEH基因;通过TMHMM、ProtScale、SOPMA等在线分析工具对AaPDEL和AaPDEH基因及其编码蛋白进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析了PDEL和PDEH基因在梨果黑斑病菌侵染结构分化过程中的表达特性。克隆得到梨果黑斑病菌PDEL和PDEH,分别命名为AaPDEL和AaPDEH,蛋白编码区(CDS)长度分别为3 132和2 886 bp,分别编码1 043和961个氨基酸。生物信息学分析表明AaPDEL和AaPDEH均属于不稳定亲水蛋白,不含信号肽也无跨膜结构,均具有多个磷酸化位点,分别定位于线粒体和细胞核上;AaPDEL和AaPDEH分别具有Class Ⅱ型和Ⅰ型保守催化结构域。系统分析结果表明,AaPDEL和AaPDEH与小麦褐斑病菌(Pyrenophora tritici-repentis)和番茄匍柄霉(Stemphylium lycopersici)亲缘关系最近,同源性分别高达79.25%和88.80%。qRT-PCR结果显示,疏水性诱导,A. alternata侵染结构分化过程中,AaPDEL和AaPDEH基因在附着胞形成阶段(6 h)表达量显著提高,较萌发初期阶段(2 h)分别上调1.19和1.97倍,表明AaPDEL和AaPDEH在A. alternata侵染结构分化中具有重要的调控作用。本研究为进一步从分子水平揭示PDE调控机制奠定了基础。     

过量表达CHIP蛋白抑制小鼠前成骨细胞分化和矿化

摘要 以MC3T3-E1细胞系为实验材料，体外转染pEFNeu-HA-CHIP质粒，Western blot检测CHIP蛋白表达，建成了稳定过表达CHIP 蛋白的MC3T3-E1/HA-CHIP细胞系。然后用含10mM/ml甘油磷酸钠和50ug/ml抗坏血酸的α-MEM条件培养基诱导MC3T3-E1和MC3T3-E1/HA-CHIP细胞系向成骨细胞定向分化，结果表明诱导期MC3T3-E1/HA-CHIP细胞系中的ALP活性比MC3T3-E1细胞中的ALP活性低，ALP染色实验同时证实了这个结果；诱导培养18天以后，Von Kossa染色和茜素红染色结果表明MC3T3-E1/HA-CHIP细胞系中生成的磷酸钙比MC3T3-E1细胞系中生成的磷酸钙少。以上结果表明过表达CHIP蛋白抑制MC3T3-E1细胞的分化和矿化。     

小鼠生殖细胞特异基因Oct4启动子片段克隆及报告载体构建

本研究通过PCR方法从小鼠(Mus musculus)基因组中扩增出Oct4启动子的CR4区和CR1区,将其克隆到真核报告载体pEGFP-1,构建了携带Dct4启动子片段的小鼠生殖细胞特异性报告载体CR1,4-pEGFP-1.用该载体转染多种细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(EGFP)在细胞中的表达情况,同时以半定量RT-PCR检测转染细胞中Oct4及其它生殖细胞特异性基因的转录情况.结果显示,GFP在小鼠胚胎干细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和C2C12细胞中均不表达,而在P19细胞和睾丸细胞中表达.RT-PCR结果显示,Oct4在P19、睾丸细胞和生殖干细胞中特异性转录.这表明所构建的绿色荧光蛋白报告载体只在生殖细胞和多能生殖干细胞中内表达,该质粒可作为示踪生殖细胞的工具,同时也可以作为生殖干细胞多能性状态的一个监测标记.     

畜产公害与环境保护

随着畜牧业向规模化、集约化的现代化方向发展,带来了畜产公害对环境的污染和对人类的危害。该文分析了畜产公害对环境和人类的负面效应，并从环境保护的角度出发，从国家立法、饲料营养调控、饲养管理等方面提出了防止和控制影响环境的畜产公害的途径和措施。     

动物毛发的形态结构及其功能特性研究

对人发及其他14种动物毛发的扫描电镜(SEM)照片进行分析,根据它们形态结构特征将其分为指状结构、芽状结构、鳞状结构和波状结构4类,并就每种毛发结构的保温性、疏水性及其柔性进行了比较分析。分析结果表明,具有指状细观结构形态的毛发在保温性、疏水性及柔韧性方面具有明显优势,这一信息对研究开发新型功能材料具有借鉴作用     

Agent-Based Inference for Animal Movement and Selection

Contemporary ecologists often find themselves with an overwhelming amount of data to analyze. For example, it is now possible to collect nearly continuous spatiotemporal data on animal locations via global positioning systems and other satellite telemetry technology. In addition, there is a wealth of readily available environmental data via geographic information systems and remote sensing. We present a modeling framework that utilizes these forms of data and builds on previous research pertaining to the quantitative analysis of animal movement. This approach provides additional insight into the environmental drivers of residence and movement as well as resource selection while accommodating path uncertainty. The methods are demonstrated in an application involving mule deer movement in the La Sal Range, Utah, USA. Supplemental materials for this article are available online.