TRPV6基因沉默对蛋鸡十二指肠和空肠钙离子跨细胞转运相关蛋白表达的影响

本试验旨在研究瞬时性受体电位通道香草酸受体6(transient receptor potential vanilloid receptor 6,TRPV6)基因沉默对蛋鸡十二指肠和空肠跨细胞钙离子转运相关蛋白表达、血浆钙磷浓度、PTH水平及骨密度的影响。将64只220日龄高产蛋鸡随机分为对照组和TRPV6基因沉默组,分别一次性注射生理盐水和pSIRENTRPV6-3质粒,连续观察28d。结果表明,与对照组相比,pSIREN-TRPV6-3质粒注射第7、14和21天,十二指肠和空肠中均检测到ZsGreen蛋白表达;TRPV6、CaBP-D28K mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.05或P0.01);血浆PTH浓度显著升高(P0.05或P0.01);此外,血浆钙、磷浓度不受影响,股骨和胫骨骨密度有降低趋势,但与对照组相比差异不显著(P0.05)。由此可见,siRNA TRPV6质粒抑制十二指肠和空肠TRPV6和CaBP-D28K的表达,但不影响血液中钙离子浓度和骨密度水平,表明在正常日粮钙水平条件,沉默TRPV6通道蛋白不影响蛋鸡体内正常的钙转运。     

蛋壳腺钙离子转运机制及蛋壳钙化过程研究进展

鸡蛋形成过程中75%以上的时间停留于蛋壳腺。为满足蛋壳钙化需求，血液中的钙离子主要通过瞬时感受器电位通道（TRP）进入蛋壳腺黏膜上皮细胞，通过钙结合蛋白（CBP）以及内质网实现钙离子的储存、运输和浓度调控，并通过质膜钙泵（PMCA）和钠钙交换体（NCX）分泌至子宫腔，为蛋壳乳突层、栅栏层与垂直晶体层的高效有序沉积提供原料。本文系统综述了蛋壳腺钙离子转运及蛋壳钙化过程中涉及的关键信号网络，并简述其影响因素，为蛋壳质量调控技术研究提供参考。     

钙离子跨膜吸收相关基因在内蒙古白绒山羊胃肠道中的差异表达

本试验旨在研究钙离子(Ca~(2+))跨膜吸收途径中的相关基因在内蒙古白绒山羊胃肠道中的表达差异分析。选用9只4月龄内蒙古白绒山羊断奶羔羊,屠宰后取瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠组织样品用于RNA提取,利用实时荧光定量PCR检测维生素D依赖性钙结合蛋白(CaBP-D9k)、瞬时性受体电位通道香草酸受体6(TRPV6)和维生素D受体(VDR)的mRNA表达量。结果表明:CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA均在十二指肠中表达量最高,CaBP-D9k和TRPV6 mRNA与VDR mRNA分别在大肠内、胃内处于较低的表达水平;CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA表达量随着小肠的延伸而逐渐降低。综合来看,CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA表达量与胃肠道Ca~(2+)跨膜吸收能力存在关联性。     

过表达TRPV6基因对小鼠破骨细胞钙转运基因与凋亡相关基因表达的影响

破骨细胞是体内唯一的骨吸收细胞,对钙离子跨细胞膜转运及维持正常血钙水平有非常重要的作用。瞬时性受体电位通道香草酸受体6(transient receptor potential vanilloid receptor 6,TRPV6)是TRP家族中的一员,对钙离子有高度选择性,且是钙离子跨细胞转运的限速门控通道。本试验旨在研究TRPV6过表达对破骨细胞钙转运相关基因及细胞凋亡相关基因表达的影响。用TRPV6过表达慢病毒载体(LV-TRPV6)转染培养7 d的破骨细胞构建TRPV6过表达破骨细胞模型,以阐释小鼠破骨细胞中TRPV6与钙离子转运和细胞凋亡的关系。将破骨细胞分为3组:空白对照组、阴性对照组和LV-TRPV6组。结果显示:与空白对照组比较,破骨细胞TRPV6过表达后钙离子转运相关基因(calbindin-D28K,NCX1) mRNA和蛋白表达水平显著增加(P0.05);破骨细胞TRPV6过表达后细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达水平显著降低(Fas和Fas L除外)(P0.05)。流式细胞仪分析显示,LV-TRPV6组凋亡率显著下降6.33%±0.235%(P0.05)。研究表明,破骨细胞过表达TRPV6基因导致钙转运相关基因表达增加并抑制破骨细胞凋亡。     

昆明小鼠胃肠道钙离子跨膜吸收途径相关基因表达模式分析

本研究旨在分析钙离子(Ca2+)跨膜吸收途径相关基因在昆明小鼠胃肠道中的表达模式。选取12只8周龄、平均体重(30.71±2.93)g的雌性昆明小鼠,取胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠组织样品,利用实时定量PCR法检测维生素D依赖性钙结合蛋白(CaBP-D9k)、瞬时性受体电位通道香草酸受体6(TRPV6)和维生素D受体(VDR)mRNA表达量。结果表明:1)CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA在胃内属低水平表达,而在盲肠内表达量较高;2)随着小肠的延伸,CaBP-D9k、VDR mRNA表达量逐渐降低,而TRPV6 mRNA则在回肠内高水平表达;3)CaBP-D9k(P<0.05)、VDR(P<0.05)、TRPV6 mRNA的表达量(P>0.05)随着大肠肠段的延伸而不同程度地下降。结果提示,CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA表达量与胃肠道Ca2+跨膜吸收能力存在关联性。     

孕酮处理对蛋鸡蛋壳钙化过程中CaBP-d28k基因表达的影响

实验旨在研究孕酮对蛋鸡CaBP-d28k基因表达的影响。对产蛋高峰期蛋鸡进行孕酮和孕酮受体拮抗剂(RU-486)处理,利用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR),测定在蛋壳形成过程中输卵管子宫部钙结合蛋白(CaBP-d28k)、孕酮受体(PGR)的表达量;同时对血液中钙离子和孕酮浓度变化进行测定。结果表明:孕酮处理后,血液中钙离子浓度显著降低(P<0.05),输卵管子宫部CaBP-d28k表达量也显著降低(P<0.05);孕酮受体拮抗剂处理后,血液中钙离子浓度显著升高(P<0.05),输卵管子宫部CaBP-d28k表达量极显著升高(P<0.01)。结果提示,在蛋壳钙化过程中,孕酮对CaBP-d28k表达和钙离子转运起负调控作用。     

山楂叶黄酮对产蛋后期种鸡蛋壳品质的影响

山楂叶黄酮（HF）是山楂叶提取物,具有抗氧化、抗炎和降血脂的作用。本试验旨在研究日粮HF对产蛋后期种母鸡蛋壳品质的影响。选取体重相近的60周龄健康种母鸡（栖岭草鸡）270只,随机分为3组,每组6个重复,每个重复15只鸡。对照组（CON）饲喂玉米-豆粕型基础日粮（BD）,低剂量组（LHF）饲喂BD+30 mg·kg^-1 HF日粮,高剂量组（HHF）饲喂BD+60 mg·kg^-1 HF日粮。试验预饲2周,正式饲喂8周,最后,采集种蛋测定蛋壳品质,采集血样测定钙和磷含量,采集壳腺组织观察组织形态学、细胞凋亡和抗氧化蛋白的变化。结果显示：1）与CON组相比,HF处理显著提高了蛋壳厚度和蛋壳强度（P<0.05）,对蛋黄颜色、蛋白高度、哈氏单位和壳腺的器官指数没有显著影响（P>0.05）。2）与CON组相比,HF处理显著提高了血清钙的含量（P<0.05）,显著上调了壳腺部CaBP-D28K、OPN和OC-116基因mRNA的表达水平（P<0.05）,HHF组壳腺部Ca²⁺ATP酶的活性显著提高（P<0.05）。3）组织学切片分析表明,HF处理显著降低了壳腺细胞的凋亡率（P<0.05）,并显著提高了壳腺部绒毛的长度和腺体的密度（P<0.05）。4）与CON组相比,HF处理组壳腺部MDA的含量显著降低（P<0.05）,HHF处理显著提高了GSH-Px酶的活性（P<0.05）。5）HHF组壳腺部KEAP1、p-NFκB/NFκB和Bax/Bcl2蛋白表达水平较CON组显著降低（P<0.05）;Nrf2、HO-1和PCNA蛋白的表达量则显著提高（P<0.05）。综上,日粮中添加60 mg·kg^-1的HF通过激活Nrf2/HO-1信号通路增强壳腺的抗氧化能力,改善细胞凋亡进程和钙离子转运能力,从而提高产蛋后期种鸡的蛋壳品质。     

鲎素抗菌肽对蛋鸡产蛋后期蛋品质及蛋壳超微结构的影响

旨在探索鲎素抗菌肽对海兰褐蛋鸡产蛋后期蛋品质及子宫CaBP-D28k mRNA表达量的影响及其机理探讨。随机选取600只385日龄海兰褐蛋鸡,分为对照组、试验组,每组各3个重复,每个重复100只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加鲎素抗菌肽,鲎素抗菌肽发酵液最适添加剂量为0.01 L/kg,按饲料所需量配比添加,预饲期7 d,试验期35 d。结果显示,与对照组相比,试验组产蛋率提高8.86%(P0.05),料蛋比、破蛋率分别降低2.68%和12.76%(P0.05);试验组蛋壳强度比对照组提高了18.97%(P0.05),哈氏单位、蛋壳相对质量和蛋壳厚度均有上升的趋势;试验组蛋壳表面皴裂纹数较少,裂隙变小,纵切面结构中垂直晶体层完整,栅栏层结构整齐,上下层面平滑,栅栏层气孔数量少,乳头层乳头数目少且宽;试验组蛋鸡子宫内CaBP-D28k mRNA表达水平显著提升(P0.01)。可见,鲎素抗菌肽可提高CaBP-D28k参与产蛋过程中钙的代谢过程,调控蛋鸡体内钙代谢发挥功能作用。     

实时定量PCR检测蛋壳形成时骨桥蛋白表达变化的研究

骨桥蛋白（osteopontin,OPN）是一种具有多种功能分泌型钙结合磷酸化糖蛋白。为了从基因表达的角度来解析蛋鸡蛋壳形成的分子机理,本研究以产蛋鸡为试验动物,采用实时定量PCR技术对与蛋壳形成有关的骨桥蛋白基因在子宫中不同时间段（蛋进入子宫前2 h、进入子宫前1 h、进入子宫后5 h、进入子宫后15 h、产蛋后1 h、产蛋后2 h）的表达丰度进行了研究。结果表明,在蛋进入子宫前2 h、蛋进入子宫前1 h、蛋进入子宫后5 h OPN的表达量逐渐升高,之后在蛋进入子宫后15 h、产蛋后1 h、产蛋后2 h又逐渐下降,这一规律性的变化与蛋壳的钙化密切相关。     

蛋鸡TRPV6基因的原核表达、纯化及抗体制备

为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据其基因序列,设计1对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1 801～2 176nt的375bp序列,构建原核表达质粒pET-32a（＋）-TRPV6;将重组质粒转化BL21（DE3）,经IPTG诱导表达TRPV6融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡TRPV6多克隆抗体,分别通过酶联免疫吸附试验（ELISA）法和Western blot检测抗体的效价和抗体特异性。结果表明,试验成功构建原核表达载体pET-32a（＋）-TRPV6,SDS-PAGE蛋白电泳检测发现目的蛋白大小约35 000;Western blot分析显示,表达的TRPV6融合蛋白具有良好的免疫原性,其抗体可与大肠杆菌表达的产物特异性结合;ELISA显示其抗体效价达1∶100 000。获得纯化的融合蛋白和多克隆抗体对研究TRPV6钙离子通道在蛋鸡髓质骨形成的作用机理具有重要作用。     

SLCO1C1和SLCO4C1基因与绿壳蛋鸡不同产蛋期壳色相关性研究

为探究SLCO家族基因与绿壳蛋壳色的关系,试验以产绿壳蛋母鸡为试验样本,分别收集产蛋前期(150日龄)和产蛋后期(500日龄)的鸡蛋、心脏、肝脏、脾脏、肌肉、卵巢、壳腺组织和血样样品,采用色差仪测定壳色数值;ELISA方法检测血清中血红素加氧酶1(HO-1)的含量;利用荧光定量PCR测定HO-1和SLCO家族基因的表达。结果显示：产蛋前期蛋壳L^*值极显著低于产蛋后期(P<0.01),而b^*值极显著高于产蛋后期(P<0.01);产蛋前期血清中HO-1含量和壳腺中HO-1表达量极显著高于产蛋后期(P<0.01);SLCO1C1和SLCO4C1在壳腺中特异性表达,SLCO1A2在肝脏中特异性表达;产蛋前期SLCO1C1和SLCO4C1 mRNA表达量显著高于产蛋后期(P<0.05)。结果表明HO-1基因表达与酶活性下降造成绿壳蛋鸡壳色变浅,SLCO1C1和SLCO4C1可能是胆绿素合成和转运的重要基因。     

钙营养与蛋壳品质

蛋壳品质的好坏直接影响蛋的贮存、运输和销售，是决定蛋品质的重要指标之一。钙虽非营养性物质，但却起着十分重要的作用，其供给水平直接影响蛋壳品质。统计资料表明，商品化鸡场因蛋壳品质差而损失的蛋达6％一8％。因此，如何提高蛋壳品质已成为经营者十分关心的问题。一、钙的需要量蛋壳是产蛋母鸡排卵后约49～20小时在于官（蛋壳腺）中由钙沉积而形成的，主要由CaCO3（93％一98％）组成，它构成了蛋内容物的保护层。用以形成蛋壳的钙经消化道吸收入血液后，一部分直接进入蛋壳腺，另一部分贮存于骨髓腔，待需要时重新进入血液运送至…     

TRPV5与TRPV6在哺乳动物妊娠期钙代谢的适应性调节作用

在哺乳动物妊娠期,母体的钙代谢通过适应性调节满足胎儿对钙的需求,包括肠钙吸收的增强、肾钙排泄的减少。妊娠钙代谢适应性需要钙离子通路蛋白参与,TRPV5/TRPV6是实现钙代谢调节的重要蛋白。TRPV6高表达于小肠,主要介导肠钙转运,TRPV5与肾脏钙离子重吸收相关,此外TRPV6介导胎盘组织的母体一胎儿钙转运。     

常见异常鸡蛋的产生与控制

正卵黄从卵巢排卵24~26 h后,母鸡到产蛋箱中产蛋;如果排卵后4 h就产蛋,产下的鸡蛋为薄壳蛋,且母鸡不到产蛋箱中产蛋;如果母鸡的输卵管中没有鸡蛋,母鸡也会按时卧在产蛋箱里;如果母鸡排卵长达28h后才产蛋(产蛋延迟4~6h),蛋壳就会有多余的钙斑,尽管没有产蛋,母     

南海黄麻鸡不同产蛋阶段蛋品质研究

为进一步分析南海黄麻鸡父母代种鸡的种用特性,对南海黄麻鸡不同产蛋阶段(开产后6、11、20、25周)的蛋品质进行了研究,检验指标包括蛋重、蛋形指数、蛋壳品质(蛋比重、蛋壳厚度、蛋壳强度)、哈氏单位、蛋黄颜色、蛋黄蛋白比等。结果表明:蛋品质的各项指标与产蛋阶段密切相关,南海黄麻鸡的蛋重在产蛋初期(开产后6周)较轻,显著低于产蛋中后期(开产后11、20、25周)(P0.05),蛋重随着产蛋日龄的增大而增大;蛋的比重、蛋壳强度、蛋壳厚度三个指标都在开产后11周达到最大值;哈氏单位、蛋黄颜色在产蛋初期显著高于产蛋中后期,并都随着产蛋阶段的延长而下降。由此可见,南海黄麻鸡在不同产蛋阶段的蛋品质具有一定的规律性,产蛋高峰阶段的蛋品质达到最好水平,产蛋中后期的蛋品质有逐渐下降的趋势。     

泰和乌骨鸡原种代与祖代鸡蛋的品质分析

进行了泰和原种代鸡和祖代鸡蛋的品质测定与比较研究。结果表明，两者的蛋重，蛋白高度差异极显著（P＜0．01），蛋白质蛋黄比差异显著（P＜0．05），蛋形指数，蛋壳厚度差异不显著（P＞0．05）。祖代鸡比原种鸡产的蛋比重、哈夫单位分别高0．003g／cm3，0．31；但祖代鸡比原种鸡产的蛋蛋白高度低0．81mm。     

产蛋后期“14h+1h”光照程序对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

为探讨产蛋后期"14 h+1 h"光照程序对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响,将320只60周龄海兰褐蛋鸡随机分为2个处理,每个处理8个重复,每个重复20只鸡。对照组60~69周龄继续采用16 h光照程序;试验组60~61周龄采用16 h光照程序,62周龄采用"15 h+1 h"光照程序,63~69周龄采用"14 h+1 h"光照程序。结果显示:光照程序由16 h变为"14 h+1 h"后,蛋鸡体重显著下降(P0.05);日耗料、个蛋耗料和料蛋比在62~63周龄有显著提高(P0.05),其他试验阶段无显著差异(P0.05);平均蛋重在64~69周龄显著降低(P0.05);产蛋率无显著变化(P0.05);蛋壳重量、蛋壳厚度和蛋壳蛋重比在65和67周龄末显著降低(P0.05),其他蛋品质指标无显著变化(P0.05)。结果说明,产蛋后期蛋鸡光照程序由16 h调整为"14 h+1 h"后,蛋鸡的体重、蛋重、蛋壳厚度和蛋壳重降低;"14 h+1 h"光照程序不会降低蛋鸡的采食量,对产蛋率无影响。     

甜菜碱对蛋鸡蛋品质影响及机理研究

选20周龄伊莎蛋鸡800羽，随机分成2组（每组设4个重复，每个重复100羽），一组为对照组；另一组为600mg/kg甜菜碱组。分别在50、70周龄时测定蛋品质、血清有关生化指标、蛋壳腺磷脂组分含量。结果表明：添加甜菜碱使蛋鸡日平均产蛋率提高12．33％（P＜0．01）。料蛋比 降低9．92％（P＜0．05）。使50周龄和70周龄蛋壳厚度分别增加了2．5％（P＜0．08）的10．81％（P＜0．05），蛋壳相对重提高6．69（P＜0．05）和6．94％（P＜0．05）；蛋黄指数、哈夫单位有提高趋势。使70周龄蛋鸡蛋壳腺中卵磷脂（PC）含量提高了16．28％（P＜0．01），PC／PE比值提高了22．605（P＜0．03），对脑磷脂（PE)含量无影响。50周龄和70周龄蛋鸡血清中卵磷脂浓度分别提高33．46％（P＜0．01）和22．42％（P＜0．01）；而对血清中Ca、P含量无明显影响。50周龄和70周龄蛋鸡血清及肝中甜菜碱含量与对照组相比均无明显差异。     

高产蛋鸡品系产蛋中后期蛋品质性状遗传规律的研究

为选育改良国产高产蛋鸡产蛋中后期蛋品质,确定合理的饲养周期。本研究选取北京市华都峪口禽业有限责任公司13世代Y1、K1品系蛋鸡,测定56、66、72、80周龄蛋重、蛋壳颜色、蛋壳强度、蛋白高度和蛋黄颜色,采用DMU软件估计遗传参数。结果表明:随着蛋鸡周龄增大,Y1、K1系蛋重显著提高(P0.05),蛋壳强度、蛋白高度和蛋黄颜色极显著下降(P0.01);Y1系和K1系56~80周龄各性状遗传力在0.03~0.52;品系内同一性状不同周龄之间高度遗传相关(0.57~0.99),同一周龄不同性状之间遗传相关(-0.39~0.43)和表型相关(-0.049~0.122)均较低。本研究表明高产蛋鸡纯系产蛋后期蛋品质随周龄增加有所下降,同一性状不同周龄之间高度相关,可以通过前期的选育提高后期蛋品质。     

贵州4个地方鸡种蛋品质比较分析

为探析赤水乌骨鸡、兴义矮脚鸡、黔东南小香鸡和瑶山鸡4个贵州地方鸡种蛋品质差异，进一步挖掘贵州地方鸡产蛋性能，试验随机选取在相同饲养管理条件下的4个鸡种产蛋初期和产蛋高峰期鸡蛋各60个进行蛋品质测定及性状指标相关性分析。结果表明：品种内比较，4个鸡种产蛋高峰期的蛋黄指数、蛋白高度、哈氏单位、蛋壳厚度和蛋壳强度显著（P<0.05）或极显著高于初产期（P<0.01）；品种间比较，产蛋初期瑶山鸡哈氏单位、蛋壳颜色显著高于同时期的黔东南小香鸡（P<0.05），蛋形指数显著高于赤水乌骨鸡（P<0.05），但其蛋黄颜色显著低于其余3个鸡种（P<0.05）。产蛋高峰期赤水乌骨鸡蛋黄指数、颜色与其余3个鸡种呈显著性差异（P<0.05）。相关性分析显示有8对指标之间存在显著或极显著相关，其中蛋重与蛋白高度、哈氏单位呈显著和极显著正相关（P<0.01），与蛋黄颜色、蛋壳强度极显著负相关（P<0.01）；蛋壳厚度与蛋壳强度呈极显著正相关。研究结果表明不同品种鸡的蛋品质有着不同的遗传潜能及潜在研究价值，为贵州省地方鸡种种质资源保护和开发利用提供理论数据支撑。