新疆部分地区羊捻转血矛线虫系统进化与抗药性分析

为了解新疆塔城及博乐地区羊捻转血矛线虫的流行情况和系统进化关系,以及这两个地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗药性,在塔城和博乐地区分别收集20、12个羊皱胃分离捻转血矛线虫,进行形态学鉴定、分子生物学鉴定以及抗药性分析。结果显示:在塔城地区的14个羊皱胃内发现有寄生性线虫,通过PCR鉴定出27只捻转血矛线虫;在博乐地区的7个羊皱胃内发现有寄生性线虫,共鉴定出55只捻转血矛线虫。对PCR阳性样品进行测序并应用最大似然法构建系统发育树进行系统进化分析发现:本试验所测序列与GenBank上的捻转血矛线虫虫株序列聚为一支,置信度为100%;与捻转血矛线虫同科不同属的环纹背带线虫虫株序列相聚类,置信度为100%;其外群为不同科、不同属的羊仰口线虫,登录号为KP792295.1;内群与外群分别形成独立的进化分支。对β-tubulin基因进行多序列比对发现,所选样本并未出现苯并咪唑类药物抗性。本研究有助于了解捻转血矛线虫流行情况,并为捻转血矛线虫系统进化及苯并咪唑类药物抗性分析提供了依据。     

山羊捻转血矛线虫ITS基因序列分析

为了解不同年份山羊源捻转血矛线虫内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因的遗传变异情况,提取2015年-2020年间陕西省咸阳地区44株山羊源捻转血矛线虫的核糖体DNA(rDNA),对其ITS基因进行扩增、测序与分析.结果显示,44株捻转血矛线虫的ITS-1序列长度为400 b...     

捻转血矛线虫冷冻保藏研究

用人工感染捻转血矛线虫单一种试验羊粪便培养收集感染性幼虫。经０．０６％和０．０８％次氯酸钠脱鞘，脱鞘率可达９０％以上，慢速致冷后幼虫的存活率为６４．５％。加入冷冻保护剂不能提高冷冻感染性幼虫的存活率。用正常的感染性幼虫感染试验羊后第１７ｄ即可查到虫卵，剖杀后成虫的回收率为２．６％，而相同数量的冷冻保藏的感染性幼虫感染后第２１ｄ才查到虫卵，成虫回收率为０．８％。表明冷冻保藏后的感染性幼虫发育受阻，成     

捻转血矛线虫离体培养的研究

本实验研究了:(1)三种人工合成培养基:M199、NCTC109、F_(12);(2)小牛脱纤维蛋白血(以下简称小牛脱纤血)、Filde’s试剂,Bovine hemin;(3)pH值等几种因素对离体培养中捻转血矛线虫(Haemonchou contortus)L_3发育至L_4的影响。结果表明:(1)在相同条件下,NCTC109和M199培养系中的L_3可发育至L_4晚期,F_(12)中L_3只发育至L_4早期;三种培养系中L_3发育至L_4的虫体数占存活虫体数的90％以上,以NCTC109中的发育率为最高,达100％。(2)小牛脱纤血、Filde’s试剂和Bovine hemin对L_3发育至L_4均有促进作用,虫体的存活率明显提高,晚四期幼虫的存活时间延长;小牛脱纤血和Filde’s试剂可使L_3至晚L_4的时间缩短。(3)pH 5.8～6.2时,L_3发育至L_4;速度明显减慢,发育率不到50％;pH 6.6～6.8时,L_3发育至L_4的同步性及发育率明显提高,以pH6.6为最佳。     

羊捻转血矛线虫病

羊的消化道线虫病常见多发,危害畜牧业生产.我们在剖检的14只绵羊的真胃中都发现了数量不等的捻转血矛线虫,感染率达100%.     

北京郊区羊感染捻转血矛线虫情况调查报告

通过粪便检测法和幼虫培养法,对北京地区5个区县的5个不同规模的羊场(423只羊)进行了捻转血矛线虫的感染情况调查。结果显示,检测230只羊的粪样,感染40只,捻转血矛线虫的感染率为17.4%。其中通县感染率为100%,其它4个郊区(县)均无感染。     

西藏牦牛捻转血矛线虫的鉴别

捻转血矛线虫属毛圆科血矛属线虫,是危害反刍动物最严重的消化道寄生虫之一,常引起反刍动物的贫血、生产繁殖性能及抗病力下降,给畜牧业带来较大的经济损失。本文报道了西藏林芝地区某农牧户被宰牦牛真胃线虫的分离鉴别,经对虫体形态观察和PCR检测,确认为捻转血矛线虫。     

捻转血矛线虫ZJ株24000分泌排泄(ES)蛋白基因的克隆和序列分析

通过 RT- PCR方法 ,从捻转血矛线虫成虫总 RNA中扩增得到特异性片段 ,并把这一基因片段克隆到 p U C18克隆载体上 ,进行测序及同源性比较。序列分析可知 ,其核苷酸序列与国外已发表的 2 4 0 0 0分泌排泄抗原基因的同源性为 99.2 %。表明本试验成功提取了捻转血矛线虫成虫总 RNA,并用 RT- PCR方法克隆了 2 4 0 0 0分泌排泄抗原基因 ,为该基因的表达及其免疫学作用研究奠定了基础     

捻转血矛线虫中肠超微结构

捻转血矛线虫中肠由单层上皮细胞所组成，未见明确的细胞界限，并向肠腔内伸出相互平行、排列整齐的微绒毛，长约6.5μm，微绒毛中心由纵贯微绒毛并相互平行的微丝构成；细胞核位于细胞中部，核膜清楚，体形大，形状不规则，有一较大的核仁，异染色质凝集成块状，电子致密度甚高。分散于核质中；上皮细胞中部细胞器丰富，有粗面内质网、线粒体、高尔基体及溶酶体；基部为胶原纤维样，并含有丰富的内质网。     

山羊源3种不同形态阴门盖捻转血矛线虫雌虫的多位点序列分析

旨在解析3种不同形态阴门盖捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）的遗传进化差异,本研究从养殖场山羊皱胃中分离到捻转血矛线虫虫体,采用普通光学显微镜观察71条雌虫虫体阴门盖的形态结构特征,并基于捻转血矛线虫ITS-1、ITS-2和nad4基因位点,采用PCR法对不同阴门盖的虫体进行扩增,通过比对多位点序列进行遗传进化分析。经显微镜观察发现,本研究分离到的捻转血矛线虫雌虫阴门盖存在舌瓣形、亚球形和舌-球混合形3种形态,所占比例分别为45.07%（32/71）、50.70%（36/71）和4.23%（3/71）。对43条雌虫全长和阴门至虫体末端长度进行测量和统计分析,结果显示,3种不同形态阴门盖的捻转血矛线虫全长统计学差异不显著（P>0.05）,而3种不同形态阴门盖的捻转血矛线虫阴门至虫体末端的长度存在显著性差异（P<0.05）。基于捻转血矛线虫ITS-1、ITS-2和nad4基因进行的序列分析结果显示,不同形态阴门盖虫体的9个样品在3个基因位点上存在不同程度的碱基差异,多态性位点分别为10、13和43个,核苷酸多态性分别为0.85%、1.34%和1.97%。基于ITS-1和ITS-2构建的遗传进化树显示,研究中所用样品与GenBank上H.contortus的参考序列处于同一进化支,表明本研究所分离到的虫体均属捻转血矛线虫。捻转血矛线虫雌虫的阴门盖存在形态学差异,不同形态阴门盖虫体在ITS-1、ITS-2和nad4基因位点上均存在不同程度的碱基差异,此研究结果为捻转血矛线虫的种类鉴定和遗传进化提供了参考数据。     

捻转血矛线虫重组H11抗原山羊免疫保护性试验

以重组H11-1、H11-2及H11-1与H11-2混合物分别免疫山羊后,ELISA检测发现血清抗体均在首次免疫后14 d达到较高水平,在第2次免疫后10 d达到高峰。用10 000只捻转血矛线虫第3期幼虫攻击山羊后,对不同免疫组山羊排出虫卵数、虫卵孵化率和成虫数的统计分析结果表明,免疫组与对照组间差异不显著,但免疫组雌虫数显著少于对照组,这对防治捻转血矛线虫病可能会起一定的作用。     

捻转血矛线虫阿苯达唑耐药株给药前后比较转录组学分析

为探明捻转血矛线虫阿苯达唑耐药株给药前后在转录组水平上的差异,本研究采用Illumina Hiseq4000对给药前后的捻转血矛线虫进行转录组测序,筛选得到差异表达基因并通过GO和KEGG数据库对其进行功能注释及富集性分析,并利用荧光定量PCR验证部分差异表达基因。结果显示,共筛选获得851个显著差异表达基因,其中包括584个上调基因和267个下调基因。通过GO功能富集分析显示,有458、418和367个基因分别注释到生物学过程、分子功能和细胞组分三大类;对差异表达基因进行KEGG富集分析显示,有173个差异表达基因参与到75条KEGG通路中,显著富集在核糖体合成、细胞凋亡、过氧化物酶增殖体激活受体(PPAR)等信号通路。本试验初步筛选了阿苯达唑耐药株给药前后的差异表达基因,为深入探索捻转血矛线虫耐药性分子机制、筛选对耐药性检测的分子标记及耐药性早期鉴别诊断方法的建立提供重要数据。     

Eprinomectin 'pour-on' and the shedding of Haemonchus contortus eggs in experimentally infected goats

The effect of eprinomectin on goats experimentally infected with the nematode Haemonchus contortus was investigated. Faecal analysis showed that a single dose of eprinomectin 'pour-on' delayed the onset of shedding of eggs for 10 to 17 days.     

捻转血矛线虫HLJ株15 ES抗原基因的原核表达

为了对羊源捻转血矛线虫(H.contortus)15 ES抗原基因进行原核表达,本研究利用RT-PCR技术从黑龙江省羊源H.contortus成虫总RNA中扩增得到相对分子质量15Ku ES蛋白基因(H15 ES),序列分析表明,其核苷酸序列与国外已发表的15 ku排泄分泌抗原基因的同源性为99.78%.将H15 ES克隆至pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-H15 ES,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达蛋白相对分子质量约为35.2 ku.本研究为H.contortus病诊断抗原和保护性抗原的大量制备及H.contortus核酸疫苗的研究奠定了基础.     

苦楝提取物对捻转血矛线虫卵和幼虫活性的影响

为初步探讨苦楝对捻转血矛线虫的作用,本试验通过观察苦楝提取物对虫卵和幼虫活性及形态变化的影响,评估其对捻转血矛线虫的驱虫活性,以期为家畜捻转血矛线虫病的防控及植物驱虫药物的研发奠定基础。试验对苦楝水提取物和乙醇提取物设置5个浓度（25、12.5、6.25、3.125、1.562 mg/mL）进行虫卵孵化试验和幼虫活性试验,对不同浓度药物处理的虫卵及幼虫进行计数,并观察药物作用后虫卵和幼虫的孵化状态及形态变化。结果显示,正常孵育的虫卵和幼虫活力良好,苦楝提取物作用48 h后,虫卵呈未孵化、半孵化状态,发育至桑葚期、蝌蚪期及幼虫期死亡,并且各浓度苦楝水提物和醇提物对虫卵均具有抑制作用,其中苦楝皮醇提物对虫卵孵化的抑制效果最佳,在浓度25 mg/mL时,对虫卵孵化的抑制率高达98.2%,在12.5 mg/mL时,苦楝子醇提物对虫卵的抑制率极显著高于苦楝皮醇提取物（P<0.01）。苦楝子提取物对感染性三期幼虫的致死效果较差,在50 mg/mL时对幼虫有较高致死率（82.6%）。苦楝皮水提取物在浓度为50 mg/mL时对幼虫的致死效果尤为突出,幼虫死亡率为97.0%,死亡的幼虫呈"直线型"或"弓型"。经方差分析,在12.5~50 mg/mL浓度范围内,相同浓度苦楝水提取物之间的致死率存在显著或极显著差异（P<0.05;P<0.01）,同浓度苦楝醇提取物对幼虫的致死率存在极显著性差异（P<0.01）。综上所述,苦楝提取物对体外的捻转血矛线虫卵和感染性三期幼虫的活性均有抑制作用,其中25 mg/mL苦楝皮醇提物对虫卵孵化的抑制效果最佳,50 mg/mL苦楝皮水提物对感染性三期幼虫的致死作用最好。     

Evaluation of a laboratory test to detect resistance to closantel in Haemonchus contortus

OBJECTIVE: To evaluate a laboratory test for closantel resistance in Haemonchus contortus. PROCEDURE: Field isolates of H contortus, known to be resistant to closantel, were tested in the assay. In addition, mixtures of closantel-susceptible and closantel-resistant laboratory reference strains were tested to develop a method of predicting the proportion of resistant worms in a sample from the field. RESULTS: The assay correctly identified as resistant all of the closantel-resistant field isolates of H contortus. It also identified one isolate with an in vivo efficacy of 98% as having emerging resistance. Testing of the mixtures of laboratory reference strains revealed that an isolate would be classified as resistant when it consists of about 25% or more resistant worms. Test samples that are not fully susceptible yet contain less than 25% resistant worms may be classified as emerging resistance. CONCLUSION: The in vitro migration assay is a sensitive method of detecting closantel resistance in H contortus.     

伊维菌素耐药及敏感捻转血矛线虫国内分离株的鉴定

为解决国内开展驱虫药耐药性相关研究中虫种资源缺乏问题,该研究采用国际通用方法开展了华北地区捻转血矛线虫耐伊维菌素虫株的分离工作,并采用传统形态学方法对其进行鉴定。对来源不同的耐伊维菌素捻转血矛线虫虫株进行分离,结果显示：华北地区分离到了4株对伊维菌素6倍耐药及1株对其敏感的捻转血矛线虫。该研究将为国内开展捻转血矛线虫耐伊维菌素研究及新型驱虫药物的开发提供虫种资源。