桦褐孔菌多糖对小鼠脏器中弓形虫感染的影响

研究桦褐孔菌多糖对小鼠脏器中弓形虫感染的影响,探讨桦褐孔菌多糖对小鼠的保护作用.建立小鼠弓形虫感染模型,设立空白对照组,感染对照组,阳性对照组,桦褐孔菌多糖组.治疗结束后,采集脏器,用半定量PCR检测各脏器中弓形虫基因拷贝数.桦褐孔菌多糖治疗组小鼠的肝脏、脾脏、肺脏中的虫体拷贝数显著低于阴性对照组.表明桦褐孔菌多糖能够...     

桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小鼠治疗作用及其对血清中细胞因子含量的影响

建立小鼠弓形虫病模型后,将小鼠随机分成6组,统计小鼠存活率及时间,再应用ELISA检测血清中IFN-γ、IL-2等细胞因子水平,以检测桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小鼠的治疗效果及对小鼠血清中IFN-γ、IL-2细胞因子水平的影响。结果表明,桦褐孔菌多糖中剂量组小鼠存活率最高;桦褐孔菌多糖的高、中剂量组IFN-γ水平极显著高于其他各组(P<0.01),高剂量组IL-2水平与其他各组比较差异极显著(P<0.01);除感染组外,其余各组IFN-γ、IL-2均在第6天出现峰值。说明桦褐孔菌多糖中剂量治疗弓形虫感染小鼠效果最好,并且中剂量可使小鼠血清中IFN-γ、IL-2值升高到适当水平,有效改善弓形虫感染对小鼠的伤害。     

桦褐孔菌多糖治疗弓形虫感染小鼠血清中细胞因子的变化

为了探讨桦褐孔菌多糖对感染不同毒株弓形虫小鼠的早期作用机制,将健康鼠随机分成3组,建立感染不同毒株弓形虫小鼠模型后,应用ELISA方法检测血清中IL-6、TNF-α细胞因子水平。结果:感染RH株与感染PLK株的弓形虫小鼠血清中IL-6、TNF-α的结果相比较,2种毒株的模型组于感染后的值均呈现上升趋势,分别在48和24 h达到峰值,而后呈现下降趋势,但感染RH株的模型组表达量在12~60 h比感染PLK株更高;2种毒株的试验组(桦褐孔菌多糖治疗)于12~60 h期间IL-6、TNF-α的值均一直高于阴性组,低于模型组。说明感染RH株弓形虫小白鼠与感染PLK株弓形虫小白鼠相比较更能刺激其血清中IL-6、TNF-α的过度表达,桦褐孔菌多糖能调节感染不同毒株弓形虫小鼠IL-6、TNF-α的表达。研究表明,桦褐孔菌多糖通过提高机体的免疫功能达到抗弓形虫的目的。     

桦褐孔菌多糖对急性感染弓形虫小鼠c-Jun、IL-12和IL-1β的影响研究

为了探讨桦褐孔菌多糖对急性感染弓形虫小鼠核转录因子c-Jun、IL-1β和IL-12的影响,本试验在建立急性感染弓形虫小鼠模型后,随机将其分成3组:阴性组、急性感染弓形虫小鼠模型组和桦褐孔菌多糖试验组。采用RT-PCR法检测肝组织中c-Jun及脾组织中IL-1β和IL-12的mRNA表达;Western blot法检测c-Jun蛋白的表达。结果显示:c-Jun、IL-1β和IL-12的mRNA分别在360、736和978 bp处扩增出单一电泳条带,且c-Jun蛋白在39 ku处表达,均呈现出弓形虫感染组表达量最高,桦褐孔菌多糖试验组次之,对照组最弱。说明桦褐孔菌多糖可能通过下调c-Jun过度表达,抑制IL-1β、IL-12的过度表达,部分阻抑了AP-1信号通路转导,从而减轻炎症反应,达到抗弓形虫感染的目的。     

桦褐孔菌多糖对弓形虫感染孕鼠生殖器官及其胎鼠发育的影响

为探讨桦褐孔菌多糖对弓形虫感染孕鼠生殖器官及其胎鼠发育的影响,采用弓形虫RH株感染雌性性成熟小鼠,以蒿甲醚为阳性对照组,桦褐孔菌多糖为试验组,并设立阴性组和模型组.观察孕鼠胎儿的死胎散、体重、体长等发育指标,同时记录剖检前各组孕鼠死亡数和受孕数,并对孕鼠的生殖器官进行病理组织观察.经统计分析,桦褐孔菌多糖组与模型组在孕鼠死亡率和受孕率方面差异极显著(P＜0.01);在死胎率、活胎鼠平均体重、活胎鼠平均体长方面差异也极显著(P＜0.01);而两药物组仅在受孕率方面显著差异(P＜0.05),其孕鼠生殖器官的病理组织仅呈轻微的炎症变化.表明桦褐孔菌多糖对弓形虫感染孕鼠的胎鼠发育具有保护作用;并可明显缓解弓形虫感染对孕鼠生殖机能的损害.     

5种中药对急性感染弓形虫小鼠的治疗效果

首先,测定感染小鼠最小致死量;然后,通过体内安全性试验确定各种药物治疗剂量;最后,评价5种中药对急性感染弓形虫小鼠的治疗效果,即:各药物组每只小鼠经腹腔感染25个弓形虫速殖子后4h,小鼠逐只经胃灌服剂量为25g/kg的白牛胆、垂花香薷、黄皮叶或桦褐孔菌,或10.4mg/kg蟾酥、200mg/kg磺胺间甲氧嘧啶钠,每日2次,连用5d,同时设感染不用药组和空白对照组,以小鼠存活率与平均存活时间、腹腔液中虫体数、组织病变程度以及SOD活性等指标评价药物效果。结果显示,磺胺间甲氧嘧啶钠、蟾酥、桦褐孔菌、黄皮叶、白牛胆、垂花香薷组的小鼠存活率分别为66.67%、61.11%、50.00%、5.56%、0%和0%。蟾酥、桦褐孔菌与磺胺间甲氧嘧啶钠组的小鼠平均存活时间、腹腔液中虫体数和血清SOD活性相近,三者间无显著差异(P0.05),均显著好于黄皮叶、白牛胆、垂花香薷和感染不用药组(P0.05)。在磺胺间甲氧嘧啶钠组和蟾酥组在肺脏仅出现肺泡隔毛细血管轻微充血,在肝脏和脾脏无明显病变或病变不明显;桦褐孔菌组的肝脏也无明显病变;其他治疗组的脾脏均有不同程度坏死。结果表明,蟾酥与桦褐孔菌的抗弓形虫效果与磺胺间甲氧嘧啶钠相近,白牛胆、垂花香薷和黄皮叶的抗弓形虫效果不明显。     

桦褐孔菌多糖对STZ诱导后的C57BL/6小鼠糖脂和免疫功能的影响

为了研究桦褐孔菌多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导后的C57BL/6糖尿病模型小鼠的糖脂和免疫功能的影响,试验将小鼠随机分为正常组、模型组、桦褐孔菌多糖高剂量组、桦褐孔菌多糖中剂量组、桦褐孔菌多糖低剂量组共5个组,除正常组外,其余4组小鼠均是通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ),1周后禁食不禁水12 h空腹血糖值≥7.8 mmol/L的成模小鼠,桦褐孔菌多糖高、中、低剂量组,分别按体重灌胃给予600,400,200 mg/kg的桦褐孔菌多糖,正常组和模型组灌胃给予等量的生理盐水,4周后禁食不禁水12 h,眼球后静脉取血测空腹血糖和三酰甘油含量;取脾脏计算脾指数;同时用流式细胞仪检测脾脏的CD_4~+/CD_8~+比值。结果表明:桦褐孔菌多糖能够在不同程度上改善糖尿病小鼠的体重和脾指数,降低其空腹血糖和三酰甘油的含量,提高脾脏的CD_4~+/CD_8~+比值。说明桦褐孔菌多糖能够降低糖尿病小鼠糖、脂水平,提高糖尿病小鼠的免疫功能。     

桦褐孔菌多糖对环磷酰胺化疗后小鼠免疫功能的研究

为了研究桦褐孔菌多糖对环磷酰胺(CTX)化疗小鼠免疫损伤的影响,试验将小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺组和桦褐孔菌多糖低、中、高剂量5个组。除正常对照组外,其余各组均皮下注射CTX 100 mg/kg;桦褐孔菌多糖低、中、高剂量组分别给予桦褐孔菌多糖溶液100,200,400 mg/kg,灌胃,正常对照组和环磷酰胺组给予等量生理盐水,1次/d,连用6 d。第7天检测各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及血清Ig G、Ig M含量,计算免疫器官指数。结果表明:桦褐孔菌多糖可以不同程度地恢复CTX化疗小鼠的胸腺指数和脾脏指数;显著提高小鼠血清Ig G和Ig M水平(P0.05);降低CTX化疗小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数。说明桦褐孔菌多糖能提高机体的体液免疫水平,对巨噬细胞的吞噬功能有调节作用,对CTX化疗免疫功能的损伤有一定的保护作用。     

桦褐孔菌粗多糖对急性感染弓形虫小鼠的存活时间及SOD的影响

为探讨桦褐孔菌粗多糖(IOCP)对急性感染弓形虫小鼠的存活时间及血清、心、肝和肺中超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响。采用昆明系小鼠80只,随机分为IOCP组、阳性对照组(蒿甲醚)、空白对照组和阴性对照组,每组20只。用RH株弓形虫建立小鼠病理模型,观察小鼠治疗后的存活时间,以及血清、心、肝和肺中SOD含量。结果:IOCP及阳性药物均可延长感染弓形虫小鼠的存活时间;可明显提高小鼠脏器SOD活性;与阳性对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:IOCP能延长感染弓形虫小鼠的存活时间,并具有抗氧化损伤作用。     

桦褐孔菌多糖的提取及体外抗新城疫病毒活性试验

为研究桦褐孔菌多糖抗新城疫病毒活性,本试验采用水提醇沉法提取桦褐孔菌多糖,用苯酚-硫酸比色法,以葡萄糖为标准品测定桦褐孔菌菌核多糖提取率。并将提取的多糖配制成试验所需浓度用于测定其体外抗新城疫病毒活性。MTT法检测预先加多糖、接种病毒后加多糖和多糖与病毒同时加入3种不同方法对新城疫病毒的抗病毒活性。结果初步说明桦褐孔菌多糖具有一定的抗病毒活性,为新型抗新城疫病毒药物或疫苗的研发奠定基础。     

四种中药体外抗弓形虫效果的比较

目的:通过黄芩、甘草、马齿苋、桦褐孔菌四种中药体外抗弓形虫效果的比较,探讨其体外抗弓形虫的效果。方法用弓形虫RH株的速殖子感染培养的非洲绿猴肾细胞(VERO),加受试药物,以蒿甲醚为阳性药物对照,在加药后的12h、24h、48h观察细胞和弓形虫的生长情况及形态。加药48h后,分离出虫体,台酚蓝染色,计数,判断药物作用效果。结果:黄芩、甘草体外可明显抑制弓形虫的生长和繁殖,作用效果与药物浓度呈正相关;而马齿苋及桦褐孔菌体外抑制弓形虫效果较弱。     

三种中药和桦褐孔菌提取物体外抗弓形虫试验

为了进一步研究甘草、黄芩、马齿苋和桦褐孔菌体外抗弓形虫作用,本试验将提取的3种中药和桦褐孔菌提取物及其组合分别进行了体外抗弓形虫试验。结果表明,甘草和黄芩提取物具有较好的抗虫效果,且黄芩优于甘草,马齿苋和桦褐孔菌提取物抗虫效果较弱;甘草与黄芩组合、4种提取物组合的效果优于其他组合和蒿甲醚组。说明4种提取物组成的复方在体外具有良好的抗弓形虫作用。     

弓形虫MORN2基因敲除株的构建及其表型鉴定

本研究旨在构建弓形虫（Toxoplasma gondii）Ⅰ型RH虫株的膜占位与识别联结蛋白2（membrane occupation and recognition nexus protein，MORN2）基因敲除株，探究MORN2基因的表型功能。利用CRISPR/Cas9技术在sgRNA设计网站筛选出以MORN2基因为靶标的sgRNA并设计引物，以pSAG1∷CAS9-U6∷sgUPRT质粒为模板，在Q5酶作用下构建出MORN2靶向CRISPR的质粒；在MORN2靶点两翼约500 bp设计同源臂引物，以pUPRT∷DHFR-D质粒为模板构建含有乙胺嘧啶药物抗性基因（DHFR）的同源片段；将CRISPR质粒与同源片段电转染到弓形虫速殖子中，进行乙胺嘧啶药物筛选、96孔板单克隆筛选及PCR鉴定。结果显示，试验成功获得MORN2基因敲除株，在体外噬斑试验中，该敲除株的生长速度与野生型RH虫株基本一致；在体内感染试验中，分别以100和1 000个敲除株的速殖子腹腔注射小鼠，小鼠的死亡时间与对照组基本一致，说明MORN2基因的缺失几乎不影响RH虫株在体外培养时的生长速度和感染小鼠的毒力。本研究证明了MORN2基因在RH虫株中无表型功能，为进一步探究弓形虫的功能基因奠定了基础。     

弓形虫卵囊感染小鼠的急性期与慢性期的脑组织蛋白质组变化

弓形虫是一种呈世界性分布的机会性致病原虫,可引起致命性脑炎.人弓形虫病急性感染往往与弓形虫卵囊污染密切相关.探究弓形虫卵囊感染对宿主的致病机制和防控弓形虫病具有重要意义.因此,本研究利用iTRAQ技术,结合2D-LC-MS/MS分析弓形虫PRU虫株卵囊急、慢性感染小鼠后,其脑组织蛋白质的差异表达情况.结果 表明,在急性...     

Toxoplasma gondii induction of interleukin-12 is associated with acute virulence in mice and depends on the host genotype

The intracellular parasite Toxoplasma gondii can influence host resistance by modulating immune functions in various cell types. The stimulation of interleukin (IL)-12 production in macrophages, dendritic cells and neutrophils by T. gondii has been implicated to be important for skewing anti-parasite immunity early after infection as well as in mediating the pathologic effects induced by the parasite. The present study demonstrates secretion of IL-12 p40 and the bioactive p70 heterodimer by inflammatory macrophages following exposure to live Toxoplasma or tachyzoite lysate. Parasite induction of IL-12 occurred in a dose-dependent manner. Predigestion of T. gondii lysate with proteinase K abrogated its IL-12 inducing activity, thus indicating that a parasite protein(s) triggers this response. Macrophages from various mouse inbred strains showed a differential responsiveness: cells from T. gondii-susceptible mice released more IL-12 upon toxoplasmic challenge than those from resistant mice, although the infection rate and intracellular parasite growth were similar. In triggering macrophage production of IL-12, tachyzoites proved superior to bradyzoites prepared from the same T. gondii isolate. Furthermore, parasites of a mouse-virulent isolate became less efficient inducers of IL-12 following attenuation. The parallel loss in macrophage stimulation in vitro and acute virulence in vivo suggests a linkage of both parasite capacities. Together with the correlation on host side between the genotype-dependent mouse susceptibility to infection and cellular responsiveness to the parasite trigger, these findings indicate that an overproduction of parasite-induced IL-12 might represent a basic mechanism of T. gondii pathogenicity.