茶树的RAPD标记向SCAR标记转化的研究

SCAR标记是在RAPD技术的基础上发展起来的一种新型分子标记技术,相对其他分子标记,它具有开发成本低,稳定性高,单位点多态等特点,将为茶树分子育种开辟一条新的有效途径。通过将随机引物在不同茶树品种基因组DNA中扩增得到的特异性片段,经回收、克隆、测序后重新设计1对特异性引物,将RAPD标记成功转化成SCAR标记,提高了分子鉴定的稳定性。     

洋葱细胞质雄性不育基因RAPD及SCAR分子标记研究

对洋葱雄性不育系101A及其保持系101B基因组 DNA 进行 RAPD 分析,共使用了200条随机引物,其中有188条引物在两系之间都得到了扩增产物,68条引物扩增结果在两系之间表现出了遗传多态性.在其不育系中获得了1条稳定扩增的片段 AK151400,序列测定结果表明, AK151400序列全长为 1 360 bp,其编码的氨基酸序列与水稻(Oryza sativa L.)的GA3(AP005256.3,GI:50508703)序列有59%的同源性和75%的相似性.根据序列测定结果设计了1对特异引物,将AK151400转化为更稳定的SCAR标记.     

小麦抗白粉病基因Pm6的RAPD标记和SCAR标记

用 1 8 1条 1 0碱基随机引物扩增感病亲本豫麦 1 3号和含Pm6基因的抗病亲本Tim galen ,有 37条引物在Timgalen中检测到多态性片断 ,经多次重复和F2 验证 ,引物S1 38仍能在Timgalen中扩增出稳定的多态性片断 ,对该多态性片断进行回收、克隆和测序 ,根据其序列合成 1对特异引物 ,成功地将RAPD标记转化成稳定的SCAR标记 ,并用此引物对豫麦 1 3号和Timgalen的杂交F2 单株检测 ,计算出该标记与抗病基因之间的遗传距离为 2 7.1cM。并对含不同抗白粉病基因的载体品种进行了SCAR分析。     

鲤抗寒性状的RAPD标记转化为SCAR标记的研究

以黑龙江鲤Cyprinus carpio haematopterus、荷包红鲤抗寒品系、荷包红鲤Cyprinus carpio var.、柏氏鲤Cyprinus pellegnini pellegnini以及荷包红鲤抗寒品系(父本)与柏氏鲤(母本)杂交F2的DNA样品为材料,用300个随机引物对其进行PCR扩增,获得2个与鲤抗寒性状相关的分子标记AL04986和AR02788。回收、纯化这两个RAPD标记,连接到pMD18-T载体中,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,并对插入片段进行测序。根据测序结果,设计了3对SCAR引物SCAL04L/SCAL04R1、SCAL04L/SCAL04R2和SCAR02L/SCAR02R,其中SCAR02L/SCAR02R这对引物可以成功的反映出杂交F2两个群体在抗寒能力上的差异,适宜的退火温度为57℃,将此标记命名为SCAR02788。根据AL04986的测序结果设计的两对SCAR引物并没有反映出这种差异。SCAR02L/SCAR02R标记可以用作鲤抗寒基因分子辅助选择的依据。     

偃麦草E染色体组特异RAPD和SCAR标记的建立

用100条10碱基随机引物，以普通小麦中国春，中间偃麦草为材料进行RAPD分析，筛选到一个偃麦草染色体组特异引物OPF03，并从中间偃麦草中克隆了该引物的特异DNA片段OPF031291。将该片断与比萨偃麦草中的OPF031296（GenBank序号U43516）比较，同源性为88％。根据OPF031291的序列，设计了2对SCAR引物，利用OPF03和引物P3，P4对普通小麦，普通小麦－中间偃麦草的部分双二倍体，长穗偃麦草，中间偃麦草，小麦－二倍体长穗偃麦草代换系，附加系共6类材料进行了RAPD和SCAR分析，发现RAP标记OPR031291没有出现在含E^e染色体组的材料中，而标记SCAR982则出现于所有含E染色体组的材料中。说明，根据E^b染色体组特异RAPD标记转化的SCAR标记，可以同时检测小麦背景下的E^e染色体。     

甘草种子SCAR标记的建立

甘草是一种常用中药材，药典记载的甘草药材来源植物有三种，即：乌拉尔甘草、光果甘草和胀果甘草。目前人工栽培用的甘草种子有些来自人工培育，有些来自野生收集，因此容易造成种子的混杂。通过将收集到的5种甘草种子进行RAPD（随机扩增多态性DNA）PCR扩增，对RAPD电泳图谱上具有差异性的条带进行克隆测序，根据序列信息设计序列特异的引物，建立甘草种子的SCAR（序列特异的扩增区域）标记。初步建立了几种甘草种子的SCAR标记：GC1F／GC1R，GC2F／GC2R，和GC3F／GC3R。     

番茄抗叶霉病基因Cf6的RAPD及SCAR标记

 【目的】寻找与番茄抗叶霉病基因Cf6连锁的分子标记。【方法】 以番茄抗叶霉病和感叶霉病亲本组合（03036×03748）的F2分离群体为研究材料,采用BSA法和RAPD技术筛选与抗病基因连锁的分子标记。【结果】经F2单株分析,在后代群体中扩增出了两条长约500 bp的特异片段,该特异标记与叶霉病抗性基因Cf6紧密连锁,遗传距离为8.7 cm。测序结果显示,目标片段的大小分别为619 bp和559 bp,并将该标记转换为SCAR标记。【结论】SCAR标记,可用于番茄叶霉病抗性分子标记辅助育种。     

27种大麻资源的RAPD聚类分析

采用RAPD技术对27个大麻品种进行了分类研究。从300个10bp随机引物中筛选出34个扩增效果较好的引物进行扩增,共产生261条带,其中233条为多态性带,占89．27％,根据扩增结果构建反映品种间亲缘关系的UPGMA聚类图,27个品种可划分为3大类。     

RAPD 分子标记对工业大麻诱变材料的分析

诱变育种是人们在发生突变的个体中选择符合需要的植株进行培育,从而获得新品种。RAPD分子标记是一种新型的分子遗传标记,方法简单,花费少。利用RAPD对工业大麻诱变材料进行研究,构建树状图,分析突变材料的变异情况,结果表明:与对照差异显著的诱变材料,其诱变浓度或剂量与之前筛选的适宜诱变浓度或剂量相近。化学诱变浓度是2.0%,处理6 h;Co60-γ诱变剂量基本都在150 Gy左右,RAPD分子标记也可以作为诱变浓度或剂量的筛选标准。     

苹果抗斑点落叶病基因的一个RAPD标记的SCAR转换

将苹果抗斑点落叶病相关基因的一个RAPD标记成功转换为重复性和特异性更好的SCAR标记。由序列特点设计特异SCAR引物,并用所设计引物对两亲本和抗病、感病基因池及F1代单株进行PCR扩增。结果表明,秦冠×富士F1代群体在抗病后代个体中扩增出470 bp条带,而在感病后代个体中无此扩增条带,故将该标记命名为SCAR470。同时,分析分离群体的扩增,重复率为4.69%,表明该标记可以用于苹果斑点落叶病的分子鉴定。     

山西省大麻研究进展

主要从大麻品种资源的研究、育种技术研究、栽培技术研究及综合利用技术的研究4个方面对山西省大麻研究情况进行了概述,以供参考。     

大麻染色体制片技术

[目的]探究大麻染色体的制片技术。[方法]对大麻染色体制片技术的预处理液、解离时间、染色时间等进行试验研究,并对其进行染色体数目观察。[结果]研究表明:用大麻根尖在常温下用0.003%的8-羟基喹啉溶液预处理2 h或用饱和对二氯苯处理1.5 h,经卡诺固定液固定30 min后,在1∶1的1 mol/L HCl和45%醋酸60℃下恒温水浴中解离30 s,地衣红染液染色8 h压片镜检,能取得良好的制片效果。大麻染色体数目观察表明,大麻染色体数目2n=2x=20。[结论]该研究为大麻细胞学方面的深入研究提供了资料。     

特色高油作物火麻引种试种研究

[目的]探索火麻（Cannabis stativa L.）生长发育规律及产量表现。[方法]2007～2009年,收集和引进3个火麻品种（广西巴马种、云南种和兴义种）在贵州兴义和望谟进行品比和栽培技术研究及适应性观察。[结果]巴马种生长旺盛,植物粗大,分枝密,比云南种和兴义种生长表现都好;巴马种产量最高,其次是兴义种,最后是云南种,且3个品种间在0.01水平上有差异;3个品种种植密度为150㎝×150㎝时产量均最高,其次为150cm×180cm,最后为150cm×120cm,且3个密度间在0.01水平上有差异;品种与种植密度交互作用,同样在0.01水平上有差异,因此以巴马种种植密度为150cm×150cm为最佳。[结论]在贵州省南、北盘江,红水河、赤水河、舞阳河流域的黔西南州、黔南州、安顺、黔东南州等的低热河谷地带,年均温在19℃以上,海拔在550～1400m,降雨量1000～1500mm,年日照时数在1400h以上,无霜期在350d以上或基本无霜的地方均能进行种植并能正常开花结果。     

大麻染色体制片技术的比较研究

以大麻种子根尖和雄花花蕾为材料,采用常规压片法和去壁低渗法对大麻染色体进行观察.结果表明,去壁低渗法较常规压片法更易获得分散细胞,且染色体制片背景清晰;对大麻根尖有丝分裂不同时期进行观察,在种子发芽46h时取材,染色体中期分裂相最多;染色体2n=20,38,40,80等不同倍性的大麻染色体细胞均有存在.     

火麻仁种质资源调查研究

大麻是药材火麻仁的主要植物基原,在我国栽培历史悠久,形成了众多珍贵的农家品种。但近年来由于产业结构调整,我国大麻种植面积锐减,资源分布状况发生了巨变,情况不明。笔者通过对全国各主要大麻产区进行资源调查发现,现今野生大麻资源已经很少,仅在新疆、云南和山东还有少量分布;种植规模较大的有安徽、云南、甘肃、黑龙江、内蒙古、广西、山西、四川、河南等省区;宁夏、陕西、河北、湖北、湖南、山东等省区有零星种植;东部沿海地区几乎没有。因此,建立药用火麻仁专用大麻种质资源库和园圃,对其进行保护性开发利用,势在必行。应对各地的大麻地方品种种子的药性加以筛选,确定产区,确保火麻仁药材的有效性和安全性,从而引导正确用药。     

高原特色植物大麻提取物抑草活性初探

[目的]杂草野燕麦是危害作物产量及质量的主要杂草之一,为高效的防治杂草野燕麦,探究了高原特色植物大麻不同部位(全株、根、茎、叶和种子)甲醇提取物对杂草野燕麦的抑草活性.[方法]采用萃取法得到大麻不同部位提取物,用种子萌发法处理供试种子,研究10.000,5.000,2.500,1.250,0.625,0.313 mg/mL质量浓度下大麻不同部位提取物对野燕麦种子发芽率及幼苗芽长、根长、鲜质量、干质量的影响,并对小麦种子萌发及幼苗生长进行安全性分析.[结果]大麻不同部位提取物对野燕麦种子的萌发呈"低促高抑"趋势,大麻根、茎、叶的粗提物为0.313～1.250 mg/mL时,对野燕麦种子芽长生长表现出促进作用,在高质量浓度2.500～10.000 mg/mL时,呈抑制作用;大麻全株、根、茎、叶、种子的粗提物在0.313 mg/mL时,对野燕麦种子根长生长呈促进作用,在10.000 mg/mL时均表现为显著抑制作用.大麻不同部位甲醇提取物在不同浓度下对野燕麦幼苗根长、芽长抑制作用强弱不同,由强到弱依次为种子浸提液、全株浸提液、茎浸提液、根浸提液和叶浸提液,其中大麻种子提取物在质量浓度为0.313～2.500 mg/mL时,对野燕麦种子萌发和幼苗生长表现抑制作用,且对小麦种子生长无影响.[结论]大麻不同部位提取物均含除草的活性物质,大麻种子可能是抑草活性物质产生的主要场所,为大麻在植物源除草剂中的开发利用提供科学依据,其释放的活性物质的具体成分及其相关机制尚待进一步研究.     

利用RAPD建立快速鉴定哈茨木霉的SCAR分子标记

在前期形态学分类及大量RAPD分析的基础上,选取在RAPD扩增45号哈茨木霉菌株获得的1条特异性片段,将其成功转化为1个稳定的SCAR标记.结果表明,该SCAR分子标记具有种的特异性,可将哈茨木霉属与其他木霉属分开.利用该标记对供试的45个木霉菌菌株进行PCR特异性扩增时,哈茨木霉菌菌株均能扩增出1条779 bp的DNA条带,不属于哈茨木霉的菌株则无扩增产物.     

大麻花粉母细胞减数分裂染色体行为观察

对大麻减数分裂进行了观察,结果表明:大麻减数分裂进程有一定的规律,与植株形态、花蕾大小、花萼形态和花药色泽有密切关系;供试材料减数分裂染色体行为表现正常,胞质分裂为同时型;大麻减数分裂进程上存在差异,不同植株以及同一植株的不同花蕾花粉母细胞减数分裂时期表现不同步性,甚至同一花药的不同细胞也存在差异。