贵州小香羊生长激素基因的PCR-RFLP多态性分析

为给贵州小香羊品种遗传资源的合理开发利用及进一步选育提供科学依据,同时为更全面地了解其种质特性提供基础资料,利用PCR-RFLP技术对67只贵州小香羊生长激素基因外显子1到内含子2序列、外显子3到外显子5序列分别进行Hae Ⅲ和Fok Ⅰ内切酶酶切位点多态性检测.结果表明,所扩增的生长激素基因外显子1到内含子2序列存在Hae Ⅲ酶切位点多态性,并表现为2种基因型AA和AB,基因频率分别为0.73和0.27,等位基因A的频率(0.87)高于等位基因B(0.13);外显子3到外显予5序列中未检测到Fok Ⅰ酶切位点多态性.     

贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征

为了摸索贵州矮马生长发育的调控机制,探明贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征,以4～5龄的贵州矮马和7～8龄的新疆伊犁马为研究对象,采用直接测序法从两种马基因组中克隆了生长激素(GH)基因5’侧翼区的DNA序列,并进行生物信息学分析。结果表明:1)从基因组中克隆的711bp片段为GH基因5’侧翼区序列;2)两个马品种的GH基因5’侧翼区中都存在TATA box、CAATbox、GC box和Octamer位点等真核生物启动子结构;3)从伊犁马GH基因5’侧翼区中检测到1个位于30bp处的突变位点发生了G→C颠换,由此新增了1个转录因子upstream stimulatory factor(USF)结合位点;4)从贵州矮马和伊犁马GH基因的5’侧翼区序列中发现了MZF1、CdxA、Nkx-2、AML-1a和c-Myc等19种共58个转录因子的结合位点。结论:克隆的711bp基因序列中存在大量的转录调控元件。     

贵州小香羊ESR基因外显子1和4的多态性

为贵州小香羊的产羔数标记辅助选择提供科学依据,利用PCR-SSCP分析了贵州小香羊雌激素受体(estrogen receptor,ESR)基因外显子1和4的多态性。结果表明:贵州小香羊ESR基因外显子1和4的SSCP均呈现一种带型,命名为AA基因型(野生型),不存在多态性。贵州小香羊ESR基因外显子1和4序列的保守性高,该基因序列与贵州小香羊繁殖力的相关性有待进一步研究。     

贵州小香羊FSH-β基因部分序列的RFLP多态性

为寻找与小香羊繁殖力相关的分子标记提供基础数据和科学依据,以贵州小香羊为试验材料,颈静脉采血后,提取血液全基因组DNA,根据NCBI Gene Bank山羊FSH-β基因序列(S64745.1)设计引物,采用限制性内切酶片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)方法对FSH-β基因内含子1与内含子2的序列进行多态性检测。结果表明:在两段特异性扩增产物中存在限制性酶切位点,不存在RFLP多态性。     

贵州小香羊MSTN基因内含子2和外显子3的多态性

为贵州小香羊选育及进一步研究MSTN基因与贵州小香羊生长性状的相关性提供理论依据,采用PCR-RFLP方法对67只贵州小香羊MSTN基因内含子2和外显子3进行了多态性分析。结果表明,所扩增内含子2中存在Bsp1286I酶切多态位点,杂合型(AB)为优势基因型,无纯合野生型(AA)和纯合突变型(BB);所扩增内含子2和外显子3中存在BstBI酶切多态位点,杂合型(CD)为优势基因型,纯合野生型(CC)和纯合突变型(DD)为非优势基因型,D等位基因为优势基因,且含有2个TatI正常酶切位点,但不存在多态性,不存在BsmFI酶切位点。     

贵州小香羊FSHβ基因第2外显子SSCP多态性分析

为寻找与贵州小香羊繁殖力相关的分子标记提供基础数据,采用单链构象多态(SSCP)方法对在生殖中起重要作用的FSHβ基因外显子2的序列进行多态性检测,并对具有SSCP多态性的DNA片段进行测序分析。结果表明,在该特异性扩增产物中存在基因多态性,在94bp处检测到1个多态位点,该位点发生了G→A突变,出现3种基因型(AA、AB和BB)并导致编码的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸,A等位基因频率为62.3%,B等位基因频率为37.7%。     

黔东南小香羊与贵州原有其它山羊品种的线粒体DNA多态性比较

ａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＤｒａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＳｍａⅠ、ＳｔｕⅠ、ＸｈｏⅠ１５种识别６碱基的限制性内切酶对黔东南小得羊和贵州原３个地方山头品种的９３只个体的ｍｔＤＮＡ进行分析表明,ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ和ＳａｌⅠ３种酶表现多态性;共检出１８种限制性多态型,归纳得到３种单倍型,以单倍型Ⅰ和Ⅱ为基本单倍型。根据此２种基本单     

香猪生长激素基因不同基因型对生长性能的影响

利用PCR-RFLPs技术,检测香猪生长激素基因ApaI酶切位点多态性,并分析不同基因型对个体初生重、2月龄体重、4月龄体重、平均日增重、4月龄体长和4月龄胸围等生长性能的影响。结果表明,香猪生长激素基因ApaI酶切后产生3种基因型和2种等位基因,AB基因型和AA基因型香猪的4月龄体重、0￣4月龄平均日增重均极显著地低于BB基因型香猪(P<0.01),4月龄体长也显著低于BB基因型香猪(P<0.05),提示AB和AA基因型可能是香猪矮小性的有利基因型。     

贵州小香乌鸡血浆同工酶的遗传多态性

为揭示贵州小香乌鸡血浆同工酶遗传特点，采用连续的聚丙烯酰胺凝胶水平式电泳(PAGE)技术分析了80份贵州小香乌鸡血浆中的淀粉酶(Amy-1、Amy-2)、碱性磷酸酶(Akp-1、Akp-2)、酯酶-1(Es-1)同工酶的遗传多态性，发现除Akp-2座位呈单态外，其余4个座位均有多态性，多态座位百分比和平均杂合度分别为P=0.8000、H=0.2778。对有关座位基因频率进行计算发现小香乌鸡akp-1、Akp-2°、Amy-2     

雷山小香羊促黄体素β亚基基因Sph Ⅰ酶切多态性分析

为了给雷山小香羊品种遗传资源的合理利用及进一步选育提供科学依据,同时为更全面地了解其种质特性提供基础性资料,利用PCR-RFLP技术对67只雷山小香羊促黄体素β亚基基因进行了Sph Ⅰ内切酶酶切位点多态性分析.结果表明,所扩增的促黄体素β亚基基因序列中仅有1个SphⅠ酶切位点,且不具有多态性.     

绍兴鸭生长激素基因多态性与生长性能关联性分析

以绍兴鸭为材料,选择与生长发育密切相关的候选生长激素(growth hormone,GH)基因,通过直接测序方法扫描其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,并分析其与生长性能的关联性.结果表明:在GH基因的2 514AG和2 691CT处检测到2个SNP位点,且2个基因座均处于Hardy-Weinberg平衡状态。最小二乘法分析表明,GH基因(2 691CT)TT基因型个体的6周龄体质量、8周龄体质量、12周龄龙骨长、53周龄胸宽显著高于CT基因型个体(P0.05);TT基因型53周龄胸肌质量、腹脂质量、腹脂率显著高于CT和CC基因型个体(P0.05)。研究为在本品种选育中监测绍兴鸭公鸭的生长发育和充分利用淘汰种公鸭肉用价值提供了一定的参考材料,同时从分子水平上丰富了绍兴鸭遗传信息。     

贵州黑山羊促黄体素β基因多态性及其与产羔数的关系

通过对贵州黑山羊LHβ基因序列进行分析,研究贵州黑山羊LHβ基因的多态性及其与产仔数问的关系.结果表明,在贵州黑山羊30只母羊的LHβ基因832 bp核苷酸系列中,共发现2个变异位点,分别位于138 bp和240 bp处,均为同义变异,其中240 bp处碱基由C变成T,且变异前后的平均产仔数相同,而在138 bp处的碱基由G变成C,形成AA和AB 2种基因型,AB基因型的羊比AA基因型的平均产仔数多产1.02只,且差异显著(P<0.01).说明,LHβ基因138 bp住点的多态性与贵州黑山羊繁殖性能之间可能存在相关性.     

欧拉型藏羊GH基因5′端侧翼序列多态性与生长性状的关联分析

采用PCR-SSCP方法,检测了126只欧拉型藏羊GH基因5′端侧翼序列的遗传多态性,并与生长性状进行关联分析.结果表明:GH基因在5′端侧翼序列存在2个等位基因3种基因型;χ2检验表明,该群体在这一位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05),多态信息含量为0.152 2,属于低度多态(PIC0.25).与藏绵羊的基因序列(GenBank登录号:EF077162)相比,B等位基因在86bp、87bp处分别发生T→C和G→A的突变.关联分析表明:欧拉型藏羊BB基因型个体的体长、体高显著高于AA型和AB型(P0.05),不同基因型之间体重、胸深、胸宽、管围差异均不显著.     

榕江小香羊GnRH基因多态性及其与繁殖性状关联性分析

为了探讨Gn RH基因SNP与榕江小香羊繁殖性状关联性,试验以榕江小香羊为研究对象,采用DNA池法及PCR-SSCP技术检测Gn RH基因单核苷酸多态性。结果表明,榕江小香羊Gn RH基因内含子3检测到1个SNP位点T-68G,该位点表现为3种基因型,分别命名为TT、TG和GG。基因型与繁殖性状关联分析显示,榕江小香羊GG基因型个体的产羔数显著高于TT和TG基因型个体(P0.05)。研究结果提示Gn RH基因可能是影响山羊产羔数的主效基因或与主效基因连锁,T-68G位点可望作为提高山羊个体繁殖性能的分子遗传标记。     

甘南藏羊GH基因第4外显子多态性与肉用性能的相关性分析

为探索GH基因与绵羊肉用性能的相关性,利用PCR-SSCP方法,对甘肃甘南‘欧拉型’、‘甘加型’和‘乔科型’藏羊(共154只)GH基因第4外显子进行了多态性检测,并从其中随机选择62只(‘欧拉羊’22只、‘甘加羊’22只、‘乔科羊’18只)进行肉品质测定及相关性分析.结果表明:甘南藏羊GH基因在第4外显子存在AA和AB 2种基因型,AB型个体在1 286bp处存在T/C的杂合;检测到的多态位点与肉用性能相关性分析表明,‘欧拉羊’的AA型个体的屠宰率和剪切力显著高于AB型个体(P<0.05),但AB型个体的背最长肌在宰后24h时的pH值显著大于AA型(P<0.05),‘甘加羊’与‘乔科羊’不同基因型各指标间均差异不显著(P>0.05).     

欧拉型藏羊Callipyge基因多态性与生长性状相关性研究

利用PCR-SSCP方法,对215只欧拉型藏羊Callipyge基因序列的多态性进行了检测,并分析了AA和AB基因型与生长性状的相关性.结果表明:Callipyge基因存在AA、BB和AB 3种基因型,其基因型频率分别为0.823 3、0.009 3和0.167 4;测序结果显示:基因多态的产生是在扩增序列的第176bp处发生了C→T的突变;χ2检验表明,该群体在这一位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05),遗传杂合度和多态信息含量分别为0.168 7和0.154 5.对生长性状(体重、胸围和胸深)的相关性分析表明:AA和AB 2个基因型个体之间生长性状的差异不显著,但AB型有大于AA型的趋势.     

猞猁GH基因部分序列及其5‘端调控区的克隆与分析

根据已报道的哺乳动物GH基因序列设计一对引物，利用PCR技术直接扩增猞猁GH基因部分序列和5‘端调控区序列，将PCR产物克隆到质粒pUC19的Hinc Ⅱ位点，重组子经Hind Ⅲ/EcoⅠ双酶切鉴定和序列分析，扩增片段长度为783bp。测序结果与其它报道的哺乳动物GH基因对应片段比较，5‘端侧翼序列和第一外显子高度保守，第一内含子和部分第二内含分子存在89％同源性，且第二个外显子中突变多发生在密码子的兼并位点上。PCR结果和序列分析表明，GH基因在猞猁基因组中为单基因。     

猪神经元蛋白3.1基因3'侧翼区多聚腺苷酸数目多态性及其与肉质性状的关系

选取54头莱芜猪和40头鲁莱黑猪,宰后测定肉质性状,利用聚合酶链反应及单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)技术检测其神经元蛋白3.1(neuronal protein 3.1,P311)基因3'侧翼区2个多聚腺苷酸(poly A)结构的长度多态性,测序确定连续腺苷酸的数目,并与肉质性状进行关联分析,以期发现有效多态位点.结果表明:1)在莱芜猪和鲁莱黑猪中共检测出2个连续腺苷酸数目的多态位点poly A-L1和poly A-L2,两者的poly A数目分别为18、15和15、12,2个位点的3种基因型分别记为poly A-L1位点的MM型、NN型和MN型,以及poly A-L2位点的BB型、DD型和BD型;这2个多态位点在莱芜猪和鲁莱黑猪群体中均处于哈代-温伯格平衡(P0.05),其多态性在2个猪种间的分布差异在统计学上均不显著.2)莱芜猪poly A-L1位点的3种基因型之间在肉质性状上均未表现出统计学上的显著差异,但MN型个体各项肉质性状普遍优于2个纯合型,肉质较好,鲁莱黑猪中的结果与此相同.3)莱芜猪poly A-L2位点的3种基因型之间在肉质性状上均未表现出统计学上的显著差异,但鲁莱黑猪在该位点处的失水率和烹饪损失指标在统计学上差异显著,其中DD型个体的失水率显著高于BD型个体,BB型和DD型个体的烹饪损失显著高于BD型,其余各指标的基因型间在统计学上差异不显著.总之,在这2个位点处普遍表现为杂合型的肉质性状优于纯合型,生产中应重视2个纯合型个体间的杂交利用,以产生更多肉质优良的杂合型个体.     

黔东南小香羊GDF9基因遗传变异分析

采用直接测序法检测GDF9基因在黔东南小香羊群体中的单核苷酸多态性。结果表明：在GDF9基因外显子2的550位碱基处发生了突变（A→C）并导致组氨酸突变为脯氨酸;试验检测到AA型、Aa型和aa型3种基因型;A等位基因频率为0．6667,a等位基因频率为0．3334。     

贵州黑山羊GDF9基因外显子2的多态性分析

通过对贵州黑山羊GDF9基因第二外显子进行PCR、双向测序、比对,以检测研究其遗传多态性,结果表明：在所有检测样本中均未发现GDF9基因的FecGH突变;仅有2只高繁殖力（3羔以上/胎）母羊在767位点发生了C→T的变异,均为杂合体AB型,导致脯氨酸突变为亮氨酸,突变的发生率为14.29%,而在低繁殖力母羊中均未发现该突变,该突变可能与贵州白山羊的高繁殖力有关。