猪、犬旋毛虫成虫免疫原性试验

旋毛虫病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病 ,各国学者对旋毛虫免疫学进行了大量的研究。现已证实旋毛虫在黑龙江省有两个隔离种 :猪旋毛虫和犬旋毛虫。然而它们的免疫学研究报道较少 ,隔离种之间的交叉免疫方面的研究尚属空白 ,所以开展此项研究对免疫学、分类学的深入研究具有重要意义。1　材料和方法1.1　材料1.1.1　旋毛虫虫种　猪旋毛虫 ,来自黑龙江省海伦县猪体内 ,在小鼠中继 3 5代 ,国际认证为旋毛形线虫 (Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａｓｐｉ ｒａｌｉｓ) ,编号ＩＳＳ5 3 3 ;犬旋毛虫来自黑龙江省五常县犬体内 ,在小鼠中继 3 5代 ,国际认…     

东北地区4株猪、犬旋毛虫间及与国际标准虫株间的杂交试

为了给中国旋毛虫虫株的分类提供依据,将分离自中国东北地区的4株猪、犬源旋毛虫虫株(猪2,犬2)分别接种于小鼠,按常规分离出肌幼虫,纯化后,设8个杂交试验组,将每2个虫株的雌、雄幼虫体各5条混合,以食管灌注法接种于小鼠,42 d后扑杀,消化、集虫、计数回收肌幼虫数.同法进行了哈尔滨猪株、犬株与国际标准虫株Trichinella spiralis(T.s)、T.nativa(T.na)之间的杂交试验.结果:猪株间、犬株间杂交结果与对照无差异(P>0.05),而猪、犬株间杂交结果与对照差异极显著(P<0.01);哈尔滨猪株与T.s、犬株与T.na杂交结果与对照无差异(P>0.05),而猪株与T.na、犬株与T.s杂交结果与T.s对照差异极显著(P<0.01),表明哈尔滨猪源旋毛虫为T.s,犬源旋毛虫为T.na.     

各隔离株旋毛虫感染性的研究

以旋毛虫国际标准种 :旋毛形线虫(Trichinella spiralis)和本地毛形线虫(Trichinella nativa )为对照 ,对黑龙江省猪、犬旋毛虫对大、小鼠和猪的感染性进行了比较研究。结果表明 :4个旋毛虫隔离株均对大鼠不易感 ,但相对犬旋毛虫和 T.nativa而言 ,猪旋毛虫和 T.spiralis对大鼠的感染性较高 (P <0 .0 1)。猪旋毛虫、 T.spiralis、犬旋毛虫、T.nativa在大鼠体内的繁殖力指数 (RCI)分别为 (35 .0 2± 8.37)、(32 .10± 7.77)和 (2 .90±1.71)、(2 .6 6± 2 .19)。 4个旋毛虫隔离株对小鼠和猪的感染性存在着明显差异 ,猪旋毛虫和T.spiralis对小鼠和猪的感染性较强 ,其在小鼠体内 RCI分别为 (137.4 1± 7.80 )和 (15 9.86±7.4 7) ,在猪体内的 RCI分别是 (385 .6 8±4 1.5 1)和 (30 0 .5 5± 12 .4 5 ) ;而犬旋毛虫和T.nativa对小鼠和猪的易感性差 ,其在小鼠体内 RCI分别是 (6 4.98± 5 .0 5 )和 (5 8.15±4 .6 9) ,在猪体内的 RCI分别为 (0 .0 6 4± 0 .0 31)和 (0 .0 33± 0 .0 33)。研究结果揭示 ,黑龙江省猪旋毛虫相当于旋毛形线虫 (Trichinellaspiralis) ,犬旋毛虫相当于本地毛形线虫(Trichinella nativa )     

旋毛虫各隔离种对猪的感染性和低温耐受性的研究

用消化法所得的猪旋毛虫、犬旋毛虫、旋毛形线虫（Trichinella spiralis）和本地毛形线虫（Trichinella nati-va）分别感染猪和小鼠,以观察其感染性,同时在-22℃和-32℃条件下对其进行冷冻试验。结果表明:4个旋毛虫隔离种对猪的感染性存在着明显差异,猪旋毛虫和T.spiralis对猪易感,其繁殖力指数（RCI）分别为385.68±41.51和300.55±12.45;而犬旋毛虫和T.nativa对猪不易感,RCI分别是0.064±0.031和0.033±0.033。猪旋毛虫和旋毛形线虫不耐低温,在猪体内-32℃、24 h,-22℃、72 h;在小鼠体内-32℃、12 h即全部死亡。而犬旋毛虫和本地毛形线虫对低温抵抗力较强,在猪体内-32℃、72h,-22℃、192 h;在小鼠体内-32℃、48 h才失去感染性。结果揭示:黑龙江省猪旋毛虫相当于旋毛形线虫,犬旋毛虫相当于本地毛形线虫;犬旋毛虫和T.nativa很难通过猪的感染而对人体健康构成威胁。     

黑龙江省猪、犬旋毛虫隔离种对兔的感染性研究

本文以旋毛虫国际标准种:旋毛形线虫(Trichinella spiralis)和本地毛形线虫(Trichinella nativa)为对照,从生物学方面对黑龙江省猪、犬旋毛虫病进行了分类研究,研究结果表明,4个旋毛虫隔离种对兔的感染性存在着明显差异,猪旋毛虫和T.spiralis对兔的感染性较强,其在兔体内的繁殖力指数(RCI)分别为62.29和143.05;而犬旋毛虫和T.nativa对兔易感性差,其在兔体内的RCI分别是10.65和12.19。     

猪、犬旋毛虫交叉免疫原性的研究

通过在小鼠体内感染猪、犬旋毛虫肌幼虫50条，再用同源免疫和交叉免疫方法攻击感染旋毛虫肌幼虫200条，来检测其肌幼虫的减虫率。试验得到猪旋毛同源免疫的减虫率为87.47%，对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率是86.47%，犬旋毛虫同源免疫的减虫率为83.70%，其对猪旋毛虫的交叉免疫是83.46%。试验表明：旋毛虫肌幼虫自然免疫具有较好的免疫保护作用，交叉免疫的保护率低于同源免疫。     

东北地区4株猪,犬旋毛虫间及与国际标准虫株间的杂交试验

为了给中国旋毛虫虫株的分类提供依据，将分离自中国东北地区的４株猪，犬源旋毛虫虫株分别接种于小鼠，按常规分离出肌幼虫，纯化后，设８个杂交试验组，将每２个虫株的雌，雄幼虫体各５条混合，以食管灌注法接种于小鼠，４２ｄ后扑杀，消化，集虫，计数回收肌幼虫数。同法进行了哈尔滨猪株，犬株与国际标准虫株Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ（Ｔ．ｓ）．Ｔ．ｎａｔｉｖａ（Ｔ．ｎａ）之间的杂交试验。     

旋毛虫各隔离株某些生物学特性的研究

以旋毛虫国际标准种:旋毛形线虫(Trichinellaspiralis)和本地毛形线虫(Trichinellanativa)为对照,从生物学方面对黑龙江省猪、犬旋毛虫进行了比较研究,结果表明:猪旋毛虫和T.spiralis在小鼠膈肌中出现保姆细胞(Nursecell,NC)的时间为感染后第16和18天,第38和36天所有肌型幼虫都形成了NC,而犬旋毛虫和T.nativa为感染后20和22天,第32天完全形成;猪旋毛虫、T.spiralis、犬旋毛虫、T.nativa成虫肠期持续时间分别为22,20,16,14天;4个旋毛虫隔离株成虫均主要位于小肠的前、中段,但犬旋毛虫、T.nativa所占比例明显高于猪旋毛虫、T.spiralis,差异极显著(P<0.01)。研究结果揭示,黑龙江省猪旋毛虫相当于旋毛形线虫(Trichinellaspiralis),犬旋毛虫相当于本地毛形线虫(Trichinellanativa)。     

猪、犬旋毛虫成虫免疫原性试验

通过提取猪、犬旋毛虫成虫抗原，制备成虫油佐剂免疫原，在小鼠体内进行同源特异性免疫试验和交叉免疫试验。试验得到猪旋毛虫成虫抗原同源免疫减虫率为５５．８０％，其对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率是３５．１１％；犬旋毛虫成虫抗原同源免疫的减虫率为３９．００％，其对猪旋毛虫的交叉免疫减虫率是２４．９６％。试验结果揭示，猪、犬旋毛虫成虫具有一定的免疫原性，其交叉免疫减虫率低于同源特异性免疫。猪旋毛虫成虫抗原对犬旋毛虫的交叉免疫与犬旋毛虫自身的同源特异性免疫差异不显著。     

中国旋毛虫形态度量学分析

旋毛形线虫（Trichinella,spiralisowen1855）简称旋毛虫。其种属的分类学问题,较为复杂[1,2]。目前尚无统一的分类标准。形态是物种的重要的外部特征,也是物种分类的重要参数[3]。本文收集了中国八个地区,来源于不同宿主的旋毛虫虫株,进行了形态度量学分析,以期为中国旋毛虫种株的分类提供依据。1材料和方法1．1旋毛虫虫株的来源哈尔滨海伦猪株、哈尔滨五常犬株（来源于哈尔滨东北农学院寄生虫教研室）、长春犬株、沈阳猪株、云南大理猪株、湖北十堰猪株（来源于中国医科大学寄生虫教研室）、西安猪株（来源于兰州兽医研究所）、河…     

旋毛虫各隔离种对小鼠的感染性研究

比较研究了黑龙江省猪、犬旋毛虫及国际标准虫种旋毛形线虫(Trichinella spiralis)和本地毛形线虫(Trichinella nativa)对小鼠的感染性异同。结果表明，四者对小鼠的感染力存在着显著差异，猪旋毛虫和旋毛形线虫在小鼠体内的繁殖力指数(RCI)分别为121.01±7.80和149.86±7.47；而犬旋毛虫和本地毛形线虫的RCI分别为60.98±5.05和55.15±4.69。由实验结果可认为黑龙江省的猪旋毛虫相当于旋毛形线虫，而犬旋毛虫相当于本地毛形线虫。     

各旋毛虫隔种对猪的感染性试验

用消化法所得的猪旋毛虫、犬旋毛虫、旋毛形线虫 (Trichinellaspiralis)和本地毛形线虫 (Trichinellanativa)分别感染健康猪。结果表明 :4个旋毛虫隔离种对猪的感染性存在着明显差异 ,猪旋毛虫和T .spiralis对猪易感 ,其繁殖力指数 (RCI)分别为 385 .6 8± 41.5 1和 30 0 .5 5± 12 .45 ;而犬旋毛虫和T .nativa对猪不易感 ,RCI分别是 0 .0 6 4± 0 .0 31和 0 .0 33± 0 .0 33。结果揭示黑龙江省猪旋毛虫相当于T .spiralis,犬旋毛虫相当于T .nativa ;犬旋毛虫和T .nativa很难通过猪的感染而对人体健康构成威胁。     

旋毛虫各隔离种成虫在小鼠肠道中的分布

以旋毛虫国际标准种旋毛形线虫（Trichinella spiralis）和本地毛形线虫（Trichinella nativa）为对照，对黑龙江省猪、旋毛虫成虫在小鼠肠道中的分布进行了比较研究，研究结果表明：分别有76.3%，80.67%和86.18%，88.30%的猪旋毛虫、T.spiralis和旋毛虫、T.nativa分布于小肠的前、中段。说明猪旋毛虫、T.spiralis、犬旋毛虫、T.nativa的成虫均主要分布于小肠的前、中段，但犬旋毛虫、T.nativa、所占比例明显高于猪旋毛虫、T.spiralis，差异极显著（P＜0.01）。研究结果揭示，黑龙江省猪旋毛虫相当于旋毛形线虫（Trichinella spiralis），犬旋毛虫相当于本地毛形线虫（Trichinella.native）。     

黑龙江省猪,犬,猫旋毛虫在小鼠体内的分布

以对黑龙江省猪、犬、猫旋毛虫在小鼠体内的分布及感染性做了比较研究。结泉表明:猪、犬、猫旋毛虫在小鼠体内的分布均以膈肌、咬肌、胸肌为最多,而以舌肌、腰肌较少。猪旋毛虫对小鼠的感染性比犬、猫旋毛虫易感,差异极显著(P<0.01);犬、猫旋毛虫对小鼠的感染性无明显差异(P<0.05)。猪、犬、猫旋毛虫在小鼠体内的繁殖力指数(RCI)分别为:157.41±135.20;79.86±37.28和60.30±41.45。     

旋毛虫各隔离种杂交实验

种间杂交是研究旋毛虫分类的重要方法.旋毛虫各隔离种之间的最大差异是由杂交试验所证实的,生殖隔离是命名虫种的最重要的依据[1].为了搞清我国旋毛虫的分类问题,国内学者对此做了一些工作,但结果不尽一致[2,3].本文用单对和多对杂交试验对旋毛虫各隔离种进行了比较研究,现将结果报告如下,以期为虫种分类提供理论依据.     

旋毛虫各隔离种雌虫体外产新生幼虫能力的研究

本试验对旋毛虫各隔离种雌虫体外产新生幼虫能力进行了研究.结果显示,猪旋毛虫和旋毛形线虫(Trichinellaspiralis)雌虫体外培养24小时,平均产新生幼虫数分别为66.00±7.34和76.20±7.57,而犬旋毛虫和本地毛形线虫(Trichinellanatiua)分别是28.80±4.30和22.00±3.22,前者在雌虫体外产幼虫能力上明显高于后者.研究结果表明,黑龙江猪旋毛虫相当于旋毛形线虫,犬旋毛虫相当于本地毛形线虫.     

旋毛虫各隔离种对低温耐受性的研究

用来自哈尔滨地区猪、犬体内的旋毛虫和国际标准虫株旋毛形线虫（Trichinella spiralis)、本地毛形线虫（Trichinella nativa)同时感染猪，在－22℃和－32℃条件下对感染了各旋毛虫的猪肉进行冷冻性试验，结果表明：哈尔滨地区猪旋毛虫和T.spiralis不耐低温，－32℃冷冻12h，－22℃冷冻48h全部死亡；而犬旋毛和T.nativa对低温抵抗力较强，－32℃、72h，－22℃、168h才全部死亡。     

猪、犬旋毛虫新生蚴免疫原性试验

将猪、犬旋毛虫新生蚴制备成免疫原,在小鼠体内进行免疫试验,免疫１周后攻击感染肌幼虫,３５日蝗检查肌幼虫的减虫率。结果表明,猪旋毛虫新生蚴的同源免疫和其对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率分别为８３．１１％和７９．３９％,犬旋毛虫新生蚴的为８１．３７％和８０．６９％。结果揭示,旋毛虫新生蚴具有良好的免疫原性,同源免疫的减虫率比交叉免疫的高,猪旋毛虫新生蚴抗原对犬旋毛虫的交叉免疫与犬旋毛虫新生蚴抗原的同源免疫在减虫率上差异不显著。     

旋毛虫各隔离种成虫肠期持续时间的研究

以旋毛虫国际标准种：旋毛形线虫（Trichinella spiralis）和本地毛形线虫（Trichiella nativa）为对照，对黑龙江省猪、犬旋毛虫成虫肠期持续时间了比较研究，研究结果表明：4个旋毛虫隔离种均在感染后的6－8d成虫回收率最高；猪旋毛虫和Txspiralis成虫肠期持续时间分别为22d和20d，犬旋毛虫和T.nativa分别为16d和14d。研究结果揭示，黑龙江省猪旋毛虫相当于旋毛形线虫（Trichinella spiralis），犬旋毛虫相当于本地毛形线虫（Trichinella nativa）。     

黑龙江省猪犬猫旋毛虫在小鼠体内的分布

本文比较了黑龙江省猪、犬、猫旋毛虫在小鼠体内的分布及其感染性做了比较研究。结果表明：猪、犬、猫旋毛虫在小鼠体内的分布均以膈肌、咬肌、胸肌为最多，而以舌肌、腰肌较少。猪旋毛虫对小鼠的感染性比犬、猫旋毛虫易感，差异极显著（Ｐ＜０．０１）；犬、猫旋毛虫对小鼠的感染性无明显差异（Ｐ＞０．０５）。猪、犬、猫旋毛虫在小鼠的繁殖力指数（ＲＣＩ）分别为：１５７．４１±１３５．２０；７９．８６±３７．２８；６０．３０±４１．４５。