柞蚕核型多角体病毒研究进展

柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi Nuclear Polyhedrosis Virus，简称ApNPV)，属杆状病毒科包含体杆状病毒亚科核型多角体病毒属，是柞蚕核型多角体病的病原。该成熟病毒包含体的断面分三层结构：最外层是致密层，次外层是多角体蛋白层，内部是病毒束。柞蚕核型多角体病毒的核酸为DNA，经限制性内切酶PstI，HindⅢ，BamH，XhoI，SalI，EcoR I和EcoR I BamH I酶解后，电泳分别形成31,25，6，15，24，5，7条谱带。柞蚕核型多角体病毒主要通过食下和体壁创伤途径感染柞蚕幼虫，不同病毒株对柞蚕的致病性存在着差异。柞蚕幼虫消化液对柞蚕核型多角体病毒有溶解、灭活作用；柞蚕幼虫中肠围食膜对柞蚕核型多角体病毒有灭活作用。柞蚕核型多角体病毒多角体在自然条件下有自然裂解现象，游离的病毒粒子在自然条件下很快失活。目前已建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统，并在分别在体内、体外表达了报告基因．     

柞蚕核型多角体病毒感染离体细胞的研究

柞蚕核型多角体病毒(Antheraea Pernyi Nuclear Polyhedrosis Virus简称ApNPV)对樗蚕蛹精细胞和草地贪夜蛾Sf9细胞的感染是非同源昆虫细胞的感染。运用昆虫细胞培养、病毒感染及电子显微镜等病毒学技术研究了ApNPV在体外培养的樗蚕蛹精巢细胞中的感染情况,初步探明了ApNPV在体外培养昆虫细胞中的形态发生过程,表明它是典型的杆状病毒复制。并用该病毒以一定浓度感染草地贪夜蛾Sf9细胞,说明ApN-PV不能在Sf9细胞中复制。     

柞蚕核型多角体病毒载体表达系统基因工程研究进展

柞蚕是一种野外饲养的经济昆虫，它以蛹滞育越冬，主要分布在我国东北部山区。我国柞蚕年产茧量６万ｔ左右，占世界柞蚕产量的９０％以上。柞蚕核型多角体病毒（ＡｐＮＰＶ）属杆状病毒科Ａ亚组，是柞蚕脓病的病原体，对柞蚕蛹十分敏感。建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统，以柞蚕蛹为宿主昆虫进行外源基因的大量表达生产，具有成本低、安全、易管理，可工业化生产等特点。本文概述作蚕核型多角体病毒载体基因工程研究的进展，其中     

柞蚕核型多角体病毒基因组编码的VmiRNA筛选及功能分析

[目的]VmiRNA不仅可以控制自身基因,还可调节宿主的稳定表达,研究VmiRNA的功能有助于从分子水平说明核型多角体病毒与柞蚕的寄生关系,从而改进对病毒的防控措施。[方法]利用生物信息学及实时定量PCR等分子生物学相关技术,对柞蚕核型多角体病毒编码的miRNA及其作用的靶标基因进行研究。[结果]经预测和筛选得到了Ap NPV编码的miRNA MD217,与其有关的宿主靶基因14种,主要参与细胞组成、生化过程以及分子功能等途径,涉及到生物体细胞内一些催化、免疫反应等过程;实时定量PCR结果表明,MD217在病毒感染后上调表达,脂肪体组织内的靶基因MAPKK7表达水平与MD217的表达呈正相关。[结论]miRNA MD217在病毒感染后诱导表达,推测很可能降低了宿主免疫系统的防御能力,并同时影响靶基因MAPKK7的功能表达,从而避免了在免疫应答过程中的免疫清除。     

柞蚕核型多角体病毒ptp-2基因克隆及表达

    为研究柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)ptp-2基因特性,根据ApNPV PstⅠ-C片段核酸序列,设计引物克隆了ApNPV ptp-2基因;将ptp-2基因亚克隆至原核表达载体pQE-30,构建重组质粒pQE-ptp-2,并在大肠杆菌M15中进行诱导表达,表达量达菌体总蛋白的38.7%,经His标签杂交鉴定证明表达产物为His融合蛋白.以原核表达的His-PTP-2蛋白作为抗原,制作兔多克隆抗血清,Western blot分析表明:PTP-2蛋白不参与ApNPV包涵体的结构组成.     

柞蚕核型多角体病毒DNA对樗蚕蛹精细胞系的转染试验

柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)与樗蚕蛹精细胞虽非同源,但相互敏感.有关ApNPV-DNA转染樗蚕蛹精细胞试验国内外尚无报道.本文利用脂质体介导和磷酸钙沉淀两种转染方法进行ApNPV-DNA转染樗蚕蛹精巢细胞试验,研究表明,脂质体介导法比磷酸钙沉淀法转染效率高20倍,此项研究对柞蚕杆状病毒载体表达系统的应用具有重要意义.     

柞蚕核型多角体病毒sod基因核心序列的克隆与分析

根据多种鳞翅目昆虫NPV sod基因的保守区序列设计引物,克隆了柞蚕NPV的sod基因中300个核苷酸的核心区序列.通过同源性比较发现,柞蚕NPV的sod基因与云杉卷叶蛾(Choristioneure fumiferana)和黄杉毒蛾(Orgyia pseudotsugata)NPV的sod基因的同源性较高,分别为80.1%和76.6%,而与家蚕NPV和苜蓿尺蠖NPV的同源性相对较远.     

樗蚕组织细胞培养及对柞蚕NPV病毒的感染试验

采用细胞原代培养的方法对樗蚕〔ＰｈｉｌｏｓａｎｉａｃｙｎｔｈｉａｗａｌｋｅｒＦｌｄｒ．（Ｓａｍｉａ）〕的血球细胞、卵巢细胞、精巢细胞进行了初代及初期传代培养，樗蚕的组织细胞对柞蚕ＮＰＶ病毒十分敏感，感染率可达８０％左右     

落叶松毛虫核型多角体病毒研究初报

落叶松毛虫(Dendroljmus superans)核型多角体为不规则形或四角形,大小为1.21—2.33μm;病毒束含病毒粒子数为1或多个;病毒粒子大小为29.1—60.5nm×244.2—325.6nm。     

豆天蛾核型多角体病毒和雀纹天蛾核型多角体病毒光解酶基因的功能鉴定

为研究豆天蛾核型多角体病毒(Clbi NPV)和雀纹天蛾核型多角体病毒(Thja NPV)的光解酶是否具有修复由紫外线辐射引起的DNA损伤的功能,本试验分析了2种光解酶基因对大肠杆菌和家蚕(Bm)细胞抵御紫外线能力的影响。结果显示,来源于Thja NPV的野生型光解酶基因(Thjaphr)的表达显著提高了大肠杆菌的光修复能力,而来源于Clbi NPV的突变型光解酶基因(Clbiphr)没有光修复功能。在紫外线处理的Bm细胞中,野生型及突变型光解酶基因均没有表现出光修复活性。亚细胞定位结果显示,Thjaphr及Clbi NPV光解酶基因大的开放阅读框(Clbiphr2)定位于家蚕细胞的细胞核,小的开放阅读框(Clbiphr1)仅在细胞质中积累。     

核型多角体病毒杀虫剂的开发

本文概述了核型多角体病毒杀虫剂在害虫生物防治中的筛选、生产、产品检测及应用方面的试验程序及步骤。     

美国白蛾核型多角体病毒增殖方法

美国白蛾核型多角体病毒对其幼虫的毒杀作用具有高效、专一和安全性,同时不污染环境,不杀伤天敌,在防治美国白蛾工作中可以大面积应用。但由于目前还不能人工合成,只有依靠活体幼虫进行增殖才能获得大量病毒。根据几年实践摸索,初步形成一套简易病毒增殖方法,可进行批量生产美国白蛾核型多角体病毒,满足防治需求。     

雪毒蛾核型多角体病毒应用研究

雪毒蛾核型多角体病毒用于防治雪毒蛾,具水平传递和垂直传递特性,用量少,效果好,防效持久,可控制3年不成灾.于病毒液中加入微量DDVP,可提高雪毒蛾对病毒的感受性10培,防效更显著.     

柞蚕核型多角体病的发生与防治

介绍了柞蚕核型多角体病的病原、传染途径及发病症状,提出了综合防治措施,以期为该病的防治提供参考。