不同酶水解玉米黄浆蛋白抗氧化功能比较研究

研究不同酶对玉米黄浆蛋白水解度及水解后产物的生物活性影响,通过单酶水解及双酶同步与分步水解,对水解度及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除能力进行比较,研究玉米黄浆蛋白酶解方法与水解物的抗氧化功能的关系,筛选出最佳酶组合。结果表明:单酶水解时,碱性蛋白酶水解玉米黄浆蛋白的水解物清除自由基能力最好,清除DPPH自由基能力达71.38%;双酶分步水解的效果比双酶同步水解效果好,清除DPPH自由基能力最好在pH为7条件下进行,先加中性酶后加碱性酶的DPPH自由基清除能力强于其他加酶方法和加酶组合,清除率高达81.28%。因此选择先加中性蛋白酶再加碱性蛋白酶作为水解玉米黄浆蛋白的最佳工艺。     

家蚕丝素蛋白抗氧化肽的制备及其稳定性研究

利用碱性蛋白酶水解家蚕丝素蛋白制备抗氧化肽,考察水解pH、水解时间、加酶量、底物浓度、水解温度5个因素对水解产物DPPH自由基清除率的影响,在此基础上采用响应面试验优化水解工艺条件,并调查家蚕丝素蛋白抗氧化肽对热、酸、碱和体外肠道消化的稳定性,测定不同分子质量范围的家蚕丝素蛋白水解产物组分的抗氧化活性.结果 表明,碱性蛋白酶水解制备家蚕丝素蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为水解pH 8.69、水解时间60 min、加酶量3035 U/g、底物(丝素蛋白)质量浓度26.80 g/L、水解温度53.89℃,在此条件下制备获得的家蚕丝素蛋白抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为55.16％.家蚕丝素蛋白抗氧化肽具有良好的热稳定性;在中性环境中抗氧化活性很稳定,但在强酸和强碱环境中抗氧化活性明显降低;经体外模拟胃肠道消化后,对DPPH自由基的清除率比未消化处理对照组提高了9.43百分点.分子质量小于5 kD组分是家蚕丝素蛋白抗氧化肽的主要活性组分.研究结果为家蚕丝素蛋白功能产品的开发提供了试验依据.     

单环刺螠(Urechis unicinctus)酶解及酶解产物功能研究

采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶对单环刺螠体壁进行酶解,以水解度为指标。结果表明,三种酶中胃蛋白酶在4 h达到最高水解度38.5%。比较三种酶解产物的抗氧化、总还原力和降血糖功能,中性蛋白酶酶解5 h的产物其亚铁离子螯合力最高,可达50%;DPPH自由基清除能力最高可达51.5%,为胃蛋白酶酶解3 h的产物;胃蛋白酶酶解4 h产物的总还原力最高;胃蛋白酶酶解2 h的酶解产物其DPP-4抑制率最高,可达41.3%。本研究为单环刺螠的综合利用提供了参考。     

消减牛乳酪蛋白致敏性蛋白酶的筛选

以酪蛋白为研究对象,选取复合风味蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和中性蛋白酶共7种食品级蛋白酶,对牛乳酪蛋白进行酶解。通过牛乳过敏患者血清池,评估酶解产物致敏原性,同时结合水解产物的分子质量分布、水解度、残留表位信息等指标,筛选出最适合用于生产低致敏酪蛋白产品的蛋白酶。结果表明：在相同条件下经胰凝乳蛋白酶、复合风味蛋白酶处理后酪蛋白与特异性抗体结合能力降低程度最大,可用于后续低致敏酪蛋白制备的候选蛋白酶;结合T细胞表位预测结果,对酪蛋白水解产物进一步分析发现,酪蛋白经过胰凝乳蛋白酶酶解后,仅剩余1条大于9个氨基酸的T细胞表位肽段LHSMKEGIHAQQK。     

响应面法优化玉米黄粉抗氧化肽的制备工艺

以玉米黄粉醇溶蛋白为原料,选用碱性蛋白酶酶解制备玉米黄粉抗氧化肽,以加酶量(E/S)、p H、温度和时间作为研究对象,以酶解液对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率为评价指标,在单因素试验的基础上。采用Design-Expert软件,通过Box-Behnken进行3因素3水平分析,得到的最佳酶解条件是加酶量(E/S)为8.00%,p H为9.30,温度为52℃,酶解时间为4 h,在这个条件下,DPPH自由基清除率可达到83.06%。     

复合酶水解法提取大豆抗氧化肽的工艺优化

为提高脱脂豆粕的利用率,试验选用碱性蛋白酶与风味蛋白酶的组合从脱脂豆粕中提取大豆抗氧化肽,以加酶量(E/S)、温度、p H及时间为自变量,以酶解液对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,采用Design-Expert软件,建立DPPH自由基清除率与各因素间的二次多项式模型,确定提取大豆抗氧化肽的最佳提取条件为加酶量(E/S)5%、温度58℃、p H 10及酶解时间3 h,在此条件下,大豆抗氧化肽对DPPH自由基的清除率达到89.94%,与预测值90.69%的相对误差小。回归方程的预测值与试验值差异不显著(P0.05),说明回归模型拟合情况较好。     

复合酶水解乳清蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

以乳清蛋白为原料,采用酶法水解,分析酶解温度、pH值、底物浓度和酶底比对复合酶水解乳清蛋白的影响,通过单因素试验确定各因素的最适工艺参数,再通过正交试验及验证实验进一步确定乳清蛋白的最佳酶解条件。结果表明:根据单因素试验结果,并综合考虑水解度、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率和铁离子螯合能力4项指标的正交试验结果,最终确定乳清蛋白的最佳酶解条件为酶解温度60℃、pH 8.5、底物质量浓度2.5 g/100 mL、酶底比3.5％。以上述最佳参数为酶解条件进行验证实验的结果表明,验证实验结果与正交试验结果相符,进一步验证了本研究确定的酶解条件为最佳条件。     

酶法制备乳源活性肽的工艺研究

通过对5种蛋白酶的试验比较,确定了碱性蛋白酶作为乳蛋白的水解工具酶。并探讨了碱性蛋白酶的最佳水解条件:酶解温度50℃,pH值10.0,底物浓度10%,酶与底物浓度比5%,酶解时间为150min。水解液的苦味可通过活性炭的吸附除去。     

母乳乳清蛋白抗氧化活性肽的研究

母乳是婴幼儿的最佳食物来源,而乳清蛋白是营养和活性物质的基础,其中生物活性肽对人体健康具有重要促进作用.为研究母乳乳清蛋白抗氧化活性肽,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶4种酶制备抗氧化活性多肽,通过单因素试验和响应面分析对乳清蛋白酶解工艺进行优化.结果表明:中性蛋白酶最适于母乳乳清蛋白抗氧化肽的制备,此时的最佳工艺参数为pH 7.21、反应温度50.03℃、酶与底物比(E/S)4 486.68 U/g、酶解时间5h;影响1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率的因素大小为:酶与底物比＞温度＞pH值.利用大孔树脂、葡聚糖凝胶过滤色谱G-25、G-15分析得出组分峰Ⅰ抗氧化活性最强,其DPPH自由基清除率达到了60.31％.     

青占鱼蛋白水制备酶解鱼溶浆最佳工艺条件的研究

为研究制备酶解鱼溶浆的最佳工艺条件,实验以青占鱼蛋白水为原料,采用复合蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶进行水解,探讨酶解时间、酶解温度及酶用量对蛋白质水解的影响,并通过正交实验确定最佳酶解条件优化水解工艺。结果表明:复合蛋白酶为水解青占鱼蛋白水最适蛋白酶,最佳工艺条件为:温度50℃,酶用量0.3%(干物质),水解3 h,该条件下制备的酶解鱼溶浆酸溶蛋白含量为75.83 g/100 g(干物质),蛋白质水解效率达95.29%。     

大豆虾粉肽适宜酶解好条件的研究

为了筛选生产大豆虾粉肽的适宜蛋白酶及酶解条件,试验采用单因素试验设计,以水解度为检测指标,按酶浓度、底物浓度、pH值、酶解温度和酶解时间逐一分别对3种微生物发酵产生的酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解脱皮豆粕和虾粉混合蛋白的适宜酶解条件进行筛选.试验结果表明:酶解体系中的酶浓度、底物浓度、pH值、酶解温度和酶解时间均显著影响3种蛋白酶对脱皮豆粕和虾粉混合蛋白的酶解效果.在3种蛋白酶中,酸性蛋白酶的酶解效果最好,其次是碱性蛋白酶,中性蛋白酶的酶解效果最差.酸性蛋白酶水解脱皮豆粕和虾粉混合蛋白的适宜条件为:酶浓度为2000 U/g,底物浓度为9%,pH值3.5,酶解时间为3.5 h,温度50℃.     

碱性蛋白酶水解黄酒糟制备乳猪液体蛋白饲料研究

为提高黄酒糟可溶性蛋白含量和水解度,试验采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对黄酒糟蛋白进行适度酶解。结果表明:在相同酶活添加量条件下,经碱性蛋白酶酶解作用后可溶性蛋白含量和水解度最高。通过单因素试验和正交试验获得碱性蛋白酶水解黄酒糟蛋白的最优工艺条件:料液比为1∶6,温度为55℃,加酶量为500 U/g,pH值为9,反应时间为3 h,酶解液可溶性蛋白含量为68.38%。说明黄酒糟蛋白是优良的乳猪液体饲料的蛋白原料来源。     

响应面法优化双酶复合水解鸡蛋全液

鸡蛋营养丰富,但在其生产及运输过程中会有一定的破损,不仅浪费且污染环境。试验采用双酶复合水解工艺对鸡蛋全液进行酶解。通过单因素试验和响应面设计,研究碱性蛋白酶和中性蛋白酶对全蛋液酶解的最佳工艺。试验结果表明,碱性蛋白酶与中性蛋白酶质量比1:1,酶解时间6.67 h,料液比(蛋/水)1.13:1,加酶量1.1%,在此条件下酶解物氨基酸含量为2.171 mg/ml用碱性蛋白酶和中性蛋白酶复合水解鸡蛋全液,得到的酶解液中氨基酸含量较高,可作为饲料添加剂用于农牧业生产。     

双酶水解对脱脂牛乳致敏性的影响

以水解度、分子质量分布及酶解产物对免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)和患者血清Ig E结合能力为指标,采用双酶水解方法研究酶对脱脂牛乳体系主要蛋白致敏性的影响。结果表明：双酶一步水解E/S为3 000 U/g、碱性蛋白酶与风味蛋白酶配比为3∶1、酶解80 min条件下脱脂牛乳中主要致敏乳蛋白酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白的IgG结合能力分别显著下降74.93%、97.24%、93.46%(P<0.05);酶解破坏脱脂牛乳蛋白高级结构,使α-螺旋、β-转角结构增加,β-折叠结构减少,游离巯基含量显著增加至14.29μmol/g(P<0.05),表面疏水性增强,结构趋于松散;脱脂牛乳体系中粒子发生聚集,平均粒径显著增加至346.90 nm(P<0.05),稳定性降低;酶解产物对牛乳蛋白过敏患者血清IgE结合能力显著降低23.53%(P<0.05),综合致敏性显著下降69.60%(P<0.05)。因此双酶水解是降低脱脂牛乳致敏性的有效方法。     

脱脂柞蚕蛹蛋白用复合中性蛋白酶水解制备多肽的工艺条件优化试验

利用蛋白酶对脱脂柞蚕蛹蛋白进行酶解制备具有活性的多肽,可以提高柞蚕蛹蛋白的应用价值。为了建立适合工业化应用的脱脂柞蚕蛹蛋白的酶解工艺条件,首先采用单因素试验考察料液质量浓度、复合中性蛋白酶种类与使用浓度、酶解温度和时间4个因素对脱脂柞蚕蛹蛋白水解度的影响,得出较适合的工艺条件是:料液质量浓度60 g/L,3 g/L复合中性蛋白酶中的风味蛋白酶与蚕蛹专用复配蛋白酶按1∶1质量比混合,酶解温度55℃,酶解时间10 h。进一步采用Box-Behnken设计及响应面分析法对工艺条件进行优化,在复合中性蛋白酶质量浓度4.85 g/L、料液质量浓度41 g/L、酶解温度55℃、酶解时间10.66 h的最佳酶解条件下,脱脂柞蚕蛹蛋白的理论水解度为45.82%,实际水解度为45.75%。利用优化的酶解工艺条件制备柞蚕蛹蛋白活性肽,具有酶解效率高、稳定性好、操作简单、生产成本低的特点。     

酶法水解牛乳蛋白技术的研究

为获得易消化、低致敏的婴儿配方食品原料,采用胰蛋白酶水解牛乳蛋白,研究酶解过程中酶解时间、酶解温度、加酶量对乳蛋白水解度的影响。通过单因素试验设计方法,确定最佳酶解条件为:酶解时间40min、酶解温度40℃、加酶量1200U/g蛋白质。     

大米蛋白胃蛋白酶酶解物体外抗氧化作用的研究

本试验采用正交设计,以羟自由基清除率为评定指标,用胃蛋白酶酶解大米蛋白,旨在确定其酶解物体外抗氧化作用最佳的酶解条件。试验结果表明:当酶解温度为37℃时,影响大米蛋白胃蛋白酶酶解物抗氧化效果的因素大小排序为:pH酶浓度底物浓度酶解时间;最佳酶解条件为:pH1.4、酶浓度5%、底物浓度8%、酶解120min,此条件下酶解物的羟自由基清除率为72.78%,多肽浓度为5.49mg/mL,水解度为15.62%。     

生物酶法水解海鱼皮的研究

为了充分合理利用海鱼下脚料鱼皮,并减少环境污染,本实验改变传统的酸碱处理法,采用生物酶解法,将海鱼皮酶解成小分子肽,为制备胶原蛋白、明胶等产品做指导。选用蛋白酶作为酶解实验用酶制剂,主要有碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及其复合酶制剂,通过不同添加量比较常用指标,包括:水解度、酸溶蛋白、肽分子量的分布。结果表明,随着碱性蛋白酶添加量的增大,水解度、酸溶蛋白、肽分子量变化不明显;中性蛋白酶酶解几种指标中肽分子量分布有少许差异;木瓜蛋白酶酶解之后都是平均分子量≤1 000 Da的肽;复合酶制剂酶解之后分子量≤3 000 Da的肽占85%。本实验选取的四组酶制剂配方,其水解度都达到80%以上,碱性蛋白酶达到85%以上;酸溶蛋白的含量均在2.0%左右,差异不明显。相同成本条件下,从分子量分布来看,木瓜蛋白酶的效果最好,其次是碱性蛋白酶,再其次是中性蛋白酶,复合酶制剂效果最差。     

酶解法提取肠膜肽工艺条件的优化

试验以肝素加工废水为原料,利用水解蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶及水解-风味复合酶提取肠膜肽,以水解度表征其反应程度。研究表明,风味-水解复合酶组效果最优,最佳酶解条件为:温度50℃、pH值5.0、酶总浓度3%、风味蛋白酶:水解蛋白酶为1:1、酶解时间2h。在此条件下水解度为17.45%。     

碱性蛋白酶酶解玉米蛋白粉最佳工艺条件的研究

为了通过生物酶解获得水解度高且易于吸收的玉米小肽,研究采用正交试验方法优化了碱性蛋白酶酶解玉米蛋白的条件。结果表明:当pH值为9,酶量为3 mL,温度为50℃,变性剂A为1.5 g时,玉米蛋白在1 h内的水解度可达34.95%。说明优化酶解条件后玉米蛋白的水解度有较大的提高。