叶用莴苣TRAP 反应体系的建立

以叶用莴苣为试材,采用正交设计和单因素试验2种方法研究叶用莴苣TRAP反应体系中Mg^2＋、Taq DNA聚合酶、dNTPs、引物等4个因素的浓度变化对扩增结果的影响,建立最佳反应体系。结果表明：TRAP-PCR反应最优体系是在20μL反应体系中含DNA模板60～100 ng、10×PCR buffer（Mg^2＋free）2μL、Mg^2＋终浓度2.0 mmol/L、Taq DNA聚合酶含量1.0 U、dNTPs终浓度0.2 mmol/L、引物终浓度0.75μmol/L。该体系对叶用莴苣种质的扩增结果稳定,条带清晰度高且多态性丰富,可用于对叶用莴苣种质资源的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定。     

叶用莴苣组织培养再生体系的建立

为了满足市场需求,通过组织培养技术可以使叶用莴苣不受季节气候所牵制。随时可以工厂化大量生产,以达到百姓日食之需。本研究以PS11叶用莴苣为试材,从种子开始培育无菌苗,MS培养基为基础培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA激素配比,再经愈伤组织诱导、芽分化、生根3个步骤的离体培养,建立叶用莴苣快速高效的再生体系。研究表明：该品种最佳诱导愈伤组织分化的培养基为MS+0.2mg/L6-BA+0.4mg/LNAA,出愈率达到100%,出芽率达到71.6%。     

叶用莴苣叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立

为建立适用于生菜的(Lactuca sative L.)蛋白质组研究的双向电泳技术(2-DE),以叶用莴苣S24为材料, 采用TCA/丙酮沉淀法提取叶片蛋白,比较了两种标准曲线对蛋白浓度测定的影响,同时探讨了蛋白裂解、等电聚焦(IEF)条件以及其他一些关键技术,结果显示：与传统标准曲线相比,采用改良后标准曲线测定的蛋白浓度更准确,得到了背景清晰、重复性好、蛋白点分辨率较高的双向电泳图谱。初步建立了叶用莴苣叶片蛋白质的双向电泳技术(2-DE)体系。     

叶用莴苣制种高产栽培技术

叶用莴苣又称生菜,以食用叶片为主。生菜制种大都为半结球型品种,666.7m2产量可达60～80kg,经济效益十分显著。现将其高产栽培技术总结如下：     

主要粮食作物生产体系中锌肥的合理利用

在农业生产中作物锌缺乏十分普遍,并在一定程度上影响了作物产量和品质的进一步提高,而锌肥的施用存在方法不规范、用量不合理等问题。通过对主要粮食作物小麦、玉米、水稻生产中锌肥的施用方式、施用量等研究进展进行归纳总结,并对其优缺点进行评述,以期对中国小麦、玉米和水稻生产中锌肥的合理施用有科学的指导作用。锌肥施用的方式包括种子处理、土壤施用和叶面喷施,种子处理又包括种子包衣、浸种等,土壤施用包括撒施和条施等。这些措施各有其优缺点,应根据生产的需要、环境条件和作物特性等来选择合适的施用量和施用方式。     

小麦—玉米周年生物节水栽培品种的筛选

为了在小麦—玉米周年栽培中提高作物产量与水分利用效率,于2008—2009年栽培季在大田栽培条件下,以当前胶东地区推广种植的13个小麦品种与14个玉米品种为供试作物进行小麦—玉米周年生物节水栽培品种筛选试验,以小麦全生育期不灌溉、拔节期灌溉1次与拔节、灌浆期灌溉2次3个水分供应水平、玉米全生育期不灌溉与开花期灌溉1次2个水分供应水平处理,结果表明:试验条件下,供试小麦品种的产量在5992.485kg/hm2～10045.500kg/hm2之间,水分利用效率(WUE)在14.314kg/(hm2·mm)～24.238kg/(hm2·mm)之间,玉米品种产量在7118.535kg/hm2～12220.700kg/hm2之间,WUE在13.467～26.124kg/(hm2·mm)之间,根据产量、耗水量、WUE、灌溉水生产效率等指标进行聚类分析,将供试小麦品种分为5类,玉米品种分为4类。在小麦生育期内降水250mm、玉米生育期内降水460mm左右时,济麦21、青丰2号、济麦22、DH155等4个小麦品种与先玉335、鲁单981、登海3622、蠡玉16、丹玉86等5个玉米品种具有高产高WUE的特点,可作为小麦—玉米周年生物节水栽培中的首选品种。     

人参中ACE抑制蛋白的提取

从人参粉中提取纯化人参蛋白,以检测人参蛋白对血管紧张素转换酶（ACE）的抑制活性。将人参粉加水（pH 9.0）搅拌,3000 r/min离心20 min。用连续的色谱柱分离：D101大孔树脂分离色谱,离子交换色谱,凝胶过滤色谱。以体外ACE抑制率为指标确定提取的人参蛋白具有抑制ACE的作用。结果表明：人参蛋白对ACE酶具有很高的抑制效果,通过连续的色谱分离方法可将ACE抑制蛋白分离,得到具有较高抑制率的ACE抑制蛋白,该抑制蛋白的抑制率可达92.5%。     

烟农种植意愿的实证分析——基于恩施山区烟农的调查数据

基于2012年对湖北恩施山区123户烟农的调查问卷,运用Logit模型对烟农种烟意愿影响因素进行计量分析。结果表明：烟叶种植年限和对收购政策的满意度这2种因素对种植意愿有正影响,而户主年龄、性别、文化水平、种烟成本、种烟收入等因素对种植意愿的影响不明显。这种结果的出现,与调查地的山区特点是密不可分的,加强基础设施建设、研发推广适用的配套农机械,是提高山区烟农种植积极性的基础。     

猪伪狂犬病毒Taqman-MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用

本研究根据猪伪狂犬病病毒gE基因序列,设计一对特异引物和探针,通过优化反应条件,建立了可区分猪伪狂犬野毒株及基因缺失疫苗株的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果表明：TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法灵敏度可达2.23×101拷贝/μL,比常规PCR检测方法高100倍;同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒（PPV）、均为阴性,无交叉反应;对30份疑似病料的TaqMan荧光定量PCR和普通PCR检测阳性率分别为40%和33%,两者符合率90%。表明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测大量样品,可适合于PRV的临床诊断和流行病学调查。     

食品中砷的暴露评估研究进展

砷以有机态和无机态广泛存在于自然界中。国际癌症研究中心（IARC）将砷和无机砷化合物列为第一类致癌物（Group1,对人类致癌）。食物和水是无机砷暴露的主要途径。无机砷膳食暴露对人体健康的影响已受到广泛重视。文章综述了近年来联合国粮农组织和世界卫生组织食品添加剂联席专家委员会（JECFA）、欧洲食品安全局（EFSA）等国际组织对食品中砷安全性评价的最新进展,总结了目前中国关于砷膳食暴露的研究现状,指出食品中砷的形态、不同砷形态的毒性作用、生物有效性价态以及食品中无机砷的提取和检测方法将是砷安全性评价的重要研究方向。旨在为进一步开展砷的膳食暴露评估及其他相关研究提供参考。     

定量PCR技术检测转基因玉米的研究

以Bt176转基因玉米为材料,通过使用特异性引物和染料,对转基因玉米中外源基因cry1Ab进行了定量检测。研究发现,在优化检测体系的基础上,SYBR荧光染料法定量检测转基因玉米,具有更高的检测灵敏度和精确度,其检测阈值可降到0.05%,变异系数为0.09%~0.53%。     

半夏凝集素基因对油菜的遗传转化及REAL-TIMEPCR分析

以甘蓝型油菜陇油2号子叶为转化受体材料,通过农杆菌介导将半夏凝集素抗虫基因(pta)导入陇油2号,经常规PCR检测获得阳性植株3株。以油菜磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(pep)作为内参基因、选pta全长序列中高度保守区域中145bp的pta2为目的片段对转基因植株进行REAL-TIMEPCR分析,初步证明外源pta基因已整合到油菜细胞基因组中。     

巢式PCR和SYBR Green Ⅰ实时PCR检测转基因大豆方法的研究

为了建立转基因大豆检测技术,采用巢式PCR和SYBR Green Ⅰ实时PCR技术,检测转基因大豆外源基因(CaMV35S、CP4EPSPS)。结果表明,利用巢式PCR可检测出1 ng/μL转基因含量1%的大豆中的CaMV35S基因,而第一轮PCR的检测限为100 ng/μL;利用SYBR Green Ⅰ染料能结合双链DNA的特点,应用实时PCR技术可检测到CaMV35S、CP4EPSPS基因扩增所产生的信号,通过扩增产物的熔解曲线能有效地区分特异性产物,CaMV35S基因的检测限为0.1 ng/μL。同时利用该方法对黄豆、炒黄豆、豆干等样品进行检测,样品中未检出CaMV35S基因成分。巢式PCR方法明显提高了PCR的检测限,SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法能有效、快速检测CaMV35S转基因成分。     

DNA polymorphisms in Oryza sativa L. and Lactuca sativa L. amplified by arbitrary primed PCR

Summary Thirty-five rice (Oryza sativa L.) varieties, including 18 japonica, 5 javanica and 12 indica subspecies and 12 lettuce (Lactuca sativa L.) varieties were identified taxonomically, using PCR with originally designed 21 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) primers and 8 sequence-specific primers, used for amplifying four specific DNA fragments. Use of these primers revealed polymorphisms among varieties in rice and lettuce and facilitates DNA fingerprinting. Dendrograms of both species based on polymorphisms were constructed and genetical relationships were established. In rice, half the number of amplified bands were polymorphic and almost all varieties differentiated. However, differentiation of minor genetic alterations among somaclonal variants or mutants and their mother varieties was not feasible. In L. sativa, 47% of the amplified fragments were polymorphic and all 12 varieties were differentiated. Some of the PCR fragments were variety or type specific, which could be used for indicators for type-selection. The dendrogram obtained showed differentiated clusters of crisphead, leaf and butterhead type, findings in good accord with the classification based on the genetic background.     

肉毒梭菌的荧光定量PCR检测方法

根据肉毒梭菌神经毒素基因设计的引物和探针,建立了肉毒梭菌荧光定量PCR快速检测方法。肉毒梭菌产生了典型的"S"型曲线,其他干扰菌都无扩增,说明引物特异性较好,检测灵敏度为1×103 cfu/mL。该方法能够实现肉毒梭菌的快速检测,具有灵敏度高、特异性好的特点。     

应用纳米磁珠荧光PCR检测棉花曲叶病毒

 为了提供快速灵敏检测棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus, CLCuV)的技术以防止其传播扩散,本研究根据CLCuV外壳蛋白基因（Coat protein, CP）保守序列设计了引物和TaqMan探针,并结合纳米磁珠(Magnetic nanoparticles, MNPs)建立了该病毒的MNP实时荧光PCR (Real-time PCR)检测方法。该方法检测阈值约为525 fg·μL^-1 DNA。通过对CLCuV、非洲木薯花叶病毒、烟草线条病毒、黄瓜花叶病毒及番茄斑萎病毒的检测表明,该方法具有良好的特异性;同时该方法无需任何PCR后处理,交叉污染风险小。本方法可用于CLCuV的快速检测。     

獐茅AIHAK1 Real-time PCR定量方法的建立

以β-actin为内参基因,根据已克隆的AIHAK1及β-actin碱基序列,分别设计了实时定量特异性引物,优化了反应的退火温度与引物浓度,并以优化的条件建立了相对定量标准曲线,同时对该方法的稳定性进行了评价.结果表明AIHAK1及β-actin基因的real-time PCR扩增效率分别为1.09和1.04,线性相关系数分别为0.996和0.997,批内及批间变异系数<5%.所建立的A1HAK1 real-time PCR定量方法操作简便、定量准确、重复性好,为进一步探索AIHAK1的功能、mRNA表达水平的变化及转AIHAK1农作物的检测奠定了方法学基础.     

转基因抗虫玉米的定量检测

建立高效、快速、准确的抗虫转基因玉米MIR162转化体特异性实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法。采用SYBR Green I和Taqman探针2种定量方法对抗虫转基因玉米MIR162进行了检测研究。SYBR Green I法MIR162转化体特异性片段和内标基因zSSIIb的熔解曲线均表现为单一峰,扩增特异性强;二者的扩增效率均在90%~100%之间,标准曲线相关系数R2均大于0.998。2种定量方法的检测限(LOD)均为24个拷贝,定量限(LOQ)为48个拷贝,灵敏度较高。重复测试结果表明,SYBR Green I法的标准偏差(SD)变化范围为0.05~0.13,相对标准偏差(RSD)范围为0.17%~0.40%,Taqman探针法的SD变化范围为0.03~0.14,RSD范围为0.11%~0.44%,说明2种定量检测方法具有良好的重复性和精密度。对MIR162含量为3%、1%和0.5%的混合样品的定量结果为：3.13%、1.09%、0.53%（SYBR Green I法）和3.07%、1.02%、0.50%（Taqman探针法）,RSD均小于10%,T检验分析表明2种定量方法定值结果差异不显著。本研究建立的2种实时荧光定量PCR均可有效对转基因玉米MIR162进行定量检测,可根据不同实际需求及实验室条件进行选择相应的检测方法。     

鹅生长激素受体基因荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中鹅生长激素受体（GHR）基因序列设计合成了引物和探针,对荧光定量PCR的方法进行了方法学的评估,建立了TaqmanMGB荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,由pMD-18T-GHR所构建的标准曲线线性关系良好,建立的GHR基因荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强（可以检测出低于10个拷贝/μl的样品）,准确可靠。籽鹅和莱茵鹅GHR mRNA出壳到90日龄生长过程中肝脏中的表达量不同,30日龄不同组织的表达量各有变化特点。