转新疆野生樱桃李psoRPM1 基因烟草抵抗南方根结线虫

 从新疆野生樱桃李（Prunus sogdiana）抗南方根结线虫单株中分离克隆得到一个能响应南方 根结线虫侵染的抗病基因psoRPM1,利用农杆菌介导方法将其导入烟草中,并对其抗性进行了鉴定。结 果显示,构建的pCAMBA1305.1 表达载体能成功地将psoRPM1 基因导入高度感病的烟草‘W38’中,并 获得了9 株转基因单株。对转基因单株进行抗性鉴定,结果显示转入psoRPM1 基因后使烟草‘W38’对 南方根结线虫的抗性由高度感病变为中度抗病。这一结果预示着psoRPM1 基因可能是一个新的与抗根结 线虫相关的基因。     

樱桃李鲜食新品种‘森果佳人’

 樱桃李新品种‘森果佳人’是从新疆野生樱桃李（Prunus cerasifera Ehrh.）种质资源迁地保存圃（山东胶州）自然授粉实生后代中选育而来。果实近圆形,平均单果质量15.5 g,最大18.0 g。果实底色黄色,果面着红色,有果粉。果肉黄色,细腻多汁,可溶性固形物含量16.3%,总糖166.4 mg · g^-1 FW,总酸2.42 mg · g^-1 FW,甜酸适口,风味浓。果核小,离核。树体开张,早实丰产。在青岛胶州地区7月下旬果实成熟,果实发育期95 d。     

新疆野生樱桃李果实部分表型性状的遗传多样性分析

 以中国新疆伊犁地区霍城县大西沟乡的新疆野生樱桃李（Prunus cerasifera Ehrh.）47个实生株系的成熟果实为试材,从果实形态性状、可溶性固形物与矿质元素含量以及挥发性化合物组分等不同层面对野生樱桃李遗传多样性进行了研究,旨在为新疆野生樱桃李的资源保护、合理利用和遗传改良提供基本资料。结果表明,①新疆野生樱桃李实生株系的果实形状主要为圆形,少数为椭圆形、卵圆形、卵形和宽卵形,果实颜色有黄色、红色、紫红色和黑色等4种类型,野生樱桃李果实纵径、横径、单果重、果形指数以及可溶性固形物含量均存在一定程度的变异,遗传多样性较为丰富,其中以单果重的变异系数最大(9.13 %);②新疆野生樱桃李实生株系果肉组织的Zn、Ca、Mg、Mn、Fe及Cu等6种矿质元素含量变异丰富,其中以Fe元素的含量（平均值为2.12 mg·100g-1）和变异系数（26.99％）最高,进一步筛选高铁性状单株的潜力很大;③从新疆野生樱桃李12个实生株系中共鉴定出醇类、醛类、酯类、酮类、烃类及杂环类等6类83种挥发性化合物,各实生株系挥发性化合物总含量、挥发性化合物种类及其含量以及主要挥发性化合物分离比率与含量等存在广泛的遗传变异,遗传多样性较为丰富,其中以甲酸己酯含量最高（平均值为4.33 μg·g-1）,是野生樱桃李果实香气形成的重要特征性化合物。     

野生樱桃李实生后代果实性状变异分析及优异种质挖掘

 以定植在山东青岛胶州的新疆野生樱桃李（Prunus cerasifera Ehrh.）2.8 万株实生苗及其35个随机实生株系成熟果实为试材,进行了实生后代性状变异及优异种质挖掘的初步研究,旨在为野生樱桃李资源保护与利用提供基本资料。研究结果表明：①除果形指数及Mg 含量之外,单果质量等果实形态性状、果皮花青素、果肉可溶性固形物、果糖、葡萄糖、蔗糖、苹果酸、草酸、乳酸、柠檬酸、琥珀酸及Ca、Fe、Zn 等矿质元素含量存在较丰富的变异,变异系数均在10%以上,其中单果质量变异幅度2.62 ~22.66 g,变异系数高达70.10%,进一步选择的潜力很大;②依据单果质量、自然坐果率及树姿等特性,在定植成活的2.8 万株实生苗群体中选育出了41 个优良单株,进一步挖掘出了单果质量在11 g 以上、果肉可溶性固形物含量在12%以上的大果型、高糖型及高酸型等优异种质7 份。     

樱桃李的栽培技术

选壤土或砂壤土用健壮苗木定植,定植园四周配置防护林,用水后及时中耕,采用穴施、条沟、环状沟施有机肥,保持施量1kg果2kg肥,自然开心形或自由纺锤形整枝,遵循绿色食品生产标准防治病虫害,是新疆霍城人工仿生栽培樱桃李的有效经验.     

抗南方根结线虫新疆野生樱桃李巨细胞的发育及CCS52B基因的作用

以对南方根结线虫（Meloidogyne incognita）表现感病和抗病的新疆野生樱桃李（Prunus sogdiana Vassilcz.）绿枝扦插苗为材料,观察接种南方根结线虫（Meloidogyne incognita）后在侵染数量、巨细胞发育以及CCS52B基因表达方面的差异。结果显示：在感病植株中南方根结线虫的侵染数量明显高于抗病植株。感病植株接种5 d时已可观察到大量线虫建立了取食位点,到21 d线虫已经成熟、产卵并完成其生活史。而在抗病植株中,接种7 d后仅在少数植株中观察到线虫建立了取食位点,到21 d时观察到大量线虫发育停滞,个别线虫到接种后35 d才发育成雌虫。感病植株的巨细胞面积和细胞核面积明显大于抗病植株。CCS52是一类核内周期激活因子,对于核内复制以及依赖于染色体加倍的细胞膨大至关重要。在樱桃李中,CCS52B基因在感病和抗病植株中都只在巨细胞中表达,并且感病植株中早期表达强于抗病植株,说明在感病植株中线虫容易建立取食位点并完成生活史,是由于CCS52B基因参与了巨细胞形成与发育,其早期的高表达提高了巨细胞中的核内复制,促进了细胞核倍性增加,进而促进巨细胞发育从而有利于线虫发育,导致植株感病。     

樱桃李新品种‘森果红露’

 ‘森果红露’是从青岛胶州新疆野生樱桃李（Prunus cerasifera Ehrh.）种质资源迁地保存圃内的自然授粉实生后代中选育而来。树姿开张,枝条下垂,丰产性强。果实近圆形,平均单果质量18.89 g,最大22.88 g。果皮底色黄色,果面着紫红色,有果粉;果肉黄色,细腻多汁,含可溶性固形物12.0%,总糖127.35 mg · g^-1 FW,总酸4.14 mg · g^-1 FW,酸中带甜,风味独特。在青岛胶州地区8月上旬果实成熟,果实发育期105 d。     

野生樱桃李对李根癌病的抗性鉴定

为探明野生樱桃李抗李根癌病种质与基因资源价值,2011年我们以野生樱桃李自然杂交实生苗为试材,采用混合接种发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogens)和根癌土壤杆菌(A.tumefaciens)的方法研究了其对李根癌病的抗性。结果表明,接种后60天,野生樱桃李株最大瘤径为0～10.5 mm,群体平均最大瘤径为2.7 mm,根据抗性评价标准判定野生樱桃李高抗李根癌病。野生樱桃李对李根癌病的抗性存在广泛的株间分离现象,其实生群体中存在免疫、高度抗病、中度抗病、低度抗病、感病和易感病6种类型植株,这6种类型植株分别占实生群体总数的20%、42%、20%、10%、5%和3%。野生樱桃李实生后代中存在大量的对李根癌病免疫植株,是珍贵的抗李根癌病种质与基因资源树种。     

樱桃李新品种‘森果红露’

正2004年从新疆伊梨地区霍城县大西沟乡引进2.8万株新疆野生樱桃李实生苗,2005年定植于青岛胶州市胶东镇二铺村东,2007年陆续开花坐果,2008年筛选出编号为YTL-11的优良单株,具有晚熟、果实大、果面红色、口味酸、多汁及丰产等特点。     

新疆野生樱桃李(Prunus cerasifera)茎段与叶片培养及其植株再生

以新疆野生樱桃李为材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂种类、浓度及配比、蔗糖浓度等多种因素对茎段腋芽萌发与生长、增殖以及叶片不定芽再生的影响,建立了其叶片再生体系。结果表明,1)植物生长调节剂组合IAA0.4mg/L+6-BA0.8mg/L较适合于樱桃李茎段腋芽的萌发与生长培养;2)正交试验筛选出不定芽的最佳增殖培养基为3/4MS+IAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖30g/L;3)ZT诱导不定芽再生的效果好于6-BA,ZT1.5mg/L+IBA0.05mg/L为诱导不定芽再生的最适植物生长调节剂组合;4)暗培养为叶片不定芽再生的必要条件,在最适不定芽再生的培养基上,暗培养14d的不定芽再生效果最好;5)樱桃李不定梢的最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.4mg/L。     

新疆野生樱桃李S-RNase基因分离与鉴定的初步研究

 从4对已报道的李属树种S-RNase基因引物组合中筛选出扩增效果较好的PruC2和PruC4R组合,首次对新疆野生樱桃李（Prunus cerasifera Ehrh.）的45个株系的基因组DNA进行S-RNase基因特异性PCR扩增,并对其PCR产物进行克隆测序。这些核酸序列及其相应的氨基酸序列在GenBank中进行比对, 皆与李属的S-RNase基因有最大同源性,为新疆野生樱桃李的4种S-RNase基因,分别命名为S₁ （511 bp）,S₂ （787 bp）,S₃ （1859 bp）和S₄ （464 bp）,在GenBank的登录号分别为EF638726、EF641276、EF661873和EF661874。45个株系中,43个株系的S基因型分别为S₁S₂、S₁S₃、S₂S₃、S₂S₄和S₃S₄,而10号和15号株系分别只鉴定了一种S-RNase基因,其S基因型组成有待于进一步研究。     

杏SSR反应体系的优化研究

研究了杏SSR-PCR反应体系的主要成分对扩增结果的影响,并进行了体系验证.优化后的反应体系为:总体积20 μL,1×buffer、2.0 mM/L Mg2+、0.25 mM/L dNTP、0.20 μM/L Primer、60 ng/20μL模板DNA和0.05 U/μL Taq酶.利用32个杏品种验证此反应体系,6%的变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在184～267 bp之间,不同品种间DNA谱带具有多态性, 且反应体系的稳定性和可重复性好.     

结球甘蓝SSR检测体系的建立及优化

摘,要：以结球甘蓝自交系15R(南宝)和14S（北黑大平头）为试材,建立了甘蓝SSR-PCR反应体系,并从 PCR反应组成、扩增程序等环节对SSR-PCR反应体系进行了优化。即10.00 μL反应体系组成为：1× Buffer(含20.00 mmol·L^-1 MgCl₂)、50.00 μmol·L^-1 dNTPs、0.40 U Taq DNA聚合酶、0.40 μmol·L^-1 SSR引物、1.00 μL DNA(60.00 ng·μL^-1),加ddH2O至终体积10.00 μL;对基本扩增程序作了改进,适 宜的扩增程序为：94 ℃预变性5 min后进行20个迫降循环,94 ℃变性45 s,60 ℃退火45 s,72 ℃延伸 1 min,每个循环降低0.5 ℃;再进行15个循环,94 ℃变性45 s,55 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min;72 ℃延伸10 min,16 ℃保存。对PCR产物的电泳检测采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染法）。     

青梅果实的采后成熟特性和肉质变化

研究了２０℃,相对湿度９３％条件下青梅果实的采后成熟特性和肉质变化,结果表明,青梅果实采后呼吸活性和乙烯生成量随着成熟作用的进展而加大,乙烯生成量极高,在呼吸类型上属于跃变型果实;果皮急速黄化,果肉急速软化,主要原因在于多聚半乳糖醛酸酶,果胶甲酯酶活性的增大,导致水溶性果胶含量上升和盐酸可溶性果胶含量的下降。     

枇杷SSR反应体系的建立及优化

为探索适宜枇杷的SSR反应体系,利用正交设计对Mg2＋、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA等5种因素4个水平进行筛选和优化。结果表明：20uL反应体系中,Mg2＋、dNTPs和引物的最适浓度分别为1．5mmol．L-1、0．15mmol·L-1、0．2umol·L-1,Taq酶最适用量为1U,模板DNA最适用量为20ng;引物的最佳退火温度为51．0～60．0℃。利用该反应体系对17份枇杷种质进行扩增,电泳结果显示,不同品种间DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠。     

普通杏品种SSR遗传多样性分析

利用来自杏、桃和扁桃的25对SSR多态性引物对66个普通杏品种进行了PCR扩增及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,共检测出284个等位位点,每对引物的等位位点数在3～17之间,平均为11.36。通过NTSYS软件计算得到的Dice相似性系数为0.083～0.987,平均值为0.370,表明中国普通杏种质资源的遗传多样性丰富。UPGMA法聚类将66份材料分为5个组。SSR标记反映出的品种间亲缘关系与根据地理生态类型对杏种质的分类结果基本一致。来自四川和贵州的多数品种独立聚成一组,表现出与其它品种较远的亲缘关系,该地区可能存在特异性较高的种质资源。证实了扁桃基因组SSR引物可用在杏SSR标记的研究中。     

李种质资源ISSR反应体系的建立

以5′-(AC)_9 A-3′为引物对牛心李(Prunus salicina cv.Niuxinli)ISSR(inter-simple sequence repeats)反应体系的优化研究表明,25μL ISSR反应体系中,Taq酶、Mg~(2+)、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的最适浓度分别是:0.3U、1.5mmol/L、0.2μmol/L、20ng和0.16mmol/L。利用该优化体系,以5′-(AC)_9 T-3′为引物,构建了中国李18个品种的ISSR指纹图谱,该引物可将这些品种完全区别开来;以5′-(AC)_9 C-3′为引物,构建了李属6类种质资源的ISSR指纹图谱,该引物区分率为100％。     

野生细叶百合组织培养体系的建立

以细叶百合为试材,采用组织培养的方法,研究细叶百合不同部位、不同激素配比及不同发生途径对获得细叶百合再生植株的影响。结果表明:以鳞茎为外植体,通过器官发生途径获得再生植株,其最佳分化及增殖培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L;以花器官、幼嫩叶片为外植体通过体细胞发生途径获得再生植株,其愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D2.0mg/L+NAA 1.5mg/L,不定芽诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.1mg/L,最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L。