M蛋白基因shRNA抑制PRRSV在Marc145细胞中复制的研究

 【目的】通过靶向PRRSV基因组中的M基因的siRNA来抑制PRRSV在Marc145细胞中的复制。【方法】构建4个能转录小发夹RNA（shRNA）的质粒,将其与靶蛋白表达质粒共转染HEK293A细胞,观察荧光或进行半定量PCR;或将其转染Marc145细胞,感染PRRSV后进行IFA、TCID50和实时PCR检测。【结果】shRNA表达质粒对M融合蛋白表达的抑制率约为50％,使M真核质粒表达蛋白的mRNA水平降低54%～64%,表达的shRNA在PRRSV感染后48 h使病毒的TCID50和mRNA水平均降低到1/10～1/100倍,间接免疫荧光结果表明shRNA表达质粒转染孔的荧光细胞数显著减少。【结论】shRNA表达质粒特异性的抑制了靶蛋白M和PRRSV的复制,靶向PRRSV基因组M基因不同区域的siRNA可以作为控制该病毒传播的候选策略。     

BraSDG8 RNA干扰载体的构建及其对拟南芥的遗传转化

BraSDG8是拟南芥SDG8的同源基因,同属于ASH1家族,与开花调控相关。在克隆得到BraSDG8全长cDNA序列的基础上,选取其中一段保守片段构建RNA干扰载体pFGC5941-BraSDG8,并通过农杆菌GV3101介导,浸花法转化野生型拟南芥Col,获得了1株稳定遗传的转基因植株,为进一步研究BraSDG8的基因功能奠定了良好的基础。     

miR-M11基因编辑对马立克病病毒体外复制的影响

为探究病毒编码的微小RNA前体基因miR-M11对马立克病病毒（MDV）体外复制能力的影响,以MDV国内分离株HN302为研究对象,利用CRISPR/Cas9系统靶向编辑并敲除位于Mid基因簇的miRM11,构建1株miR-M11基因编辑缺失毒株HN302ΔM11（克隆号C58-8-4）。经过PCR鉴定、测序分析、间接免疫荧光试验（IFA）、实时荧光定量PCR(qPCR)以及传代稳定性分析,证实HN302编码的miRM11被精确编辑并从病毒基因组中完全缺失,且未发生回复突变。病毒增殖曲线绘制结果显示,miRM11缺失毒株HN302ΔM11的增殖速度显著高于亲本毒株HN302(P<0.05)。综上,miR-M11是MDV复制的非必需基因,且其缺失后可增强MDV的体外复制能力。     

环状RNA hsa_circ_004389对甲型流感病毒复制的影响

[目的]试验前期组学数据提示甲型流感病毒(Influenza A Virus,IAV)感染A549细胞后宿主的环状RNA(circular RNA,circRNA)hsa_circ_004389表达显著上调.为进一步明确hsa_circ_004389表达和IAV感染间的关联,研究其对IAV复制的影响.[方法](1)采用...     

BolSDG8 RNA干扰载体构建和拟南芥的遗传转化

拟南芥SDG8通过调控开花关键基因FLC位点上H3K36的甲基化水平促进其转录表达进而抑制植株早花。甘蓝Bol SDG8是拟南芥SDG8的同源基因,经比对,选择一段约为359 bp的保守序列,命名为Bol SDG8-RNAi,通过构建RNA干扰载体,并将其转化至野生型拟南芥(Col-0)中,获得了稳定遗传的转基因植株。通过对T3代转基因植物的表型观察,开花天数及莲座叶数目的统计分析,发现Bol SDG8 RNA干扰转基因植株表现出与拟南芥sdg8-2突变体相似的生物学表型,即植株弱小,明显早花,暗示Bol SDG8与拟南芥SDG8在调控植物开花上具有相似的生物学功能,为进一步深入研究甘蓝Bol SDG8的生物学功能奠定基础。     

siRNA抑制口蹄疫病毒在BHK-21细胞中复制的研究

选取口蹄疫病毒(FMDV)的VP1、IRES、2B、3D和L基因保守序列,设计、合成siRNA,并成功构建表达siRNA的穿梭载体,通过脂质体2000在BHK-21细胞上转染6个重组siRNA表达质粒,观察其对FMDV S72毒株复制的抑制效果.结果发现:病毒对照和空载体对照细胞死亡脱落,脂质体2000对照和细胞对照细胞状态良好; 6个siRNA转染孔细胞状态明显优于病毒对照孔,表明6个重组质粒转染后均可以显著抑制FMDV S72毒株的复制,其中靶向IRES1基因的siRNA对FMDV的复制抑制最为明显.     

Cathepsin B基因的沉默对香蕉穿孔线虫繁殖力的影响

【目的】通过研究cathepsin B基因对香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)繁殖力的影响,探索cathepsin B基因的功能,为利用该基因防治香蕉穿孔线虫和植物寄生线虫组织蛋白酶的进一步研究提供科学依据。【方法】根据已知香蕉穿孔线虫cathepsin B基因(Rs-cb-1)的序列,从香蕉穿孔线虫克隆cathepsin B基因,以含有目的基因的质粒DNA为模板合成特异的双链RNA(dsRNA),采用dsRNA浸泡的方法对香蕉穿孔线虫进行RNA干扰(RNAi)试验,通过室内接种胡萝卜愈伤组织繁殖线虫的方法,研究cathepsin B基因的沉默效应对香蕉穿孔线虫繁殖力的影响。【结果】用Rs-cb-1dsRNA浸泡12、24、48、72h后香蕉穿孔线虫的平均繁殖倍数分别为165、93、54、53,而未经dsRNA处理的该线虫繁殖倍数均大于420;并且Rs-cb-1dsRNA浸泡的时间不同,对应各处理之间的繁殖倍数差异显著。RT-PCR检测,经Rs-cb-1dsRNA浸泡12h后,目的基因在香蕉穿孔线虫的表达量明显减弱,浸泡24h后其表达量进一步减弱,但还有微量表达,经dsRNA浸泡48、72h后目的基因基本不表达。【结论】Rs-cb-1与香蕉穿孔线虫的繁殖力相关;Rs-cb-1dsRNA的浸泡可以明显抑制cathepsin B基因的表达量,从而影响香蕉穿孔线虫的繁殖力,但浸泡时间不同Rs-cb-1的沉默效率也不同,沉默效率最好的干涉时间是48h。     

体外染氡对V79细胞凋亡影响及其机制研究

建立中国仓鼠肺细胞(V79细胞)体外染氡早期损伤模型,对V79细胞凋亡的分子机制进行探析。筛选确定合适的染氡浓度及时间后将V79细胞分为对照组和染氡组,以每孔1.5×105个细胞接种于Transwell培养皿,细胞贴壁后将Transwell培养皿置于细胞动式气体染氡装置中染毒,染氡后收集各代细胞,常规培养后检测细胞周期、细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达情况。结果表明:确定染氡浓度为40 000Bq·m-3,时间为10min,染毒后细胞G1期缩短,S期延长,细胞凋亡率逐渐升高,Caspase-3蛋白的表达有明显上升趋势,成功构建了V79细胞体外染氡早期损伤模型。在染毒早期阶段,V79细胞凋亡率上升与Caspase-3蛋白表达增加间无良好相关性。     

RNAi干扰的F3H基因转化大豆的研究

利用根据RNAi技术构建的干扰黄烷酮-3-羟化酶基因(F3H)的载体pF3Hi330,通过农杆菌介导辅助抽真空的大豆茎尖转化法和花粉管通道法将pF3Hi330载体整合到大豆基因组中,获得转基因阳性植株4棵,抗性植株经PCR检测,初步证明外源目的基因已整合到大豆基因组中。同时,对转基因阳性植株异黄酮含量进行测定,显示异黄酮含量得到一定的提高。结果表明更多的前体流向异黄酮合成的分支途径,达到提高大豆异黄酮含量的目的。     

siRNA对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)复制的影响

RNA干涉(RNAi)可以通过短双链RNA(siRNA)介导,特异地降解相应的mRNA,从而抑制基因表达,导致转录后水平的基因沉默(PTGS)。本研究利用这种技术,将鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染体外培养的Vero-E6,使其适应Vero-E6,然后用体外转录合成的针对IBV部分基因的siRNA,对其复制进行RNAi。结果显示,针对IBVM蛋白的siRNA能有效地抑制IBV在Vero-E6细胞中的复制。     

群际威胁与对内群体和外群体支持决策的关系研究

为了考察群际威胁与对内群体及外群体支持决策的关系,以农村和城市两个大学生群体为被试,采用准实验方法进行了两个研究,结果发现:①两个研究中,农村组大学生体验到的威胁感显著高于城市大学生;②城市大学生感受到的群际威胁、群体认同可以显著负向预测对外群体的支持,产生了外群体厌恶决策;群体认同可以显著预测对内群体的支持,产生了内群体偏好决策;③农村大学生感受到的群际威胁可以显著的负向预测对外群体的支持,产生了外群体厌恶决策.     

4种魔芋资源的裂片及其表皮细胞的形态学比较研究

以白魔芋等4种魔芋资源为材料,对其裂片及表皮细胞进行形态学比较研究,结果表明:白魔芋裂片披针形,尖端长尾状,钝齿状叶缘,表皮细胞含丰富内含物;花魔芋裂片卵圆形,尖端渐尖,基部左侧偏大,叶缘浅波状,气孔器呈平行型排列;珠芽魔芋裂片椭圆形,皱波状叶缘,基部盾圆,表皮细胞为4种资源最大;甜魔芋裂片卵状三角形,尖端盾尖,气孔器呈不等型排布.     

人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的初步表达

目的:构建人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)原核表达载体,检测其在大肠杆菌Escherichia coli中的初步表达.方法:以含有人tPA基因的质粒为模板,设计引物扩增出含有RGDS-tPA基因并构建到原核表达载体pET28a中,测序证实为正确的rtPA序列,并将pET28a-tPA转化至菌株E.coli BL21(DE3).用IPTG诱导rtPA在E.coli中表达,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行验证.结果:琼脂糖凝胶电泳获得目的基因片段tPA的条带约在1 700bp处,鉴定为阳性重组体;聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定获得目的蛋白片段rtPA的条带约53KDa,为非活性的包涵体.结论:人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体构建成功,可在大肠杆菌中有效表达.     

大孔树脂纯化翅果油树叶片多糖的研究

该文研究了5种树脂对翅果油树叶片多糖的静态吸附及解析性能,选取出一种吸附和解析效果均较好的树脂进行了动态试验研究.结果表明:AB-8树脂对翅果油树叶片多糖的吸附和解析效果较好;AB-8树脂在吸附时间为100min,吸附液为30℃,pH值为7,最佳上样量与树脂比例为6∶1,吸附流速为1mL/min时吸附效果较好.用40mL的蒸馏水洗脱效果最好,洗脱率可达82.095%.对AB-8树脂的再生性能进行研究表明,树脂重复使用4次,其吸附能力仍较为稳定.     

采用双任务范式使被试将工作记忆信息保存在工作记忆当中并完成选择性注意任务,结果发现:视觉空间工作记忆负荷不能使熟悉面孔的干扰效应消失,语义工作记忆负荷使熟悉面孔的干扰效应在高知觉负荷条件下消失.因此,熟悉面孔在高知觉负荷条件下可能是以语义的方式存储在工作记忆当中,在低知觉负荷条件下可能是同时存储在视觉空间工作记忆和语义工作记忆中.

采用双任务范式使被试将工作记忆信息保存在工作记忆当中并完成选择性注意任务,结果发现:视觉空间工作记忆负荷不能使熟悉面孔的干扰效应消失,语义工作记忆负荷使熟悉面孔的干扰效应在高知觉负荷条件下消失.因此,熟悉面孔在高知觉负荷条件下可能是以语义的方式存储在工作记忆当中,在低知觉负荷条件下可能是同时存储在视觉空间工作记忆和语义工作记忆中.     

p E G F P - N 3 - L P L重组真核表达载体的构建及在V e r o细胞中的表达

目的:构建贵州白香猪LPL基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pEGFP-N3-LPL,转染Vero细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用HindⅢ和BamHⅠ两种限制性内切酶获得LPL基因编码区片段和pEGFP-N3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化、挑取阳性克隆,进行菌落PCR、双酶切及测序鉴定.使用Lipofectamine2000将重组质粒转染Vero细胞,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达并对其进行mRNA检测.结果:成功构建重组真核表达载体pEGFP-N3-LPL,经mRNA检测,实验组在1 500bp处出现特异性条带,说明重组载体已在Vero细胞中获得表达.结论:本试验构建的真核细胞表达载体pEGFP-N3-LPL,为进一步阐明LPL基因与肌内脂肪沉积间的生物学作用机制奠定了基础.     

一类等距结点上的双周期整插值问题

给定结点组xk=kπ/σ(σ>0,k∈Z),对于正整数m1相似文献   

S u p e r c y c l i c算子族的公共超循环向量

讨论一族不可数的Supercyclic算子{Ft}t∈Λ的公共Supercyclic向量,并给出算子族{Ft}t∈Λ的公共Supercyclic向量在无限维、可分的Banach空间X中是稠密集的两个新的充分条件.     

S i m o n效应源于反应选择阶段:基于知觉负荷对S i m o n效应的影响

将Simon任务与知觉负荷任务的视觉搜索范式相结合,通过比较高低负荷条件下Simon效应的大小,探讨Simon效应的产生是否与刺激鉴别阶段有关.实验一的刺激为颜色,实验二的刺激为字母.两个实验的结果均显示,高负荷条件和低负荷条件下的Simon效应差异并不显著,表明Simon效应的产生与刺激鉴别阶段的加工无关,同时也说明无关刺激位置的编码是自动激活的.     

中华大蟾蜍g a l e c t i n - 3c D N A的克隆、序列分析及原核表达载体的构建

通过PCR扩增出中华大蟾蜍Bufo gargarizans半乳糖凝聚素3(gal-3)cDNA全长开放读码框(ORF)并克隆至pGM-T载体,经DNA测序确定获得全长ORF序列(GenBank登录号为JN993733).序列分析表明中华大蟾蜍gal-3的ORF是由789个碱基组成,编码262个氨基酸残基组成的蛋白质.推导氨基酸序列同源性比较发现,中华大蟾蜍与非洲爪蟾Xenopus lavis同源性最高,为51%,与其他10种动物的同源性在41%～50%之间.SMART分析显示gal-3蛋白在136-259位氨基酸存在保守的半乳糖结合域.Net Phos预测gal-3在Ser-6和Ser-186有潜在的丝氨酸磷酸化位点.gal-3氨基酸序列构建的进化树符合传统动物分类学特点.经菌落PCR、双酶切和DNA测序确认gal-3的ORF正确插入原核表达载体pET-28b,表明原核表达用重组质粒构建成功,为研究其蛋白功能和生物学功能奠定了基础.