两株真菌混合发酵产纤维素酶的条件及其优化

采用两株真菌X-13和X-6分别进行单菌和混合菌固态发酵产纤维素酶能力对比,结果表明两株菌混合固态发酵时,纤维素酶活比单独固态发酵分别提高了31.0%和40.7%.通过单因素实验选出了最适合混菌发酵产酶的秸秆和氮源分别为稻草秸秆和硫酸铵;最适装瓶量为250 mL装5 g;最适产酶温度为30℃;最佳产酶时间为4～6 d....     

木质素降解真菌的筛选与鉴定

本研究筛选出6株真菌,经愈创木酚显色实验和苯胺蓝褪色实验证明只有菌株X1可以产生木质素降解酶。之后进行木质素降解实验,测定其对于碱木质素降解率为44.55%。将X1进行发酵培养,使用紫外分光光度计测定其生长曲线和三种酶活。测定结果Lac活力为38.4 U/mL,MnP活力为104.9 U/mL,Lip活力为79.3 U/mL。通过将X1接种到不同pH的液体发酵培养基得出,真菌X1在pH为4.0的条件下培养6 d产酶能力最强。     

降解纤维素真菌的分离筛选及其环境适应性初探

为获得有强降解纤维素能力的真菌,以羧甲基纤维素钠培养基为基础培养基,从采集的秸杆、牛粪等样品中进行分离筛选,获得具有分解纤维素能力的9株真菌菌株。采用羧甲基纤维素钠刚果红培养基进行粗选,初步得到6株透明水解圈较大的菌株。将所有待测真菌菌株进行液体发酵培养,测定其滤纸崩溃度及羧甲基纤维素钠酶活力,得到2株分解纤维素能力较强的优良菌株,命名为F-1,F-6。对这2株菌株进行碳源、氮源、pH值和培养时间的适应性研究及混合发酵培养的简单研究。结果发现,F-1菌株在碳源为滤纸,氮源为硝酸铵时,具有最佳产酶效果,而其最适产酶pH为6.5～7,最适产酶时间为6～7d。F-6菌株与其类似。混合发酵的最佳产酶时间为6～8d。通过鉴定可知2株菌都属于头孢霉属（cephalosporium corda）。     

紫外线诱变纤维素酶高产菌株的筛选及其酶活力

为筛选产纤维素酶酶活力高的菌株应用于秸秆饲料发酵,利用紫外线诱变对1株产纤维素酶绿色木霉菌进行了试验研究.结果表明:筛选出1株纤维素酶产酶量高且性状稳定的高产菌株ZJUV18,其 发酵72h纤维素酶滤纸酶活达68.07 U/g,较原始菌株提高4.45倍.     

黄绿木霉菌菌株产几丁质酶发酵条件的研究

[目的]研究黄绿木霉菌（Trichoderma aureoviride sp.）产几丁质酶的最佳发酵条件,为几丁质酶工业提供新酶源。[方法]采用正交试验设计,以DNS法测定酶解后糖含量变化为指标,对发酵条件进行优化。[结果]在以2%胶体几丁质为碳源、2%蛋白胨为氮源、摇床转速为170 r/min时,黄绿木霉菌产几丁质酶的最佳发酵条件组合：培养基的初始pH为5,接种量为8%,瓶装量为20 ml,在28℃下培养6 d。[结论]试验确定了黄绿木霉菌产几丁质酶最佳条件,为其在工业生产中的应用奠定了基础。     

黑曲霉No．5．1纤维素酶液牵发酵培养基研究

以黑曲霉（Aspergillus niger）突变株No．5．1为实验材料,采用液体深层发酵方法,对其所产纤维素酶进行了研究。结果表明在250mL三角瓶装25mL培养基、接种种龄为1d的种子培养液2．5mL、32℃培养5d的培养条件下,其液体发酵较适产酶培养基为：纤维素粉40g／L、硝酸钾30g／L、聚乙二醇1g／L、初始pH为6．5,这将为纤维素酶液体发酵的工业化生产和应用提供参考价值。     

小蠹虫肠道中纤维素降解菌的分离及其产酶性质

从小蠹虫幼虫肠道中筛选分离出降解纤维素的菌株5株,通过杜氏纤维素选择性培养基,以滤纸、脱脂棉和羧甲基纤维素钠为底物,测定菌株所产纤维素酶的活力。结果表明:酶活最强的为HS-11-5号菌株,最大酶活32.62 U/mL;此菌株的最佳产酶条件为:培养发酵时间50 h,培养所需最佳氮源为硫酸铵,培养最佳pH 7.5～8.5,培养最适温度28～30℃,最佳瓶装量为占培养瓶容积的12%～16%。     

黑曲霉No.5.1纤维素酶液体发酵培养基研究

以黑曲霉(Aspergillus niger)突变株No.5.1为实验材料,采用液体深层发酵方法,对其所产纤维素酶进行了研究。结果表明在250 mL三角瓶装25 mL培养基、接种种龄为1 d的种子培养液2.5 mL、32℃培养5 d的培养条件下,其液体发酵较适产酶培养基为:纤维素粉40 g/L、硝酸钾30 g/L、聚乙二醇1 g/L、初始pH为6.5,这将为纤维素酶液体发酵的工业化生产和应用提供参考价值。     

利用农业废弃物对青霉菌进行固态发酵生产纤维素酶

筛选出1株产纤维素酶菌株并进行鉴定,为微生物肥料生产筛选菌种资源。采用刚果红染色、综纤维素、滤纸、微晶纤维素培养基等方法,从土壤中分离出1株产纤维素酶菌株ZH1,经形态学分析、18S r DNA分子进化树分析,鉴定菌株为赭绿青霉(Penicillium ochrochloron);采用单因素试验对产纤维素酶的青霉菌菌株进行固体发酵条件优化。结果表明,当温度为30℃、发酵液初始p H值为4、料水体积比为1.0∶3.0、接种量为0.5 m L及氮源为花生饼粉时,滤纸酶(FPase)在发酵3 d时有最大的产酶活性;通过优化试验,赭绿青霉达到了较高的产纤维素酶能力,为纤维素酶进一步工业化生产奠定了一定的基础。     

陕北花马盐湖1株产纤维素酶真菌的鉴定及产酶条件研究

【目的】对从陕北花马盐湖嗜盐真菌中筛选出的1株产纤维素酶菌株进行鉴定,研究该菌株的产酶条件,为嗜盐纤维素酶资源的利用提供理论依据。【方法】利用刚果红培养基从陕北花马盐湖嗜盐真菌中筛选产纤维素酶菌株,并对其进行形态学和ITS序列鉴定,在单因素试验基础上,采用L9(34)正交试验,优化该产酶菌株的最佳培养基配方和最佳发酵条件,并研究该产酶菌株的NaCl耐受性。【结果】从陕北花马盐湖嗜盐真菌中筛选出1株高产纤维素酶菌株6MA1,根据形态学和ITS序列系统发育分析,将该菌鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。菌株产纤维素酶的最佳培养基配方是,玉米芯粉22.0g/L,蛋白胨6.0g/L,NaCl 4.0g/L,MgSO4·7H2O 0.55g/L,K2HPO40.5g/L;最佳发酵条件是,发酵温度28℃,发酵时间6d,起始pH 6.0,种子液接种量18%(体积分数),在此条件下菌株6MA1的CMCase活力为47.8U/mL。此外,该菌株在含0~15.0%(体积分数)NaCl的培养基中仍具有产纤维素酶活力。【结论】从陕北花马盐湖筛选出1株产纤维素酶菌株6MA1,并得到了该菌株产酶的最佳条件。     

高效产果胶酶的黑曲霉菌种的诱变及筛选（摘要）

[目的]以原有保藏菌株经诱变并筛选出高产果胶酶的黑曲霉菌种。[方法]涂布平板法选取透明圈和菌落直径较大者作为出发菌株。采用紫外线进行菌种诱变,选择致死率在70%～80%范围内的诱变后菌株进行初筛和复筛。经透明圈检测和摇瓶发酵酶活检测确定其最高酶活和培养时间。[结果]D1-4菌种在适宜培养基中培养96h酶活性最高,达141.13U/ml,比出发菌株酶活提高了1倍。[结论]诱变菌株D1-4有较强分泌果胶酶的能力。     

重离子辐照诱变黑曲霉产纤维素酶菌株的筛选

为提高黑曲霉(=AS3.316)产纤维素酶的活力,用20、40、60、80、100、120、140Gy剂量的重离子束对其进行辐照诱变,并通过初筛、复筛筛选出了纤维素酶活力提高的菌株.结果表明:通过重离子束辐照共筛选出了5株突变体T2-1、T3-1、T5-1、T6-3、T6-4,其中突变体T6-4的纤维素酶活力最高,滤纸酶、纤维素内切酶、纤维素外切酶、β-葡萄糖苷酶活力分别为:61.3、116.2、29.9、35.9U/mL,与初始菌株相比纤维素酶活力分别提高了3.0、3.78、2.76和2.52倍;其余突变体纤维素酶活力大小依次为T6-3>T5-1>T3-1>T2-1;120Gy辐照条件下,诱变效果最为显著;经9代传代稳定性试验,5株突变体在传代过程中虽有不同程度的变化,但总体表现相对稳定.     

不同纤维素分解菌纤维素酶活性比较试验

以滤纸为唯一碳源的无机盐溶液作为培养基,对拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)、黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)和绿色木霉(Trichoderma viride)这3种纤维素分解菌进行了培养及羧甲基纤维素CMC酶活性测定。结果显示:拟康宁木霉和绿色木霉的滤纸失重率分别达到37%、33%,是黄绿木霉的6～7倍,且他们的CMC酶活性也显著黄绿木霉。表明不同的菌株对纤维素类物质的分解能力差异很大,且CMC酶活性高的菌种滤纸分解能力也比较明显,以拟康宁木霉与绿色木霉分解纤维素的能力较强。     

紫外-氯化锂复合诱变选育聚半乳糖醛酸酶高产菌株

[目的]研究聚半乳糖醛酸酶高产菌株的复合诱变条件。[方法]黑曲霉孢子经紫外线辐射2 min后,涂布于含0.8%LiCl的培养基上培养,经初筛和复筛后测定聚半乳糖醛酸酶活力。[结果]获得1株产聚半乳糖醛酸酶活力为10.450万U/ml的菌株,产酶活力比出发菌株提高了60.77%。[结论]产聚半乳糖醛酸酶的黑曲霉经紫外线辐射2 min、0.8%LiCl复合诱变后,产酶活力提高了60.77%。     

棉花秸秆纤维素降解菌的筛选鉴定 与降解棉秆效果研究

【目的】 利用微生物学和分子生物学手段筛选和鉴定棉秆表面附着的真菌,获得具有高效纤维素分解能力的真菌。【方法】 通过将棉花秸秆接种至不同选择性培养基中,分离挑选水解圈较大的菌株,进行镜检和分子生物学鉴定;并同时对菌株进行滤纸酶活性(FPA)和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)糖化活力的测定,以及连续(25 d)观测棉秆纤维的失重率。【结果】 主要4株菌种水解圈直径大小排序为,SN-1＞SN-4＞SN-3＞SN-4(P=0.013)。对于CMC-Na糖化活力,24~96 h时SN-1菌种显著低于其它3个菌种(P＜0.05),120 h时,各菌种处理间差异不显著(P＞0.05)。对于FPA活性,第24和120 h时,SN-1和SN-4菌种显著高于SN-2和SN-3菌种(P＜0.05);其它时间点,各菌种按活性高低排序为:SN-1、SN-4＞SN-3＞SN-2(P＜0.05)。通过镜检和分子生物学鉴定,得到4株菌种分别为:SN-1为黑曲霉(Aspergillus niger),SN-2为赤霉(Gibberella moniliformis),SN-3为链格孢霉(Alternaria nees),SN-4为青霉菌(Penicillium italicum)。【结论】 黑曲霉降解棉花秸秆的效果最为显著。对于CMC-Na糖化酶活力、滤纸酶活性以及棉花秸秆的实际失重率(降解率),接种黑曲霉或青霉菌时表现均最佳。     

复合诱变选育柚苷酶高产菌株的研究

以柚苷酶产生菌黑曲霉FY01—4为试验菌株,采用紫外线和60Co-γ射线进行复合诱变,经摇瓶复筛选育出一株柚苷酶高产菌株C15,酶活达1285．6U／mL,是出发菌株的3．59倍。连续传代10代,酶活仍保持在1200～1300U／mL之间,菌株产酶稳定性良好,可作为生产柚苷酶的优良菌株。     

培养条件对黄绿木霉菌抑制稻瘟病菌能力的影响

利用生长速率抑制法测定不同培养基培养黄绿木霉菌所得发酵液对稻瘟病菌的生长抑制率,比较黄绿木霉菌发酵液抑制稻瘟病菌能力的变化。结果表明,PD液体培养黄绿木霉菌可以获得有较强抑菌能力的代谢物质,且蔗糖和乳糖也可做为碳源。培养96h至120h时抑菌能力达到最高。     

β-葡萄糖苷酶高产菌株的筛选及其性质研究

从腐败的纤维质中分离筛选得到10株β-葡萄糖苷酶产生菌,与实验室保存的9株菌株一起做产酶发酵,其中B2酶活性最高,为24.4 U·mL﹣1,经菌种鉴定为黑曲霉,其β-葡萄糖苷酶最适合的pH值为4.5,最适温度为65℃,在pH值3.0～10.0较稳定;温度稳定性较好,在65℃保温120 min后仍有61.6%的相对活性;终浓度为5 mmol·L﹣1的Fe2+和Mn2+对酶活性有较强的促进作用.该酶较好的热稳定性和pH值稳定性使其显示出较好的应用潜力.     

黄绿木霉菌代谢产物对杨树烂皮病菌抑菌能力的研究

该文利用室内实验的方法,研究了黄绿木霉菌代谢产物对杨树烂皮病菌的抑菌能力.黄绿木霉菌代谢产物在经121℃处理25 min后,50%浓度下抑菌作用可高达100%.在pH为3～9范围内该代谢产物的抑菌能力变化不大,说明pH变化对其活性没有影响.在对黄绿木霉菌发酵过程中,利用马铃薯葡萄糖(PD)培养基即可达到有效的抑制杨树烂皮病金黄壳囊孢菌菌丝生长的目的,而且利用马铃薯葡萄糖(PD)培养基发酵3～4 d的黄绿木霉菌代谢产物抑菌效果最好,抑菌中浓度最低,发酵时间过长与过短,均不利于对病原菌的抑制.经黄绿木霉菌代谢产物处理的菌丝电导率与呼吸强度均发生变化,在光学显微镜与透射电镜下观察到病原菌菌丝体发生变化,细胞壁有所改变.      

β-葡萄糖苷酶产生菌的选育及其性质研究

[目的]筛选β-葡萄糖苷酶高产菌株,确定产酶的最佳工艺条件。[方法]利用几种黑曲霉进行产β-葡萄糖苷酶的筛选,得到1株β-葡萄糖苷酶高产菌株黑曲霉3.316。通过单因素和正交试验,确定产酶的最佳工艺条件,研究不同碳源(麸皮、可溶性淀粉、豆粕和米糠)在相同碳源浓度(2%)及相同发酵条件下对β-葡萄糖苷酶活力的影响。[结果]β-葡萄糖苷酶高产菌株的最佳产酶工艺条件为:麸皮2%,蛋白胨0.1%,KH2PO40.1%,初始pH值6.0。测得酶活力为152.20 U/mg。β-葡萄糖苷酶酶学性质的测定结果表明,反应液浓度为0.1 mol/L醋酸缓冲液时酶活力最高,最佳反应温度为55℃,pH为5.0。[结论]不同碳源对产酶有较大影响,麸皮做碳源时产酶最高。