鹿茸水溶性蛋白质提取条件的优化及组分

以梅花鹿(Cervus nippon Temminck)鹿茸为原料,采用缓冲溶液提取水溶性蛋白质,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken设计试验优化鹿茸水溶性蛋白质的提取条件,采用Sephadex G-100凝胶层析和SDSPAGE电泳对提取物组分进行分析。结果表明:鹿茸水溶性蛋白质的最佳提取工艺条件为p H=9.18,料液比1.0 g∶60.4 m L,提取时间5.9 h,在此条件下蛋白提取量为90.84 mg·g-1。采用Sephadex G-100凝胶层析对鹿茸水溶性蛋白质进行分离得到3个吸收峰,经SDS-PAGE电泳测定,其相对分子质量分别为66 000、29 000、14 000。鹿茸水溶性蛋白质主要为小分子蛋白质。     

枣树叶片蛋白质提取及SDS-PAGE单向电泳条件优化

[目的]对枣树叶片蛋白质提取方法及其SDS-PAGE单向电泳条件进行优化。[方法]对枣树5种蛋白质提取方法和影响SDS-PAGE单向电泳的因素进行比较研究。[结果]改良丙酮沉降法提取出的蛋白质杂质较少,条带数量多且清晰,同时通过研究确定了一套适用于枣树蛋白检测的SDS-PAGE凝胶制备及电泳方法。[结论]该研究为进一步从分子生物学的角度研究枣树与枣疯病植原体的互作机制提供了技术的基础。     

白芷种子蛋白质提取方法的比较

[目的]建立适用于白芷种子的SDS-PAGE蛋白质样品提取方法。[方法]比较5种提取方法所获得白芷种子总蛋白质产量以及SDS-PAGE电泳的谱带数目、强度和电泳分辨率等方面的差异。[结果]方法 a所提蛋白质含量高,杂质少,电泳谱带清晰;方法 b所提蛋白质溶液电泳谱带清晰,分辨率较高,但提取含量较低;方法 c和d所提蛋白质杂质较多,纯度不高,分辨率较低;方法 e所提蛋白质纯度较高,但蛋白条带缺失较多。[结论]方法 a提取白芷种子蛋白质的效果最好,所提蛋白效率较高,杂质少,电泳谱带清晰,分辨率高,谱带数多,优于其他提取法。     

3种早春植物叶片蛋白质SDS-PAGE分析

[目的]通过对4种蛋白质提取方法对比分析,筛选出适于早春植物叶片蛋白质的提取方法。对3种蔷薇科植物不同时期叶片中蛋白质含量及组分进行测定分析,揭示叶片中蛋白质含量和组分的变化规律,为后期开展相应的蛋白组学研究提供理论基础。[方法]4种蛋白质提取方法:酚提取法,改良酚提取法,改良Tris-HCl法和TCA-丙酮法。通过考马斯亮蓝(G-250)染色法和SDS-PAGE法对3种早春植物叶片的蛋白质含量和组分进行测定。[结果]与其他3种蛋白质提取方法相比,利用TCA-丙酮法提取叶片中蛋白质,后期所得蛋白图谱效果最好,蛋白质条带多且清晰。4月初至6月初5个时期叶片中蛋白质含量整体呈"先增长后下降"的变化趋势,不同生长时期华北珍珠梅叶片蛋白质含量均明显低于日本晚樱和西府海棠。SDS-PAGE电泳表明:3种早春植物叶片蛋白质组分丰富,变化多样。花期为4-5月的日本晚樱和西府海棠叶片蛋白质表达的种类相对较多,条带也较清晰;花期为6-7月的华北珍珠梅叶片蛋白质条带和发生明显变化的蛋白质种类都比较少。[结论]TCA-丙酮法是针对3种蔷薇科植物最优蛋白质提取方法。早春蔷薇科植物花期与叶片蛋白质含量相关,开花前蛋白质含量持续增长,在花期达到最高;且花期较早的日本晚樱和西府海棠比花期晚的华北珍珠梅叶片蛋白质含量和蛋白组分高。     

人参蛋白质不同提取方法及含量的比较

[目的]优选人参蛋白质提取的最佳方法,并比较不同生长年份对人参蛋白质含量的影响。[方法]比较丙酮沉淀法、聚乙二醇6000沉淀法、聚乙二醇20000沉淀法、酚提取法、Trizol提取法5种人参蛋白质的提取方法,及不同生长年份的人参蛋白质,采用Bradford方法测定蛋白质含量,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白。[结果]丙酮提取法得到的蛋白质纯度最高,电泳条带最清晰完整,且人参蛋白质的含量随生长年份增加而升高。[结论]丙酮沉淀法是一种较好的适用于人参蛋白质提取的方法,5年生人参蛋白质含量最高。     

独行菜属植物种子总蛋白4种提取方法的比较

【目的】研究适用于抱茎独行菜和独行菜种子SDS-PAGE电泳和双向电泳的蛋白样品提取方法,为研究两种独行菜种子蛋白组学奠定基础。【方法】采用4种蛋白质提取方法提取种子总蛋白,测定和分析蛋白产量和SDS-PAGE电泳图谱。【结果】TCA/丙酮提取法获得蛋白量较多,杂质少,电泳条带多且清晰;裂解液提取法蛋白的产量最高,有拖尾且杂质多;Tris-HCl提取法和苯酚提取法的蛋白产量低,杂质少;裂解液提取法和苯酚提取法获得的蛋白在SDS-PAGE电泳时易产生高丰度蛋白的干扰。对比TCA/丙酮提取法和苯酚提取法获得的两种独行菜种子总蛋白SDS-PAGE图谱,发现有6条蛋白差异条带。【结论】TCA/丙酮提取法提取两种独行菜种子总蛋白效率高,纯度高且杂质少,可用于SDS-PAGE电泳和双向电泳分析;两种独行菜种子蛋白SDS-PAGE电泳的差异谱带可为甄别两种独行菜种子提供参考依据。     

楸树花粉蛋白质提取方法研究

本研究以3种楸树的花粉为试材,采用不同的蛋白质提取方法,利用考马斯亮蓝染色法测定了3个树种花粉蛋白质的含量,并通过SDS-PAGE电泳对花粉蛋白质组分进行了分析。结果表明:采用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质,南京老山楸树花粉蛋白质提取率最高;采用不同pH值(6.8、8.8、9.5)的Tris-HCl提取液提取蛋白质,随着pH值不断增大,其蛋白质提取率显著提高,当pH值达9.5时,蛋白质含量最大,SDS-PAGE电泳结果也显示此时蛋白质带明显增加;采用不同pH值(6.8、8.8、9.5)的Tris-HCl提取液提取花粉蛋白质,发现花粉蛋白质分离纯化效果存在明显差异,究其原因可能是pH值不同的影响或浸提样品浓度的差异性造成的。     

独行菜属植物种子总蛋白'种提取方法的比较

【目的】研究适用于抱茎独行菜和独行菜种子SDS-PAGE电泳和双向电泳的蛋白样品提取方法,为研究两种独行菜种子蛋白组学奠定基础。【方法】采用4种蛋白质提取方法提取种子总蛋白,测定和分析蛋白产量和SDS-PAGE电泳图谱。【结果】TCA/丙酮提取法获得蛋白量较多,杂质少,电泳条带多且清晰;裂解液提取法蛋白的产量最高,有拖尾且杂质多;Tris-HCl提取法和苯酚提取法的蛋白产量低,杂质少;裂解液提取法和苯酚提取法获得的蛋白在SDS-PAGE电泳时易产生高丰度蛋白的干扰。对比TCA/丙酮提取法和苯酚提取法获得的两种独行菜种子总蛋白SDS-PAGE图谱,发现有6条蛋白差异条带。【结论】TCA/丙酮提取法提取两种独行菜种子总蛋白效率高,纯度高且杂质少,可用于SDS-PAGE电泳和双向电泳分析;两种独行菜种子蛋白SDS-PAGE电泳的差异谱带可为甄别两种独行菜种子提供参考依据。     

几种提取马铃薯块茎蛋白质方法的比较研究

为了寻找一种适合于提取马铃薯块茎蛋白质的方法,以常用的5种方法从马铃薯块茎中提取蛋白质,用Brad-ford法测定其中蛋白质的含量,再以SDS-PAGE电泳进行分析,在此基础上对提取过程中所用Tris-HCl提取液浓度进行了优化。结果表明,利用直接提取法所获得的马铃薯块茎蛋白质,不仅含量最高（蛋白质干重为5.54mg）,而且电泳后得到的蛋白条带数量最多（达到15条）,蛋白条带清晰可见;磷酸缓冲液法次之（4.06mg）;酚提取法最差（0.14mg）。此外,以使用浓度为1.5mol/L Tris-HCl的提取液得到的电泳结果最好,条带最多且最清晰。直接提取法提取效率高、操作简便,是适合于提取马铃薯块茎蛋白质的实用方法。     

茶树叶片抗寒相关蛋白提取方法比较研究

对茶树叶片采用3种蛋白质提取方法,并对SDS-PAGE电泳结果进行了比较分析。结果表明,发现利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少。电泳结果显示,蛋白条带清晰,数量多。利用这一方法对冷驯化下不同品种茶树叶片抗寒相关蛋白进行了研究,在云抗43和舒茶早中分别发现了与抗寒相关的23 ku下调蛋白和51 ku上调蛋白,获得了满意的蛋白SDS-PAGE分析结果。     

梅花鹿角柄骨膜蛋白质组学初步研究

为了利用蛋白质组学技术探索鹿茸研究模型中的特异性蛋白,本试验探索了一套完整的梅花鹿角柄骨膜蛋白提取及纯化方法。角柄是雄鹿头上着生的永久性骨桩,鹿茸每年由该骨桩上脱落和再生。本试验采集了梅花鹿角柄骨膜,利用冷冻液氮研磨法提取蛋白样品。蛋白样品分别经过丙酮沉淀和TCA-丙酮沉淀处理。结果显示,TCA-丙酮沉淀处理后电泳图谱斑点清晰,分辨率较高,是双向电泳蛋白提取样品的较优处理方法。     

原子吸收光谱法测定不同鹿龄梅花鹿角盘矿质元素含量

[目的]为鹿角盘的临床用药和合理开发提供科学依据。[方法]以1～5岁梅花鹿的角盘为材料,采用火焰原子吸收光谱法测定其中锌、铜、锰和铁元素的含量。[结果]不同鹿龄鹿角盘中均含有丰富的锌、铜、锰和铁元素,其中5岁鹿角盘中铜和铁元素含量最高,1岁鹿角盘中锌元素含量最高,3岁鹿角盘中锰元素含量最高,其他鹿龄鹿角盘中锰元素含量差异不显著;鹿角盘中4种元素的加标回收率均在98.50%～103.52%。[结论]在梅花鹿5岁之前,鹿角盘中锌元素含量随着鹿龄的增加而减少,铜和铁元素含量随着鹿龄的增加而增加。     

鹿胃肠道寄生虫流行病学调查

为了解鹿群胃肠道寄生虫感染情况,于2006-2007年,对河南省境内的4个鹿养殖场进行了调查.在检测的499份鹿粪便样品中,发现了球虫、毛首线虫和隐孢子虫,平均感染率分别为3.81%(19/499)、1.40%(7/499)和0.40%(2/499).各品种鹿寄生虫感染情况略有差异,球虫发现于所有被检测的鹿种,包括梅花...     

醇提法制备鹿茸胶原的初步研究

采用醇提法制备鹿茸胶原,BCATM蛋白浓度测定法、RE-HPLC法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测其纯度及其分子量范围,酸水解法测定其氨基酸组成。结果表明,鹿茸醇提物中主要含有Ⅰ型胶原,含量约为70%;相对鲜鹿茸,胶原提取率为10.3%。     

梅花鹿鹿茸细胞端粒酶活性及其mRNA表达的检测

[目的]研究鹿茸生长期端粒酶的表达,为揭示鹿茸生长发育的调控机制提供了新思路。[方法]在鹿茸快速生长阶段,采用改进的TRAP（端粒重复序列扩增技术）法检测鹿茸顶端增殖区的间充质层、前软骨层和软骨层细胞及下端成熟区的端粒酶活性。同时,采用RT-PCR的方法检测各组织细胞中端粒酶催化亚基（TERT）mRNA的表达水平。[结果]在顶端增生区各组织细胞中均检测到了不同程度的端粒酶活性,间质细胞、前软骨细胞和软骨细胞中的相对端粒酶活力分别为91.2、46.4和13.7,而在成熟区组织中则检测不到端粒酶活性。RT-PCR法检测的各组织细胞中TERTmRNA的表达水平与端粒酶活性检测结果一致。[结论]在鹿茸快速生长阶段,其增殖区表达端粒酶,并且端粒酶活性随组织层细胞的分化程度的增高而逐渐降低,说明端粒酶可能在鹿茸的生长过程中起重要的调控作用。     

梅花鹿鹿茸软骨细胞的培养及X型胶原的克隆和序列分析

型胶原是肥大软骨细胞的标志物,据GenBank中收录的人、鼠、牛、猪型胶原基因的序列,进行同源性分析,在同源性高的相对保守区域设计了1对特异性引物。建立梅花鹿鹿茸软骨细胞的分离培养方法,培养鹿茸软骨细胞。提取细胞的总RNA,以总RNA为模板,用RT-PCR方法克隆了梅花鹿的型胶原基因序列为877的片段,此片段全部位于编码区,与已报道的牛的型胶原基因的序列比较,同源性达到96%。共有35个碱基发生变异。DNAStar软件分析表明,二者推导的氨基酸序列同源性为95.5%。     

梅花鹿GHR基因完整编码区序列生物信息学分析

为了研究梅花鹿生长激素受体基因的结构和功能,从GenBank中下载梅花鹿、牛、山羊、猪、北极狐、大熊猫、人、猕猴、小鼠、大鼠、鸡、家鹅、绿头野鸭及金鱼的生长激素受体基因完整编码区及氨基酸序列,对梅花鹿与其他13个物种生长激素受体基因的完整编码区及其编码氨基酸序列进行相似性比对,并基于氨基酸序列构建系统进化树,利用BioEdit 7.0等软件对梅花鹿生长激素受体基因的碱基组成及其编码蛋白的理化性质和结构特征进行生物信息学分析。结果表明,梅花鹿与山羊、牛的生长激素受体基因氨基酸序列相似性较高,亲缘关系最近;梅花鹿生长激素受体基因完整编码区长度为1 905bp,编码634个氨基酸,A+T含量高于G+C;其编码的蛋白是一种分子质量为70.927 8ku、等电点为4.56的疏水性不稳定酸性蛋白;该蛋白含有1个信号肽,属于一种分泌型蛋白;存在1个强跨膜区、36个广泛磷酸化位点,二级结构元件以无规则卷曲为主。研究结果可为梅花鹿生长激素受体基因的进一步分析提供详细的生物信息学基础资料。     

人参对梅花鹿精液品质及产仔率的影响

为了考察人参对梅花鹿精液品质及产仔率的影响,将繁殖准备期的健康雄性梅花鹿32头随机分为4个处理(T1～T4),每个处理8头,T1～T4为基础精料中分别添加人参0、0.4、0.8、1.6 g/kg。结果表明:日粮中添加人参,显著提高了梅花鹿的采精液量、精子活力、精子抗力、精子密度、精子存活时间、精子存活指数(P<0.05);显著降低了精子畸形率(P<0.05);对精液pH值的影响没有显著差异(P>0.05);提高了采精成功率和产仔率;精液云雾状T3处理组最明显,精液色泽均为乳白色。梅花鹿精料中添加人参0.8 g/kg时,对提高梅花鹿精液品质和产仔率效果最好,有利于鹿的繁育。     

我国梅花鹿蛋白质营养需要量研究进展

通过对近年来我国梅花鹿营养方面的研究回顾,着重综述了不同年龄、不同季节及不同生理时期梅花鹿的蛋白质需求,并提出了未来研究方向。     

利用Box-Behnken设计优化鹿茸糖胺聚糖的提取工艺

为了进一步开发利用鹿茸资源,在单因素试验基础上,选取提取温度、提取时间、酶用量为自变量,糖胺聚糖得率为响应值,应用Box-Behnken试验设计对鹿茸糖胺聚糖提取工艺进行了优化,模拟得出了二次多项式的回归方程,并使用SAS9.0软件对试验数据进行了分析.分析结果表明,鹿茸糖胺聚糖的最优提取条件为:酶用量为5.72%,提取温度为51.82℃,pH值为8.63,糖胺聚糖得率为2.89%.